本标准规定了食品中泛酸的测定方法。本标准适用于食品中泛酸的测定。本标准的检出限：食品，当称样量为５ｇ时，检出限为２５０μｇ／１００ｇ；营养素补充剂等，当称样量为１ｇ时，检出限为２００μｇ／１００ｇ。 GB/T 5009.210-2008 食品中泛酸的测定 GB/T5009.210-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.210—2008
食品中泛酸的测定
Determination of pantothenic acid in foods2008-11-21 发布
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2009-03-01实施
中华人民共和国
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食品中泛酸的测定
GB/T 5009. 210—2008
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2009年3月第一版
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GB/T 5009.210—2008
本标准修改采用国际分析家学会（AOACINTERNATIONAL)中AOAC945.74&维生素预混料中泛酸的测定》(Pantothenicacid in vitaminpreparations)。本标准与A0AC945.74相比主要差异为：修改「试样提瑕步骤：
增加了试样酶解处埋；
扩人『适用范围。
本标准的附录 A 为资料性附录。本标推由中华人民共和国卫生部提出并如口。本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、辽宁省疾病预防控制中心、渐江省医学科学院、北京市营养源研究所。本标准主要起草人：工竹、杨晶明、张旭、马景宏、盾靓、唐华澄、王克诚。品成伴网httn：/
1范围
食品中泛酸的测定
本标准规定了食品中泛酸的测定方法，本标准适用于食品中泛酸的测定。GB/T 5009.210—2008
本标准的检出限：食品，当称样量为5良时，检出限为250ug/100g；营养素补充剂等，当称样量为1g时，检出限为200μg/100g。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标推，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注\期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—20081SO3696：1987，MOD）3原理
泛酸是植物乳杆菌Lactobacittusptantarum（ATCc.8n11）生长所必需的营养素，在·-定控制条件下，植物乳杆菌的生长响应与培养基中泛酸含量早线性关系：用比独法测定试样液中细菌增殖后的混浊度，通过与标准曲线相比较计算出试样中泛酸的含最。4试剂
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的二级水，4. 1 冰乙酸(C,HO,)。
4.2三水合乙酸钠(C.H,ONa·3HzO)。4.3氢氧化钠（NaOH)。
4.4盐酸(HICI)。
三羟甲基氨基甲烷[Tri（hydroxymethyl）aminomethane,CH，NO,]。4.5
4.6碳酸氢钾（KHCO）。
4,7 碳酸钠(Na.CO,)。
4.8磷酸氢二钾(K,HPO,）。
磷酸二氢钾(KIIPO,·3H,O)。
4.10 硫酸镁(Mg50,·7H20)。
4.11氯化钠(NaCl)
4.12硫酸亚铁(FcSO4·7H,0)。
4.13硫酸锰（MnSO·Hz0)。
4.14无水乙醇(CH,O)。
4.15Dowex1x8\,200日~400日。1）由Fluck公可提供的产品的商品名。给出这一借息是为厂方使本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1
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4.16碱性磷酸酶(alkalinephosphatase)\。鸽子肝脏丙提取物（liveracetoncpawder）\。4.17
4.18D-泛酸钙(CHazCaNzO)：纯度98%。4.19
葡萄糖（CHO）。
蛋门陈（peptone）。
酵母提瑕物（yeastextract)。
琼脂。
甲苯(C,H。)
