本标准规定了用反相高效液相色谱法测定动植物油脂中苯并(α)芘的原理、试剂和材料、仪器和设备、扦样方法、试样的制备、操作步骤、测试结果的表示及精密度等内容。本标准适用于动植物油脂。 GB/T 22509-2008 动植物油脂 苯并(a)芘的测定 反相高效液相色谱法 GB/T22509-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T22509—2008
动植物油脂
苯并（a）花的测定
反相高效液相色谱法
Animal and vegetable fats and oils-Determination of benzo(a) pyrene--Reverse-phase bigh performance liquid chromatography method(ISO 15302:2007,M0D)
2008-11-04发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
数码防伪
2009-01-20实施
中华人民共和国
国家标雅
动植物油脂萃并(a)花的测定
反相高效液相色谱法
GB/T 22509—2008
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2009年4月第－版
2009 年4月第一次印刷
书号：155066-1-36560价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
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版）。
GB/T22509—2008
苯并(a)的测定
本标准修改采用I5015302：2007《动植物油脂反相高效被相色谱法》（英文
本标准与IS015302:2007相比主要技术性差异为：删除了名词术语；
一对仪器设备作了适当修改；
一增加了氧化铅活度的测定方法；-将洗脱试剂石油醚(40℃～60℃C)或正已烷更改为石油醚（30℃～60℃)或正已烷—将待测液定容体积250μ更改为100μ，将进样体积50u更改为10μL；一将内标法定量计算更改为外标法定常计算。本标准的附录A，附录B、附录C和附录D均为资料性附录。本标准由国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位：大连市产品质显监督检验所、国家粮食质量监督检验中心、大连标准检测技术研究中心。
本标准主要起草人：苴广彬、郑顺利、王春燕、李鹏、潘炜、姜俊，李海燕、顾鑫荣、关成、毛希琴、勇艳华刘患璋、张晓凡。
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1范围
劲植物油脂苯并(α)芪的测定
反相高效液相色谱法
GB/T 22509-2008
本标准规定了用反高效液相色谱法测定动植物油脂中苯并（α）芪的原理、试剂和材料，仪器和设备、托样方法、试样的制备、操作步骤、测试结架的表示及精密度等内容。本标准适用于动植物油脂。
本标准方法的最低检出限：0.1ug/kg：本标准的测盘范用：0.1μg/kg~~50μg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标难，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标推。GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标雅测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-2:1994,IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（CB/T6682—2008,ISO3696：1987，MOD）GB/T15687油脂试样制（GB/T15687—1995,eqv1SO661：1989）3原理
样品经溶剂溶解.通过氧化铝柱吸附，用洗脱试剂洗脱苯并（α）芪，用反相高效液相色谱分离，荧光捡测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料
除特殊要求外，所用试剂为分析纯试剂。当使用推荐试剂以外的分析纯试剂时，应全部进行空试验并报告空白分析的结果。
4.1水：符合GB/T6682规定的一级水要求。4.2石油醚（沸程30℃～60℃)或正己烷：每升加1g氢氧化钾颗粒重蒸。4.3乙：色谱纯。
4.4四氢呋喃：色谱纯。
