GB/T 20753-2006
基本信息
标准号： GB/T 20753-2006
中文名称：牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定 液相色谱-紫外检测法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
发布日期：2007-03-26
实施日期：2007-03-01
出版语种：简体中文
下载格式：.rar.pdf
下载大小：450750
相关标签： 脂肪 醋酸 孕酮 甲地孕酮 残留量 测定 色谱 紫外 检测法
标准分类号
标准ICS号：食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
中标分类号：食品>>食品综合>>X04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
页数：平装16开 页数：9, 字数：12千字
标准价格：14.0 元
计划单号：20051866-T-326
相关单位信息
首发日期：2006-12-31
起草单位：秦皇岛出入境检验检疫局、上海出入境检验检疫局
归口单位：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
发布部门：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会
主管部门：国家标准化管理委员会
标准简介
本标准规定了牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的液相色谱测定方法。 本标准适用于牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定。 本标准的方法检出限：醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮均为0.010 mg/ kg。 GB/T 20753-2006 牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 GB/T20753-2006 标准下载解压密码：www.bzxz.net
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标准内容
1范画
G8/T 20753—2006
牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸氧地学酮和醋醛单地孕酮残留量的测定
液相色谱-紫外检测法
本标准规定了牛和猪脂肪中醋酸美仑孕阁、醋酸氨地孕酮利酷酸孕地孕酮残留最的液相色谱测定方法。
本标准适用手牛和猪脂中
葵仑孕酮、醋酸薇地孕酮和醋酸里地孕酶残留量的定。本标准的方法检出限繁各孕酮、酯酸甲池孕酮和酷酸氧地孕购为0.10mg/kg。2规范性引用文件
下列文件宁的条额
本标准能
的修改单（不包括断读的科容>我修是否可使用这些文伴的最新版本。GB/T 6379. 1最测照方法与
(GB/T5379.1--2884)
$O 5725-1:
G13/T 6379.2
性与再现性的基本
GB/T 6682
3原理
脂防格品经微技械
测,外标法定辑。
4试剂和材料
载方法与结暴
GB/T 6379
续验蜜周水
艺暗#
不标羅
即期的引用文作www.bzxz.net
推确磨确度
精度（正确度与精需位
00105725 4
除另有说明外，所期试剂萄为优级纯、水为GB/T6682规定的-4.1乙晴：色谱纯。
4.2醇：色谱纯。
4.3乙羧乙酷：色谱纯。
4.4：正己烷：包谱纯。
4.5氮化镁4.6氢氧化钠。
主日期随引蚊件，其随后所有
根据本标灌达虚协议的各方研究本适用于餐标准。
第1部：总则与定义
2部分：确定标测量方法量复
neq IS0 3596: k987)
住漆化，色清柱分离：紫外检
4.7盐酸，
4.8乙酸乙酯+正已烷（1+19）：壁取10ml.乙酸乙酯（4.3）与190nL正已烷（4.1）混合。4.9乙酸乙瞻十正己烷(1+4）：量取40mL乙酸乙酷（4.3）与160mL正已烷（4.4）混合。4. 10
盐酸溶液：0.2%。移取2.0mL盐酸(4.7)与水混合至1L氮化镁溶液：1.0mol/L。称取20.3g氯化链（4.5），用水溶解并定容到100mL，4. 11
