本标准规定了酶法测定动植物油脂中顺，顺1，4-二烯结构多不饱和脂肪酸的方法，实际上就是指具有ω3和ω6型多不饱和结构的亚油酸(9 12-十八碳二烯酸)和亚麻酸(9 12 15-十八碳三烯酸)系列。本标准不适用于油脂中ω8和ω9型多不饱和脂肪酸及含有支链脂肪酸的测定。 GB/T 21495-2008 动植物油脂 具有顺，顺1，4-二烯结构的多不饱和脂肪酸的测定 GB/T21495-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

CS 67. 200. 10
中华人民共和国国家标
GB/T21495—2008/ISO7847:1987动植物油脂
具有顺，顺14-一烯结构的
多不饱和脂肪酸的测定
Animal and vcgetabie fats and oilsDcterminatign of polyunsaturated fatty acidwith cis,cis 1,4-dicnt structurc(IS0 7847:1987,IDT)
2008-03-06发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标淮化管理委员会
数码防伪
2008-08-01 实施
本标准等同采用1SC)7847:1987《动植物消脂定》（英文版）
为侦于使用,本标滩作『下列编辑性修改：a）将\本国际标准\改为“本标准”用小数点“，\代暨作为小数点的逗号“，”；h）
删除国际标滩的前言；
用衍学“L\代替“}\表示\升”；用GB/T15687代替了ISO561.
本标的附录A为规范偿谢录。
本标准良国家粮食局提出。
本标滤由企国粮油标准化技术委员舍归口。本标准起草单位：国家粮食局科学研究院。本标燕主要起草人：张紫、薛雅琳、祖丽业。GB/T 214952008/1SO 7847: 1987有顺，顺1，4-二烯结构的多不饱和腊翁酸的测http：/
unurFoo
1范围
动植物油脂
GB/F 21495-2008/1S0 7847: 1987具有顺。顺1。4-二烯结构的
多不饱和脂肪酸的测定
本标规定了酶法测定动植物浒脂中顺，顺1.4二烯结构多不饱剂脂防酸的方法·实际上就是指其有u3和w6多不饱和结构的亚油酸（S，12-1八碳二烯酸）箱亚麻酸（9，12，15-十八碳三烯酸）系列其结构是
本标准不适用于油脂中8和9 多不饱乱脂防酸及含有支链脂肪酸的测定：2规范性引用文件wwW.bzxz.Net
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款：凡是注口期的引月文件，其随后所有的修改单（不指就误的内容）战修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文性的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本用于本标准：CB/T15687游脂试样制备（GB/T15687—135，cqVISO661：1989)1505555动植物油聪取样
3术语和定义
下列术语和定义造用于本标准.
顺:顺 1,4-二烯脂肪酸
cis.cis.4-aienefattyacids
本标准规定的方法所测定的脂肪酸；以样品的质量分数表示。4原理
在室温条件下，样品急化后产生脂防酸，有顺，顺1，4-二烯结构的脂助酸被酶促氧化，产生的氧化酸在最人吸收波长（约235nrn）下测定吸光度，同时做样品空白试验，计算样品中多不钩密脂防酸的含量，
5试剂和材料
所用试剂均为分折纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。5.1正己烷
5.2盐酸溶液
r(HCI) - 0, 5 mol/L.