4.5乙睛四氢呋哺混合溶液：90mL乙晴（4.3)和10mL四氛味哺（4.4)的混和溶液。4.6甲苯：色谱纯。
4.7尤水硫酸钠。
4.8层析用中性氧化铝（100目～200日）：Brockmann活度I级（参见附录A），由活度为I级的中性氧化铝减活制备而成。将90名经150℃灼烧12h的氧化铝放人密闭容器中降至室温，加人10mL水（4.1）。剧烈摇动容器15min，静置平衡24h，室温下密闭避光保存。由于不同品牌氧化活性存在差异，建议对质控样品进行测试，使氧化铝活性满足苯并（α)芘的回收率要求。建议应做相应的样品回收实验验证氧化铝括性。
4.9苯并（α）标准品：CAS编号：50-32-8，纯度不低于99.0%。1
GB/T 22509-2008
-TiKAoNiKAca-
告一一苯并（a）花是一种已知的致癌物质，测定时应特别注意安全防护。测定应在通风柜中进行并戴手套，尽盘减少暴露。
4.10苯并（α)芪标准贮备溶液：推确称取12.5mg苯并(a)花(4.9)于25mL容量瓶中，用甲苯(4.6）溶解，定容。此溶液约含苯并(a)范 0. 5 mg/ml-,4 ℃C避光保存,至少 6 个月内稳定。4.11标准工作液：用苯并(a)芘标准贮备溶液(4. 10),分别配制苯并(a)花含量火约为0.2μg/mL和0.01μg/mL的两种标准溶液。
5仪器和设备
5.1玻璃层析柱(参见附录B)：配有烧结玻璃垫和聚四氟乙烯旋塞。5.2恒温水浴。
5.3旋转蒸发仪。
5.4高效液相色谱仪：如果使用自动进样器，样品定量环应在序列进样间用乙睛冲洗。5.5玻璃样品瓶：药1 mL，配有可密封的盖了。6扦样方法
实验室接收的样品应其有代表性，且在运输和贮存过程中样品不被破坏或改变。本标推不规定扦样方法，推荐来用GB/T5524规定的扦摔方法。7试样的制备
按GB/T15687方法制备试样。
8操作步
8.1样品的净化
用坡玻璃烧杯称取约0.4g试样，粘确到0.001g，用2mL石油避（4.2)溶解稀释。向层析柱（5.1)中加入一半高度的石油（4.2)，快速称取22氧化铅（1.8)于小烧杯中，立即转移到层析柱(5.1)中,轻轻敲打层析柱，使氧化铝均勾沉淀。再装人一层约 30 mm高的无水硫酸钠（4.7）。打开层析柱底部的旋塞，石油髓流出至无水硫酸钠的顶部：关闭旋塞。在层析住出口端放一个20 mL的量筒。向层析柱中移人样品溶液,用2 mL石油醛(4.2)清洗层析柱内壁。向层析柱加人 80 mL石油醛(4. 2)洗脱，流速为 1 mL/min，洗脱被放满 20 mL量简后,弃去。换用圆底烧瓶收集其余洗脱液。将收集的洗脱液在65C的水浴中旋转蒸发(5.3)至0.5mL~1.0mL,转移至一个预先称量的玻璃样品瓶（5.5)中。玻璃样品瓶置于35C的水浴（5.2)中续蒸发，并用氮气吹至近干（氮气流量人约为25mL/min）。用石油醛清洗圆底烧瓶两次，每次1mL，将清洗液转移至玻璃样品瓶中，继续在35℃及氮气条件下蒸发至干。称量玻璃样品瓶的质量（精确到0.1mg），计算瓶内残质量。旋紧样品瓶盖，4心储存备用。
8.2测定
8.2.1推荐的色谱条件
推荐的色谱条件如下；
a）保护柱：LichrosorbRP-Ca，4.6mmX75mm，粒度5μmb）色谱柱：多环芳经分析柱，4.6mm×250mm；进样最：10μ
流动相：乙睛水为880：120(体积比)；流速：l.0mL/min;
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f）荧光检测器：发射波长：406nm（狭缝10nm），激发波长：381nm（狭缝10nm）。8.2.2标准曲线的绘制
将标准工作液（4.11)稀释为五种不同浓度的溶液，每个溶液进样量为10μI.时苯并（a）芘的渍量为0.004ng.0.008n、0.04ng、0.2ng、0.4.mg。根据峰的积分面积绘制5点校正曲线，色谱图参见附录C。
8.3样品分析
8.3.1向装有待测试样（8.1）的玻璃样品瓶中注人100μL的乙睛四氢呋喃混合溶液（4.5）。小心祸旋溶解残渣，避免样品瓶盖与落剂接触。使用标准曲线（8.2.2)，对苯并（a)芘在0.1/kg～50g/kg的范围内定量。苯并（a）芘含量超过10μg/kg的样品可以使用乙睛四氢呋响混合溶液（4.5）稀释或减少进样体积。
8.3.2将10μL的试样液注人液相色谱仪进行测定。保证注入到色谱柱中试样液溶解的残渣不能超过1.5mg，若超过1.5mg，需用四氢呋嘀（4.4)稀释或重新进行净化。9测试结果的裘示
苯并(α)芪含量按式(1)计算。
式中：