漠磷香草酚蓝（CzH2BrzO,S）：指示剂。溴甲酚绿(CHBrOsS)：指示剂。
乙酸溶液(0.2mol/L）：吸取11.8ml冰乙酸（4.1），加水稀释至1000mL。乙酸钠溶液（0.2mol/L）：称取27.2g三水合乙酸钠(4.2).加水溶解并稀释至1000mL。氢氧化钠溶液（1mol/L)：称取4.0多氢氧化钠（4.3），加水溶解并稀释至100mL。4.29
氢氧化钠溶液(0.1mal/1.)：称取0.4g氢氧化钠(1.3),加水溶解并稀释至100mL。4.30
盐酸溶液（1mol/L）：吸取83mL盐酸（4.4),用水稀释至1000mL4.31Tris缓冲液：称取121g二轻甲基氮基甲烷（4.5）溶于500mL水中，用冰乙酸（1.1)调pII至8.0～8.3,加水至1000mL，贮存于2℃~4℃冰箱中,可保存两周。4.32生理盐水：称取9g氯化钠（4.11)溶于1000mL水中。临用前，取生理盐水分装于2支4支试管中，每支约加10ml.，塞好棉塞，于121℃高压灭菌10min后备用。4.33乙醇溶液（1+4）：量取200mL无水乙醇（4.14)与800mL水混勺。4.34碳酸钠溶液(0.08mal/L)：称取0.8%g碳酸钠（4.7),加水溶解并稀释至100mL。4.35碱性磷酸酶溶液：称取2g碱性磷酸酶（4.16)加水溶解并稀释至1.00mL。临用现配，用前2℃~厘℃冰箱冷藏。
4.36碳酸氢钠溶液（0.02mol/L）：称取1g碳酸氢钾（4.6），加水溶解并稀释至500mL。混勾。4.37活化Dowcx1X8：称取100gDowex1X8(4.15）丁锥形瓶中，加人1L盐酸溶液（4.30）丁振荡器上充分抵摇10min，用铺有滤纸的布氏漏斗过滤。再加人1L盐酸溶液重复振摇、过滤。加人1L水振摇10min，过滤，用水洗涤Dowex1x&10次。逐滴加入Tris缓冲液（4.31）谢节Dowex1X8pH至8.02℃～~1冰箱保存，两天内用完。4.38鸽子肝脏提取液：配制此试剂前一天将所用容器放人2℃～4℃冰箱中冷藏过夜。4.38.1称取30g鸽子肝脏丙阐提取物(4.17)放入冷的研钵中，冰浴条件下分两次加人300mL碳酸氢钾溶液（4.36)研磨至勾浆，转人预冷的具塞离心管中，盖好塞后充分振摇，一20℃冷冻10min后以3000r/min离心5min，将上清液转至500mL预冷的广口瓶中。4.38.2加150g活化Dowex1x8（4.37），放人冰浴中振摇5min，将混合液倒人离心管中，30001/min离心5min。将上清液移人另-500mL预冷的广口瓶中，一20℃冷冻10min。4.38.3重复4.38.2步骤操作一次。将上清液分装于具塞试管中（每管大约3mI.），一20℃冷冻保存。用前化冻并保存于2℃~4℃冰箱内直至用时4.39泛酸标准储备液（10.0μg/mL）：精确称取43.5mg预十燥至恒重的D-泛酸钙（4.18）于I000mL容量瓶中，用约500ml.水溶解，加人10mL乙酸溶液（4.26）100mL乙酸钠溶液（4.27），用水定容至刻度。加入3滴～5滴甲苯（1,23)于2℃～4℃冰箱中贮存两年。由Sigma公司提供的产品，给出这一信总是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他23
等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。2

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4.40泛酸标准中间液(1.00 μg/mL):准确吸取25.0 ml.泛酸标雅储备液(4,39)置于1 000 mL容量瓶中,加人10 mL乙酸溶液(4.26）100mL乙酸钠浒液(4.27),用水容至刻度。灿人3滴~5滴甲苯(4.23)于2℃～4C冰箱中贮存-年。4.41泛酸标准工作液(0.020 μg/mL)准确吸取 2.00 mL泛酸标准中间液(4.40)置于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度。此标雅工作现用现配，4.42溴麻香草酚蓝溶液：称取0.1g溴麝香草酚蓝（4.24)于研钵中，加1.6mL0.1mol/L氢氢化钠溶液（4.29）研磨，加少许水继续研磨率完全溶解，用水稀释至250ml.此指示剂变色终点为草绿色(pH 6. 8)。
4. 43溴甲酚绿溶液;称取 0, 1 β溴甲酚绿(4. 25)于小研钵中,加 1. 4 mL 0. 1 mol/L 氢氧化钠溶液研磨(4.29),加少许水继续研磨，直至完全溶解，用水稀释至250 tL。此指示剂变色终点为草绿色(pH 4. 5).