5.3氢氧化钾-z醇溶液[c(KOH）~0.5mol/L]5,3.1贮备液
称取65g氢氧化钾（86头氢氧化钾）溶于约80ml水中，冷都后稀释至10CmL合品伙伴网
GB/T 21495—2008/IS0 7847 : 19875.3.2稀释液
吸取5ml整备液(5.3.1)用体积分数为95%的乙醇稀释至100mLc比此溶凌应临月时现配。
5.4硼酸钾缓冲液
c(K,B0.) =1, C mol/L(pH - B. 0),称取61.9谢酸和25.0g氢氧化饰（86%氢氧化钾）加热税伴溶了约800ml水中，冷却垒室温测定pH.如有必要，可用盐酸或氢氮化铆溶液调PH至9.0,然后期水稀释至1CCOm1.：5.5硼酸钾缓冲液
c(K,B0) -0. 2 rol/L(pH-9.1
将200ml.1.0 mol/L的硼酸钾缓冲液(34用k释至1000n，用冰冷都。5.6脂肪氧化酶稀释液
5. 6. 1 脂肪氧化酶
骑的活至少为oQmg［—
个悔的活力单位（U)笼义效实验蔡件下，每分钟可氟化1.2×10*umo油酸需的幕量1。
在冻1状态下，一18意或更假
注：抵活力的序制新整好数线某偏循制刻得到更女
5. 6. 2 贮备液
称取相当于酶醇新的
该贮备液在→或更低的温演
5.6.3工作液
将 2 mL贮稳 6. 2)和 8
5.7脂肪氧化酶活液
吸取数意膠筋氧化游稀释液器
（6.6)中加热至少熟稀释液的
5.8参比油
如葵花籽油或棉酒已如多
表示），并假定其全为顺，4-二浴冰漆
水浴的液面
注：无位胃异构和儿案忆静甘油载油酸酯可作为5.9氮气
纯度不低于99.5%（质量）
6攸器
新用坡璃器血应非常于净。
实验室尚用仪器：北其是下列仪器。6. 1 其塞容量瓶:100 mL。
6.2单标移液管：1L.10nL,20mL
6.3刻度移液管:1 rL,10 nL，
提稳定的
coU/n激-100%o1/rng范用内的的mo1/L翻酸缓汁液（5.5)中。
液（5.5）混
射在试管壁更。将试管浸人沸水浴雄确测得,并圾参比油的质量分数6.4只寒试管：10mL，下燥，可用具恶分光治度计比免杯（见6.8)替代（见9.6.2的注1)。6.5高心机：10ml.离心试管。
6. 6 水浴沸。
6.7水浴：温度保持衣（50士2)℃6.8分光光度计：可于235mm测量吸光度，配有10rnm有英比色杯。分析天平，
http
7取梓
按 ISO 5555 进行
8试样制备
按GB/T15687逃行
9分析步骤
9.1验证实验
GB/T 21495—2008/ISO 7847: 1987在分析试样时，建议与试样平行分板品确够丽饱和脂助酸（38）含量的参比泣，以核对分析步骤，9.2试样
称取50mg～200藏于预期的多不饱和脂胎暖含量改栏（第8章）精拍至）1mg，丁100ml容量瓶Ac6.
注：当所取试祥数量朝驾乎10mg9.3皂化
用单标移液真吸取1
的空气。加塞，激叠瞻处,皂化
如果样品随烤点高于案湿，
分钟，以加速皂
注：廚录A薪
一种特刷避
9.4测试液随备
电化后，用香一的单标移液
10mL热酸溶（5.），加水稀香
必要，可于温合泰新定容到
离漆表沉淀。
用单标移液吸取容
100m1.容量瓶（61容量瓶
款摄动容量
祥品的容量瓶（
阶段如有沉行
很少时，则应吸移2L鑫容最瓶B市落量大吸我变应在0.0%~0.5之间馨量瓶A用氮气（5.9)置换容量瓶中混匀。
耀丁（5012C的水浴（6.7)中加热数63
，1. 0 mo1/L硼酸钾缓冲液(5.4)和谨据数次，察量读免产生泡沫。如有藏数亳升混鲁液案离心试管中,离心分离心分离的上精液）至另一标为13的预计读样中客有的多不他和酷肪酸用单标移液管（6.20tmnL1.0mul/L硼酸钾缓冲液(5.4)率容影3,川m水至刻斑。加塞混勾，尽最避免产生泡沫（现注》这个步骤中轻孩的混浊不会扰好续的测是。注：电化后，得乱是的稀移差睿然瓶AP启的浓度约为1盘，容母适中皇的浓约为ICg/ml。泡沫中皂的浓度要高了率液本陈中皇的浓鼠“然将液球个容量瓶安转移现另一个容盘瓶中时，如有抱添精附在移没管上，可能导致转移了装短过些的脂猜酸9.5比对实验
测定（9.7)同时进行比对实鉴采用同样分析表骤，低以0.1mL脂动氧化酶灭活液（5.7)代替脂防氧化翻释释液（5.6)米制备样品补偿溶液9.6标准工作曲线
9.6.1制备标准溶液
称取相些于含约10ng多不饱和脂筋酸的参比泊于10uml.容量瓶（6.1)中，精确至0.1mg。按照9.3及9.4的第一小节选行皂化关薪释至刻度：用单标移液管（5.2)吸液10mL上述溶液至第：个100ml.容量瓶（6.1)中，用刻度移液管(6.3)加入18L1.Gmol/L酸御缓冲液（5.心）用水稀释至刻度，用刻度移波管(5.3)从第二个察量瓶F依次骏攻1mL.2mL.4ml，5l,ml.i10mL溶液，分3