玺氧化钠溶液：0..mal/L。称取1.00氧化钠（4.6），用水落解并定容到250mL。4.12
乙腊+水（65+35）：量取650mL乙（4.1)与350ml水混含，摇勾，脱气，待用。GB/T20753—2006
4.14标谁物质：醋酸美仑孕、醋酸氧地孕酮和酷酸甲地予圈，纯度≥97%。4.15标准储备落液：1000 μg/mE.崔确称取醋酸美仑孕酮、醋酸氛地孕酮和醋酸甲地孕酮(4.14)标准物质各0.0500g于50mL容量瓶中，用甲醇（4.2)搭解并定容菌刻度。标准储备溶液于4℃保存，可凝滑1年：
4.16混合标搭波I：100g/mL。分别吸取10.0mL.醋酸美仑孕酮、醋酸地孕酮和醋中地孕瞩标储备被(4.15)于100 mL容避瓶中用甲醇定容。该混合标准溶液于4亡保存，可使用1年。4.17混合标推溶液 l：1.0 μg/mL。取1.0 mL混合标准溶液 I(4.16)于100 mL容量瓶中,用中醇定容。该混合标准溶液于4℃保存,可使用6个月。4.18混合标工作溶羧：分别吸取10μL,20μL,40uL,80μL100μI.抿合标推溶液（4.17)添加到980,970μL,950,910μ，890uL乙腊+水（65+35)（4,13)中再加人10μ酸游(4.10)，混匀，得到浓度为0.010μg/mL.0.020μg/mL.0.040μg/mL.0.080μg/mL和0.10μg/mL混合标准作溶液，该溶液当且制备。4.19额丙基国相萃取柱载相当者:3 mL,500 mg。使用前分别用 5 rmL乙酸乙醋和 6 tmL正己烷游洗，保持柱体润。
4.20滤膜：0.2um。
5仪器
5.1高效液相色潜仪：配有紫外检测器。5.2分析天平：感整0.1mg和0. 018：5.3氟气浓缩仪。
5.4固相萃取装置：配有真空泵。5.5狐温离心机：—5℃至塞温，最大转速 5 000 t/min5.6液体混匀器。
5.7温水浴。
5.8微波炉。
5.9移液器:10μ~100 μL 和100 μ-1000 μ6试样的制备与保存
6.1试群制备
犯大约5g的猪或牛脂肪组织切成小块，然后放人底部塞有玻璃棉的遍斗中，将遍斗放入150mL.的烧杯中，将烧杯鼠于微波炉内。使用最大功率,加热30 s～60 s,如果脂肪设有融化,可在间随 30s~60 s以后重复加热30 s～60 s,直到有液体脂肪流出，通过漏斗滴人烧杯中。根据需要熬制的脂脂量，可重复圳热。把制好的脂防油放人样品瓶中，密封，并做上标记。6.2试样保存
如果熬制好的脂防液体不文刻测定，则将熬制好的脂肋样品于一18℃冰柜中，冷冻保存。7测定步骤
7.1提取
称取2g脂肪样品，精确到0.0g，暨手50mL具塞离心管中，加人5mL乙，手60℃水浴中保持3mi,使固体脂肪融化。用液体混匀器(5.6)祸旋13mit1，于：-5℃以3500 z/min离心7min,吸取上消液至15 tnL具塞聚两烯离心管中,而向沉淀物中加人5mL乙腈罩复提取-一次，合非上清液。间合并的乙瞻提取被中加人2mL正己烧，涡旋1 in，于一5℃以3500 r/min离心5tnin,弃去正已烷层，乙相再用2mL正已烷重复洗漆次，齐去正己烧层。艺腊提取液手60℃用氮气浓缩仪吹干。2
GB/T20753—2006
向乙提取液（7.1)中依次相人4mI.正已烷、1mL载氧化溶被（4.12）和0.5ml.化镁落液（4.11），于液体混匀器上快邀漏匀10s，在60℃水浴中保持15min，于一5℃以35001/min离心5min，骏取上湾液至15m上戒璃离心管中：间沉淀物中再加人4mL正已烷，勾，于60℃水中加热15min后，于一5心以3500z/min离心5min，合并上淆液。于60℃用氮气浓箱仪吹干，用1.0ml.正己烷禧解溅渣，待净化。
7.3净化
将上述样液（7.2)移人领两基固相萃取柱中（4.19），用2mL正已烷分两次润洗玻璃试管，洗液也移入周相萃取柱中。待样液流出后，依次用5mL正己烷和6mL乙酸乙酯十正已烷游液（4.8）洗回相萃取柱，淋洗液流出后，固相萃取柱排干2min，最后用3.5mL乙酸乙酯+正己烷溶液（4.9）洗脱，洗脱液收集于另一15mL玻瑙离心管中，于60℃用氮气浓缩仪吹平。残余物用990μL乙+水（4.13）涡旋溶解，静止15min后，加人10ml就酸落液（4.10），混匀，过0.2um滤膜后，供液相色谱测定。7.4剐定
菠相色件