4. 44甲盐溶液:分别称取 25 磷酸氢二钾(4. 8)和 25 名磷酸一氢钾(4. 9),加水溶解并稀释至500 mL。加入3滴～5滴甲苯,2℃～4℃冰箱可保存-年。4. 45乙盐溶液;分别称取 10 多巯酸镁(4. 10)、0. 5 多氯化钠(4. 11)、0. 5 g硫酸亚铁(1,12)和 0.5 硫酸锰（4.13）加水溶解并稀释至500mL。加5滴盐酸（4.4），2℃~～~4℃冰箱保存-年。4.46基础培养液：可按附录 A配制泛酸测定用基础培养液，也可直接由试剂公司购头泛酸培养基1粉（pantathenatemedium)3），用前根据要最按说明书配制，效力相当。4.47菌种储备用琼脂培养基：按表1各成分用量称取或吸取后，加水至100ml.，沸水浴加热至琼脂完全溶化。趁热以溴孵香草蓝为外指示剂，用1mol/L盐酸溶液（4.30）调节指示剂呈草绿色（pH6.8），如过量用1mol/L氨氧化钠溶液（4.28)间调pH至6.8。尽快分装于试管中，每管3mL~5ml,视试管内径粗细而定，液面高度不得低于2cm。寒上棉塞，121℃高压灭菌10min，取山后直立放置,待冷却后于冰箱内保存。
表1菌种储备用培养基配制一览表试剂
葡萄糖
蛋白陈
醇母挺取物
三水合乙酸钠
甲盐溶液
乙盐溶液
5仪器和设备
5. 1天平感量 0. 1 mg。
5.2电热恒温培养箱：37℃士1℃。5.3压力蒸汽消毒器。
5.4旋涡混勾器。
5.5离心机。
由Difeo公司提供的产品。给出这-信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等3
效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。3
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5.6振荡器。
5.7接种针和接种环。
5.8pH计：精度二0.01。
5.9分光光度计。
5.10超净工作台。
6菌种的制备与保存
6.1荫种：植物乳杆菌Lactabacilluspiantarum所有操作均需避光进行。
7.1试样提取
7.1.1食品（包括各类食品及以食物为基质的营养强化食品和保健食品）7.1.1.1水解：准确称收适量试样至100mL锥形瓶中（精确至0.001.g),使泛酸含量大致在50μg~200ug。一般固体试样称取2g～5g；液体试样称取5g～10g；营养强化或保健食品试样称取0.3g~2g。加10mLTris缓冲液（4.31）30mL水，混勾。于121℃高压条件卜水解15min。冷却至室温，转移至100ml.容量瓶中，用水定容至刻度（Vi），过滤。7.1.1.2酶解：吸取1.0mL水解液（V，）于25mL具塞刻度试管底部，在冰浴条件下，分别小心圳人预冷的0.1inL碳酸氢钠溶液(4.35)0.4mL碱性磷酸酶溶液、0.2mL鸽子肝脏提取液和0.4mL水。分别小心混勾每个试替，避免混合物粘附于试管壁，加1滴甲苯，37℃十1℃温箱中培养过夜（1h以F）。加水至20mL，以溴甲酚绿溶液为外指示剂，用冰乙酸调节pH至4.5，加水定容至25.0mL(V.）过滤。
7.1.1.3调节pH值：吸取适量的澄清酶解液（2.0mL10.0mL,V.）丁25ml.具塞刻度试管中，以溴麻香草酚蓝溶液为外指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠溶液（4.29）调节pH至6.8.用水定容至25.0mL（V，）。根据试样中泛酸含量必要时用水对试样提取液进行稀释（f)，使稀释后试样提取液中泛酸浓度在0.02μg/mL~0.03μg/mL范围内。7.1.1.4酶空白液：另取-试管分别加人1.0mLTris缓冲液0.1ml.碳酸氢钠溶液、0.4mL碱性磷酸嗨溶液、0.2mL鸽子肝脏提取液和0.1mL水，混句后于37℃十1℃温箱中培养过夜。以漠麝香草蓝为外指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节H至6.8,加水定容牟25.0mL，即为酶空白液。7.1.2营养素补充剂、强化剂、维生素预混料等固体准确称取0.300g~1.000g液体准确吸3.0mL~10.0mL，转人100mL锥形瓶中，加人乙醇溶液（114)80mL，振播提取过夜（4h以上至试样完全溶解），用水定容至100mLV,）。根据试样中泛酸含用水对进行适当稀释(f).使稀释后试样提取液中泛酸浓度在0.02μg/mL0.03g/mL范围内。
