ＧＢ／Ｔ９６９５由31个部分组成，本部分为ＧＢ／Ｔ９６９５的第２３部分。 本部分代替ＧＢ／Ｔ９６９５．２３—１９９０《肉与肉制品 Ｌ(－)?羟脯氨酸含量测定》。 GB/T 9695的本部分规定了肉与肉制品中羟脯氨酸的测定方法。本部分适用于肉与肉制品中含量低于0.5% (质量分数)的羟脯氨酸的测定。 本部分与ＧＢ／Ｔ９６９５．２３—１９９０相比主要修改如下：———按照ＧＢ／Ｔ １．１—２０００《标准化工作导则 第１ 部分：标准的结构和编写规则》和ＧＢ／Ｔ２０００１．４—２００１《标准编写规则 第４ 部分：化学分析方法》进行了结构调整和文字修改；———用硫酸溶液代替氯化亚锡盐酸溶液水解样品；———修改了氯胺Ｔ 溶液和显色剂的配制；———改动了试样前处理和测定操作；———用第１０章“精密度”及其内容代替第９章“允许差”及其内容；———增加了“试验报告”一章。 GB/T 9695.23-2008 肉与肉制品 羟脯氨酸含量测定 GB/T9695.23-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.04D
中华人民共和国国家标准
GB/T9695.23—2008/IS0 3496:1994代誉GB/T9695.23—1990Www.bzxZ.net
肉与肉制品，
羟脯氨酸含量测定
Meat and meat products-Determination of hydroxyproline content(ISO 3496 :1994,IDT)
2008-08-28发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标谁化管理委员会
2009-03-01实施
GB/T 9695.23—2008/IS0 3496:1994为计算公式增加了编号：
本部分代替GB/T969523—1990&肉与肉制品L(—）-羟脯氨酸含量测定》。本部分与GB/T 9695.23—1990相比主要修改如下：按照GB/T1.1一2000&标准化工作导则第1部分：标推的结构和编写规则》和GB/T20001.4一2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》进行了结构调整和文字修改；
一用硫酸溶液代替化亚盐酸溶液水解样品：—一修改了鼠胺T溶腋和显色剂的配制；改动了试样前处理和测定操作：-用第10章“精密度\及其内容代替第9章“允许差”及其内容；增加了“试验报告”一章。
本部分由全国肉禽蛋制品标准化技术委员会提出并归口。本部分起草单位：中国商业联合会商业标准中心，国家加工食品质景监督检验中心（广州）、广州市产品质量监督检验所。
本部分主要起草人：郭新东、邓穗兴、罗海英、洗燕萍、杜志蜂、吴玉登、新晓蕾。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T 9695.23-1990。
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1范围
GB/T9695.23—2008/IS03496:1994肉与肉制品
羟脯氨酸含量测定
GB/T9695的本部分规定了肉与肉制品中羟氮酸的测定方法。本部分适用于肉与肉制品中含量低于0.5%(质量分数）的羟脯氮酸的测定。2术语和定义
下列术语和定义适用于GB/T9695的本部分。2.1
肉与肉制品羟脯氨酸含量hydroxyproline content of meatand meatproducts在本部分规定的条件下测定的羟脯氨酸的含量。羟脯氨酸含量用质量分数表示。3原理
用硫酸于105℃水解试样，过滤、稀释水解产物。羟脯氨酸经氮胺T氧化后，与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物，在波长558nm处逃行比色测定。4试剂
如无特别说明，所用试剂均为分析纯。水为蒸馏水或去离子水，或相同纯度的水。4. 1硫酸溶液[c(H,S0)~3 mol/L]量取750mL水于2L的容量瓶中，在搅拌下缓慢加人320mL浓硫酸（pzs=1.84名/mL）。冷却至室温后用水定容。