合品伙伴网httn+
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GB/T 21495-2008/1SO 7847:1987别置于6个1001L容量瓶（6.1)中，均用0.2mol/L酸钾缓冲液（5.5)释至刻度。9.6.2酶促氧化
用1InL刻度移液管（6.3)分别吸取0.1ml.脂氧化酶稀释液(5.6)置于6支试管（6.4）中（见浮1），在每支试管中分别添加3m.相应的标准溶液（每支试管一人稀释），轻轻震葛使溶液混与（见注）。
将试管静置 20 min~~30 min
注1：东化过程可在具塞分光光度计比免杯（见6.8)中进行，以免在测量吸光度前再将溶激转移期比色杯中，注2：试管中品的处理很重要。将内签跑初次混合后，不要向进影混合，选一步泌合将导教标推溶液、样品补偿济波及测试游液的吸光变增加。此外如果比色杯中济液一巨被倒报，并装入其他落液，则不能核对该测母值是衍正确，溶液处过程中造戒吸光度增加的点因尚汇法解释。因此每个实验室要确保分析沙骤一致。9.6.3分光光度计量
将每个试管中的内容物转移到右英比色杯（见6.8)中：使用分光光度计（6.8），于最大吸光波长（约235nm）下测量每个标准溶液的吸光度，以样品补偿溶液（见9.5）调节仪器零点，取街个标准溶液两个吸光度读数的平哟值。
9.6.4绘制标准曲线
以吸光度的平均值对史已知组成的参比油计算所得多不饱和脂防酸的质量作图。绘一条通过所有作图点的直线，该线应通过原点。9.7测定
9.7.1酶促氟化
用11=1L移液管(6.a)吸移0.1mL脂游氧化酶释液(5.6)至试管(6.4)中（见9.6.2的准1)。再从容量瓶B中吸取3mL测试溶液（9.4)加至试管中，轻轻震满使溶液混匀（见9.6.2的注2).将试管置20min~30min
9.7.2分光光度计测定
将试管中的梓品转移至有英比色杯（见6.8）中，用分光光度计（6.8），于最大毁收波长（约235nm）下测量测试溶液的吸光度，用样品补偿溶液（见9.5）调节仪器露点，取阴个吸光度读数的平均值，从标谁二作曲绒（9.6.4)中该出脂酸的质量：注：以补偿溶没调节零点可以补偿当于样品中原有的共钜二烯酸产生的吸光度。样品补偿落液的吸光度底以水为参比进行核对，如果与测试溶液柜出+此值太高，落使精密度降低。9.8测定次数
同一个试样测定两次
10结果计算
10.1计算方法
试举中多不饱和脂肪峻的含量（X），数值以质量分数（%)表示，按下列公武计算：X=Vmo
X-试样功多不饱和脂肪酸的含量，单位为克每百克/0营）：mo——试样的质最，单位为毫克(mg）)；m—从标准工作而线上读取的多不饱剂脂酸的质量，单位为毫克（mg）：V.一从容量瓶A中所吸瑕液休(通常为！ml)的毫升数值，注：按比获得的结果是整个油脂中多不饱和脂肪胶的命骨，而非油脂中唱航最总重宁多不饱利脂肪哦的含壶。10.2需蔓性
当多不饱和脂防峻含量在10%～70%（质量分数）范围内时，同一分析者，在同个实验条件下，对4

G3/21495--2008/150 7847:1987同样品，快速连续进行两次独立测试，结果相差不能超过3.5%（质最分数），1试验报
测定报告应详细说明使册的方法及测试结果，清楚标明结果的表示力法。应注明本标准中未则定的任何摸作细节，战可选择的操作给节，及而能影实验结果的任何意外情说的细节。测定报告应括完整别样品所需的全部信息。5
http://foodmate.netGB/T21495--2008/1S0)7847：1987附录
（规范性附录）
替代的皂化方法
用数毫升正己烷（5.1)溶解试样（9.2），用同样的溶剂稀释系刻度，并混勺，月单标移液管（6.2)吸取1.0ml.该溶液至已事光用氮气坎洗拍100m1.容带瓶(6.1)中。如预期样品中多不饱帮道肪酸的含量狼低，剪吸最2mL～4mL溶液至容量瓶B中，在缓和的氮气流中使溶剂宠全燕发向容登瓶B内的无溶剂样品巾加2rL氢氧化钾乙溶液（5.3）,然后塞：将容量柜置一暗处，皂化至少4h,以后按9.7进行，
http://foodmate.netGB/T 21495-2008
中华人民共利国
国家标推
动植物油脂
真有顺.1,4-二烯结构的
多不饱和脂肪酸的测定
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2008年：月第一版
2908年5月第-次印制
书号：155060-31306
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