！
7.2测定管制备
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7.2.1试样管和酶空白管：取四支试管，分别加入1.0mL、2.0mL.3.0mL、4.0mL试样酶解液(V.）或酶空向液（V.），补水至体积为5.0mL，再加入5.0mL基础培养液（4.46），混勺。7.2.2标准系列管：分别吸取泛酸标准工作液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL于试管中，相当于标准系列管中泛酸含量为0.0μg、0.020μg、0.010μg、0,060μg、0.0804g、0.100±g泛酸。加水至5.0mL，再加入5.0mL基础培养液（4.46），混匀。为保证标准曲线的线性关系，至少应制备两套标准系列替，绘制标准恤线时，以每点的均值计算。7.3培养
7.3.1灭菌：将所有测定管塞好棉塞，于121℃高火菌10min。7.3.2接种和培养：待试管冷却至室温后，在无菌操作条件小，每管接种一滴接种液。置于37~土1℃恒温培养箱中培养16h~20h，直至达到最大混浊度，即再培养2h透光率变化不超过2%，另准备-支标准管(含0,0 名泛酸)不接种作为对照。7. 4测定
将培养好的试样管、酶空自管、标推系列管用旋混勺器混匀。用厚度为1cm比色杯，在640nm处，以未接种的标准管调节透光率为100%，然后依次测定标准系列管，试样管和酶空白管的透光率。如果接种后标准系列管中的0管透光率在90%以下，或与未接种的标准管相比标准系列管透光率最大变化量在40%以下时，说明有杂菌或不明来源的泛酸混人，需重做实验。7.5 结果计算
以标准系列管泛酸含量为横坐标、透光率为纵坐标，绘制标准曲线。从标准曲线查得试样管和酶空白管中泛酸的相应含量，如果每个试样的四支试样管中有两支以上泛含量在0.02μg～0.1μg范围内，则可继续进行结果计算，否则需重新取样测定。食品试样首先按式（1)计算酶空白液中泛酸含量，然后按式（2)计算试样中泛酸含量。mmg×25
式中：
：酶空白液中泛酸含量，单位为微克（μg)：m-从标准曲线上查得酶空白管中泛酸含量，单位为微克(μg)；25
酶空白液总体积，单位为毫升（mL)；V。\-制备酶空白替时吸取的酶空白液体积，单位为毫升(mL)。Vs
式中：
×V,×f-m)xV.
试样中泛酸含基，单位为毫克每百克（mg/100g）；100
从标准曲线上查得试样管中泛酸含量，单位为微克（g）：制备试样管时吸取的试样稀释液体积，单位为毫升（tmI.）；试样稀释液的定容体积，单位为毫升（mL)；试样稀释时吸取的酶解液体积，单位为毫升（mL）；试样酶解液的定容体积，单位为毫升（mI）：试样稀释倍数；
酶空白液中泛酸含量，单位为微克（g)；Vi—.试样水解液的定容体积，单位为毫升（mL)；m2
试样质，单位为克(g)；
试样酶解时吸的水解液体积，单位为毫升（mL)；全品秋伴网h
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由微克每克（μg/g)换算为毫克每百克（mg/100g）的系数。掌养紫补充剂、强化剂、维牛素预混料等试样按式（3)计算泛酸含量。X= mxVixfx
式中：
一试样中泛酸含基，单位为亳克每百克（mg/100g）；从标准曲线上查得试样管中泛酸含量，单位为微克（ug)；V,-试样水解液的定容体积单位为毫升（mL）;试样稀释倍数；
8精密度
试样质量，单位为克（g)；
制备试样管时吸取的试样稀释液体积，单位为毫升（mL)；由微克每克（g/g)换算为毫克每百克（mg/100g）的系数。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术乎均值的15%。6
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-（3)
A.1试剂
附录A
（资料性附录）
泛酸测定用基础培养液的配制方法A,1.1不含维生素的酪蛋白(vitamin frcc cascin)。盐酸(HCh)。
盐酸溶液:3 mol/L,1 mol/L
氢氧化钠(NaOH)溶液:10 mol/L,1 mol/L。活性炭。
硫酸腺嘌呤(C,Hl,N·H,SO)。
盐酸鸟嘌呤(C,H;N;O,·HCl1)。尿嘧啶(C,H,N,O2)。
L-胱氨酸(CeH N,O,Sz)。
L色氨酸或DL色氨酸（CnHiN,O,）。A. 1.10
核黄素(C,Ha.N.Os）)。