色谱柱：KronasilC，5μm.250mmX4.6mm(内径）或相当者；）
预柱C，5m12.5m×2，6mm（内径）；流动租：之情-水（85--35)
流遗：1.0mL/mia：
扯漏：35℃
检测波长：292nm；
进样量：40μl。
液相色谱测定
用混合标准工作游液（4.18)分别进样，以标施工作溶液浓度为横坐标，以峰而积为纵坐标，绘制标推工作也绒。用标准工作曲线对样品进行定量，祥品游液中醋酸美仑孕酮、酸氛地孕调和醋酸甲地孕酮的响应值均应在仪器测定的线性范圈内。在上述色谱条件下，醋酸美仑孕酮、醋酸氮地孕酮和酸学地孕酮标准物质的液相色谱图参见图A.1.7.5平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6回收率试验
阴性样品中添加标谁溶液，按7.1一7.3操作，测定后计算样品添加的回收率8结果计算
结果按式(1)计箕：
Vv1000
式中：
X试样中被组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）：c--从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每意升(rg/mL)：V—-试样溶液定容体积，单位为离升本标准的精密度据是按照CB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值3
GB/T 20753--2006
以95%的可信度来计算。
在重复想试验条件下，猴得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复桃限，试样中被测物的含盘范菌及重复性方程见表1轰2。1牛脂肪中三种孕药的含盈范围及复性和再现性方程化合物名称
殷美仑孕醒
酷酸甲地孕
含量范国/《Img/kg）
0.010--0,050
0, 010--0.060
0.01Qa0.050
注：m为两次测定结果的算术购离值裘2
北合物名称
瑞酸美仑李
阳酸地学园
能酸甲地妞
重复性限
r=0. 133 8 + 0, 253 2
r=0. 085 7 m
兰种孕酮的含盘范围及盈愛性和博现性游程/（m/kg
注：丽为两次洲病结架离算术平均值如果两饮测定
9.2再现性
在再现性试验察
借超过重复
非，获得的俩
量范谢及再现性方囊1和表2。
应经欲
双葱性阴，
再规性限R
R==0. 134 1 m
R-0.122 8 m
再现性限R
0. 677 1 m
R0. @g1 7 m+1. 223 5
0. 0 3 m-1. 074 2
版两次单个试验的测定。
测试结果的绝对差值？
避再现性限试样中被测物的贪
谢录A
（料性附最）
标准物质液相色谱图
GB/I20753—2006
醋酸美仑孕丽、醋酸氰地孕酮和酷酸甲地孕丽标推物质的液相色谱图，见图A.10.0008-
酯鞍甲逊街
2-醋教氧象
3-错酸美补
酷酸美仑孕
0 12, 0作 . G0 J3.00 14. 0 15. 00finin
解标准物质的馥相色谱图
GB/T20753—2006
咐录B
（资料性附录）
回收率
本方法中三种孕解添加浓度及其平均画收率的试验数据，见表B.1。表B.1三种孕翻添加浓度及其平均回收率的试验数据(\=10)化合物名称
醋酸美仑予酮
醋段地孚蓝
醋酸市地孕
添加度/（ng/kg）
均回收率/（%)
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G8/T 20753—2006
牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸氧地学酮和醋醛单地孕酮残留量的测定
液相色谱-紫外检测法
本标准规定了牛和猪脂肪中醋酸美仑孕阁、醋酸氨地孕酮利酷酸孕地孕酮残留最的液相色谱测定方法。
本标准适用手牛和猪脂中
葵仑孕酮、醋酸薇地孕酮和醋酸里地孕酶残留量的定。本标准的方法检出限繁各孕酮、酯酸甲池孕酮和酷酸氧地孕购为0.10mg/kg。2规范性引用文件
下列文件宁的条额
本标准能
的修改单（不包括断读的科容>我修是否可使用这些文伴的最新版本。GB/T 6379. 1最测照方法与
(GB/T5379.1--2884)
$O 5725-1:
G13/T 6379.2
性与再现性的基本
GB/T 6682
3原理
脂防格品经微技械
测,外标法定辑。