样品中举并(a)乾含量，单位为微克每下克(ug/kg)：c——从标谁工作曲线得到的待测液中萃并(α)芪的浓度，单位为纳克每微升(ng/uL)：V——待测液体积,单位为微并(μL);m一样品质量，单位为克（g）。计算结果在0μg/kg～10μg/kg之间时保留一位小数，计算结果大于10g/kg时保留到最接近的整数。
10精密度
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的置信区间以95%来计算。
10.1童复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限，动植物油脂中苯并（a）芪的含量范围及重复性方程见表1。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。
10.2再现性
在再现性条件下，获得的两次独立測试结果的绝对差值不得超过再现性限R，动植物油脂中萃并(a）茂的含量范围及再现性方程见表1。苯并（a）芪添帅样品实验室间的测试分析结果见附录D。表1重复性限和再现性限方程
油脂类别
植物油
动物油瞻
含盐范围/（rg/kg）
0.5~50. 0
0. 2~50. 0
法：为两饮测定结果的算求平均值重复性限T
r=0.0843m+0.313
r=0. 057 7m+0. 066 4
再现性限R
R=0.100 w+0. 256
R=0. 193 #+0. 217
GB/T22509—2008
A.1活度定义
附录A
(资料性附录）
Brnckmarn氧化铝活度测定方法
KANiKAca-
根据含水量的不同，中性氧化铝可以划分为五种活度等级。Brackann定义I级氧化铝为450℃灼烧12h的氧化铝，IⅡI、亚、IV、V级氧化铝是工级氧化铝分别加入3%.6%、10%、15%的水而制成。A2测定
A.2.1层析柱：玻璃层析柱，15rmm×H150tmm，下部垫少许脱脂棉，装人高度为50mm氧化铝，截实。
A.2.2试剂：举+石油醛醚（1+4)。A.2.3活度测试液的配置：按卜列组合方式，分别取每种偶氮染料20mg，用试剂（A.2.2)定容于50mL容量瓶中，配置成相应的染料混合溶液。第一对（I）：偶氮苯azobenzenc，AB)和对甲氧基偶氮苯（p-methoxyazobenzcncMAB)；第二对（I）;MAB和苏丹红I（Sudan I,S I）);第三对（Ⅲ）：苏丹红I和苏丹红Ⅱ（SudanⅢ，SⅡ）;第四对（W）：苏红皿和对氨基偶氮苯（p-aminoazobenzcne，AAB）；第五对（V）：AAB和对羟基偶氮苯（p-hydraxyazobenzene，HAB)。A.2.4分别取染料混合溶液I、Ⅱ、Ⅲ、IV、V各10mL.慢慢加到五支氧化铅层析柱内，待流尽后再加入20ml试剂（A.2.2），待流尽后观察有色染料在柱上的迁徙情况，确定氧化铝的活度，如图A.1所示。若第一对染料溶液完全吸附在柱上时，该氧化铝活度为I级；若第一对染料溶液的MAB吸附在柱上、低AB流出，而第二对染料溶液的两个组分都吸附在柱上，则该氧化铝活度为Ⅱ级；若第二对染料溶液的MAB组分流出，而第三对染料溶液的两个组分都吸附在柱.I，则该氧化铝活度为Ⅱ级；依次类推，I
图A.1氧化铝活度的确定
附录B
（资料性附录）
玻璃层析柱装置示意图
1玻璃层析柱装置示愈图
GB/T22509--2008
单位为厘米
GB/T 22509—2008
(资料性附录）
苯井(a)芘标准色谱图
苯并(α)花标准色谱图
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附录D
（资料性附录）
实验室间结果比对
GB/T 22509—2008
本方法经由7家实验室进行实验室间的测试分析，用鸡油和大豆油样品分别进行三个水平的添加回收实验，对得到的结果按照GB/T6379.2进行精案度数据统计，统计结果见表D.1。轰D.1
统计分析结果
样品添加浓度/（u/kg）
实验室个数
平均值/(1g/kg）
惠复能标准善s./(ug/kg）
重复性变异系数/%
重复性限值/(g/kg）
再现性标准差Sp/(μg/kg)
再现性变异系数/%
再现性限值R/(rg/kg）
鸡油样品
8, 650
大豆油样品
GB/T22509—2008
参考文献
［1] GB/T5524
自扦样（GB/I5524—2008.ISO5555:2001，IDT）动植物油脂
-T KAoNT KAca=
版权专有侵权必究
GB/T22509-2008
打印日期：2009年4月24日
书号：155066：1-36560
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