盐酸硫胺素(CHCIN,OS·HCI)。
生物素(C HiN2 S)。
乙酸(CzH,0z)溶液0.02 mal/L
对氨基米甲酸(C,H,NOz)。
尼克酸(C H,NO,)。
盐酸吡哆醇(CH,NO,HCI)。
无水乙醇(C,H.0)。
乙醇溶液（1+3）。
聚山梨酯-80（吐温-80）。
无水葡萄糖(CH12 CO%)。
三水合乙酸钠(C,HaO,Na·3H,O)。甲苯(C,H），
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溴酚蓝(CH1cBr.0gS)液：称取0.1溴酚蓝，用少量无水乙醇（A.1.18）溶解后，用乙醇稀释至100 mL。此指示剂变色整点为草绿色(pH3.5)。溴麝香草酚蓝(CzHzaBr0,S)溶液：按4.12配制。A.1.25
A.1.26酸解酪蛋白液：称取50g不含维生素的酪蛋白（A.1.1)于500mL烧杯中，加200mL3mal/L盐酸溶液（A.1.3)，于121℃高乐水解6h。将水解物转移至蒸发血内，在沸水浴上蒸发至膏状。加200mL水使之溶解后再蒸发率膏状，如此反复3次，以除去盐酸。以溴酚蓝溶液作外指示剂，用10mol/L氢氧化钠溶液(A.1.4)调节pH值至指示剂颜色转为草绿色(pH3.5)。加20g活性炭（A.1.5），振摇约20min，过滤。重复活性炭处理直至滤液是淡黄色或无色。滤液加水稀释至1000mL,加1mL～3ml.甲苯（A,1.23),置2℃~4℃冰箱中可保存一年。注：每次蒸发时不可蒸干或焦糊，以避免所含营养素被坏。A.1.27腺嘌呤-鸟嘌呤-尿啶溶液：分别称取硫酸腺嘌呤（A.1.6）.盐酸鸟嘌岭（A.1.7)和尿嘧啶（A.1.8)各0.1g于250mL烧杯中，加75mL水和2mL盐酸（A.1.2),加热使其全溶解后冷却。若有沉淀产生，冉加盐酸数滴，加热，如此反复直至冷却后无沉淀产生为止。用水稀释至100mL，加品成伴网h
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3滴5滴甲苯，些存于棕色试剂瓶中，置2℃～4℃冰箱中河保存年。A,1.2B胱氨酸-色氨酸溶液：分别称收4号L-胱氨酸（A.1.9)和1多［-色氨酸或2gDL-色氨酸（A.1.10)于800mL水中，加热至70℃～80℃，逐滴加人3mo1/L盐酸溶液（A.1.3）,不断搅拌，直至完全溶解为止。冷却至室温后加水稀释至1U00mL，加3滴～5滴甲苯，贮存于棕色试剂瓶中，于2℃～4℃冰箱中可保存一年。
A.1.29维生素液I：分别称取20mg核黄素(A.1.11)和10m盐酸硫胺素（A.1.12),如人1.0 mL4物素溶液(40μg/mL）,用0.02mal/LZ酸莽液(A.1.14)溶解并定容至1000mL。加人3滴~5滴甲苯，此存于棕色试剂瓶中，2℃~4℃冰箱可保存一年。A.1.30维生素液Ⅱ：分别称取10mg对氨基苯甲酸（A.1.15).50mg尼克酸（A.1.16)和40mg盐酸吡哆醇（A.1.17)，溶于1000mL乙醇溶液（A.1.19)中。加人3滴~5滴甲苯，贮存于棕色试剂瓶中，2℃~1℃冰箱可保存一年。
A.1.31聚山梨酯-80溶液：将25g聚山梨酷-80A.1.20)用乙醇（A,1.18)溶解并稀释至250mL。2℃～4℃冰箱可保存一年。
A.1.32甲盐溶液：按4.44配制。A.1.33乙盐溶液：按4.45配制。A.2基础培养液
配制250mL基础培养液，按表A.1各成分用量吸取澈体试剂，混合后加水150mL，依次加入固体试剂，煮沸搅拌2min。以麝香草酚蓝溶液为外指示剂，用10mol/L或1mol/L氢氧化钠溶液调节基础培养液pH值自至指示剂变为草绿色（pH6.8）；如果指示剂变蓝说明加人的氢氧化钠溶液过量，以1mol/L盐酸溶液调指示剂至草绿色。加入乙盐溶液5ml,用水补至250mL。2℃1℃冰箱内可保存7d。配制时可根据基础培养液用量按比例增减，表A.1酸测定用基础培养液配制览表试剂
酸解酪蛋白液
腺嘌岭-乌嘌呤尿嘧啶溶液bzxZ.net
液体试剂维生素溶液I
维生素溶液Ⅱ
胱氨酸-色氨酸溶液
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I 5. 0 ml.
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聚山柔酯80溶液
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