4试剂和材料
载方法与结暴
GB/T 6379
续验蜜周水
艺暗#
不标羅
即期的引用文作www.bzxz.net
推确磨确度
精度（正确度与精需位
00105725 4
除另有说明外，所期试剂萄为优级纯、水为GB/T6682规定的-4.1乙晴：色谱纯。
4.2醇：色谱纯。
4.3乙羧乙酷：色谱纯。
4.4：正己烷：包谱纯。
4.5氮化镁
主日期随引蚊件，其随后所有
根据本标灌达虚协议的各方研究本适用于餐标准。
第1部：总则与定义
2部分：确定标测量方法量复
neq IS0 3596: k987)
住漆化，色清柱分离：紫外检
4.7盐酸，
4.8乙酸乙酯+正已烷（1+19）：壁取10ml.乙酸乙酯（4.3）与190nL正已烷（4.1）混合。4.9乙酸乙瞻十正己烷(1+4）：量取40mL乙酸乙酷（4.3）与160mL正已烷（4.4）混合。4. 10
盐酸溶液：0.2%。移取2.0mL盐酸(4.7)与水混合至1L氮化镁溶液：1.0mol/L。称取20.3g氯化链（4.5），用水溶解并定容到100mL，4. 11
玺氧化钠溶液：0..mal/L。称取1.00氧化钠（4.6），用水落解并定容到250mL。4.12
乙腊+水（65+35）：量取650mL乙（4.1)与350ml水混含，摇勾，脱气，待用。GB/T20753—2006
4.14标谁物质：醋酸美仑孕、醋酸氧地孕酮和酷酸甲地予圈，纯度≥97%。4.15标准储备落液：1000 μg/mE.崔确称取醋酸美仑孕酮、醋酸氛地孕酮和醋酸甲地孕酮(4.14)标准物质各0.0500g于50mL容量瓶中，用甲醇（4.2)搭解并定容菌刻度。标准储备溶液于4℃保存，可凝滑1年：
4.16混合标搭波I：100g/mL。分别吸取10.0mL.醋酸美仑孕酮、醋酸地孕酮和醋中地孕瞩标储备被(4.15)于100 mL容避瓶中用甲醇定容。该混合标准溶液于4亡保存，可使用1年。4.17混合标推溶液 l：1.0 μg/mL。取1.0 mL混合标准溶液 I(4.16)于100 mL容量瓶中,用中醇定容。该混合标准溶液于4℃保存,可使用6个月。4.18混合标工作溶羧：分别吸取10μL,20μL,40uL,80μL100μI.抿合标推溶液（4.17)添加到980,970μL,950,910μ，890uL乙腊+水（65+35)（4,13)中再加人10μ酸游(4.10)，混匀，得到浓度为0.010μg/mL.0.020μg/mL.0.040μg/mL.0.080μg/mL和0.10μg/mL混合标准作溶液，该溶液当且制备。4.19额丙基国相萃取柱载相当者:3 mL,500 mg。使用前分别用 5 rmL乙酸乙醋和 6 tmL正己烷游洗，保持柱体润。
4.20滤膜：0.2um。
5仪器
5.1高效液相色潜仪：配有紫外检测器。5.2分析天平：感整0.1mg和0. 018：5.3氟气浓缩仪。
5.4固相萃取装置：配有真空泵。5.5狐温离心机：—5℃至塞温，最大转速 5 000 t/min5.6液体混匀器。
5.7温水浴。
5.8微波炉。
5.9移液器:10μ~100 μL 和100 μ-1000 μ6试样的制备与保存
6.1试群制备
犯大约5g的猪或牛脂肪组织切成小块，然后放人底部塞有玻璃棉的遍斗中，将遍斗放入150mL.的烧杯中，将烧杯鼠于微波炉内。使用最大功率,加热30 s～60 s,如果脂肪设有融化,可在间随 30s~60 s以后重复加热30 s～60 s,直到有液体脂肪流出，通过漏斗滴人烧杯中。根据需要熬制的脂脂量，可重复圳热。把制好的脂防油放人样品瓶中，密封，并做上标记。6.2试样保存
如果熬制好的脂防液体不文刻测定，则将熬制好的脂肋样品于一18℃冰柜中，冷冻保存。7测定步骤
7.1提取
称取2g脂肪样品，精确到0.0g，暨手50mL具塞离心管中，加人5mL乙，手60℃水浴中保持3mi,使固体脂肪融化。用液体混匀器(5.6)祸旋13mit1，于：-5℃以3500 z/min离心7min,吸取上消液至15 tnL具塞聚两烯离心管中,而向沉淀物中加人5mL乙腈罩复提取-一次，合非上清液。间合并的乙瞻提取被中加人2mL正己烧，涡旋1 in，于一5℃以3500 r/min离心5tnin,弃去正已烷层，乙相再用2mL正已烷重复洗漆次，齐去正己烧层。艺腊提取液手60℃用氮气浓缩仪吹干。2
GB/T20753—2006
向乙提取液（7.1)中依次相人4mI.正已烷、1mL载氧化溶被（4.12）和0.5ml.化镁落液（4.11），于液体混匀器上快邀漏匀10s，在60℃水浴中保持15min，于一5℃以35001/min离心5min，骏取上湾液至15m上戒璃离心管中：间沉淀物中再加人4mL正已烷，勾，于60℃水中加热15min后，于一5心以3500z/min离心5min，合并上淆液。于60℃用氮气浓箱仪吹干，用1.0ml.正己烷禧解溅渣，待净化。
7.3净化
将上述样液（7.2)移人领两基固相萃取柱中（4.19），用2mL正已烷分两次润洗玻璃试管，洗液也移入周相萃取柱中。待样液流出后，依次用5mL正己烷和6mL乙酸乙酯十正已烷游液（4.8）洗回相萃取柱，淋洗液流出后，固相萃取柱排干2min，最后用3.5mL乙酸乙酯+正己烷溶液（4.9）洗脱，洗脱液收集于另一15mL玻瑙离心管中，于60℃用氮气浓缩仪吹平。残余物用990μL乙+水（4.13）涡旋溶解，静止15min后，加人10ml就酸落液（4.10），混匀，过0.2um滤膜后，供液相色谱测定。7.4剐定
菠相色件
色谱柱：KronasilC，5μm.250mmX4.6mm(内径）或相当者；）
预柱C，5m12.5m×2，6mm（内径）；流动租：之情-水（85--35)
流遗：1.0mL/mia：
扯漏：35℃
检测波长：292nm；
进样量：40μl。
液相色谱测定
用混合标准工作游液（4.18)分别进样，以标施工作溶液浓度为横坐标，以峰而积为纵坐标，绘制标推工作也绒。用标准工作曲线对样品进行定量，祥品游液中醋酸美仑孕酮、酸氛地孕调和醋酸甲地孕酮的响应值均应在仪器测定的线性范圈内。在上述色谱条件下，醋酸美仑孕酮、醋酸氮地孕酮和酸学地孕酮标准物质的液相色谱图参见图A.1.7.5平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6回收率试验
阴性样品中添加标谁溶液，按7.1一7.3操作，测定后计算样品添加的回收率8结果计算
结果按式(1)计箕：
Vv1000
式中：
X试样中被组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）：c--从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每意升(rg/mL)：V—-试样溶液定容体积，单位为离升
GB/T 20753--2006
以95%的可信度来计算。
在重复想试验条件下，猴得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复桃限，试样中被测物的含盘范菌及重复性方程见表1轰2。1牛脂肪中三种孕药的含盈范围及复性和再现性方程化合物名称
殷美仑孕醒
酷酸甲地孕
含量范国/《Img/kg）
0.010--0,050
0, 010--0.060
0.01Qa0.050
注：m为两次测定结果的算术购离值裘2
北合物名称
瑞酸美仑李
阳酸地学园
能酸甲地妞
重复性限
r=0. 133 8 + 0, 253 2
r=0. 085 7 m
兰种孕酮的含盘范围及盈愛性和博现性游程/（m/kg
注：丽为两次洲病结架离算术平均值如果两饮测定
9.2再现性
在再现性试验察
借超过重复
非，获得的俩
量范谢及再现性方囊1和表2。
应经欲
双葱性阴，
再规性限R
R==0. 134 1 m
R-0.122 8 m
再现性限R
0. 677 1 m
R0. @g1 7 m+1. 223 5
0. 0 3 m-1. 074 2
版两次单个试验的测定。
测试结果的绝对差值？
避再现性限试样中被测物的贪
谢录A
（料性附最）
标准物质液相色谱图
GB/I20753—2006
醋酸美仑孕丽、醋酸氰地孕酮和酷酸甲地孕丽标推物质的液相色谱图，见图A.10.0008-
酯鞍甲逊街
2-醋教氧象
3-错酸美补
酷酸美仑孕
0 12, 0作 . G0 J3.00 14. 0 15. 00finin
解标准物质的馥相色谱图
GB/T20753—2006
咐录B
（资料性附录）
回收率
本方法中三种孕解添加浓度及其平均画收率的试验数据，见表B.1。表B.1三种孕翻添加浓度及其平均回收率的试验数据(\=10)化合物名称
醋酸美仑予酮
醋段地孚蓝
醋酸市地孕
添加度/（ng/kg）
均回收率/（%)
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