4.2缓冲溶液(pH=6.8)
包括下列组分：
a)26.0g—水柠酸(CH.O-H.0);
b）14.0g氢氧化钠：
c)78.0g无水乙酸钠[Na(CH,CO,)]。用500mL水溶解、1.述试剂并转人1L的容量瓶中，加人250mL正丙醇，用水定容。该溶液于4℃暗处可稳定保存几周。4. 3点胺T溶液
称取1.41g三水·N-氛-对甲苯磺酰胺钠盐（氯胺T)，用100mL缓冲溶液(4.2)溶解。临用前配制。
4.4显色剂
称取10.0g对二甲氮基苯甲醛，用35mL高氛酸溶液[60%（质量分数)]溶解，缓慢加入65mL异丙醇。临用前配制。
若对二甲氢基苯甲醛需纯化（见8.4注），可按如下操作：用70%（体积分数）热乙醇配制对二甲氮基苯甲醛饱和溶液。依次在室温和冰箱中冷却，12h后，用布氏漏斗过滤。用少量70%（体积分数）乙醇洗涤布氏漏斗中的固体。将固体转移至三角瓶中，用70%（体积分数）热乙醇重新溶解固体，加人冷水充分搅拌，至有大量乳白色晶体析出，于冰箱中过夜。用布氏漏斗过滤固体，用50%（体积分数）乙醇洗涤后，在有五氧化二磷干燥剂的条件下进行真空下燥。1

GB/T 9695.23—2008/ISO 3496:19944.5羟脯氨酸标准溶液
4.5.1标准储备液
称取 50 mg 4-羟基-α-吡咯甲酸(羟脯氨酸)于 100ml容量瓶中,用水溶解,加一滴硫酸溶液(4.1)，用水定容。该溶液于4℃下可稳定存放1个月。4.5.2标准工作液
移取5.00mL上送标维储备获至500mL容量瓶中，用水定容。分别吸取该搭液10，00mL20.00 mL30.00 mL，40. 00 mL 于100 mL容量瓶中，用水定容，所得标谁工作被浓度依饮为0. 5 Fg/mL,1,0 μg/mL,1,5 g/mL,2.0 μg/mL。 临用前配制 5仪器和设备
实验室常规仪器及下列仪器。
5.1电动绞肉机：带水平刀片，能高速旋转。5.2圆底或平底烧瓶：容量约为200mL，宽颈。5.3干燥箱：可控温于105℃士1℃。5.4圆形滤纸：直径为12.5cm。
5.5 pH计。
5.6铝箔或不透明塑料薄膜。
5.7水浴锅：可控温于60℃±0.5℃。5.8分光光度计：可用波长 558nm士2 nm;或使用光电比色计，其中干涉滤波器最大吸收被长为558nm±2nm
5.9比色皿：光程为10 mm。
5.10分析天平，可准确称重至0.001多。5.11容量瓶:250 mL。
5.12表面皿：直径为5cm~6cm。
6取样
实验室所收到的样品应真有代表性且在运输和储藏过程中没受损或发生变化。取样方法参见GB/T9695.19
取有代表性的样品200g。
7试样制备
7.1肉及生肉制品
用刀将肉在玲炼时(0 ℃以下)切成小块(约 0.5 cm,边长约为 8 mm)。将切好的试样装人密封样品盒中，或用耐热塑料袋真空包装，70℃以上保温30min后，冷却，按7.2继续操作。
在待测试样保存，制备、称重过程中，试样需混合均匀，特别是脂肪和液体要保持均勾。注：如热软化结缔维织便于切割均匀，但可能导致胶质液体流出。为使测试样品均匀，应注意脂肪的均匀分布。7.2熟肉制品
用绞肉机(5.1)将试样均质。将试样装人密封的容器里，防止变质和成分变化。试样应在均质化后24 h 内尽快分析。
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8分析步甄
8.1试样
GB/T 9695.23--2008/1SO 3496:1994称取4g试样（精确至0.001g）于烧瓶（5.2)中，避免试样粘在烧瓶壁上。8.2水解
8.2.1量取30ml.士1mL硫酸溶液（1.1），加入烧瓶中，用表面血l（5.12）盖住，于105℃干燥箱内(5. 3)恒温16 h。
8.2.2用圆形滤纸趋热将水解产物过滤垒250mI.容最瓶(5.11)中。用10mL硫酸溶液（4.1)分三次洗涤烧瓶和滤纸，合并至上述容量瓶中。用水定容，摇匀。8.3测定
8.3.1用移液管移取一定体积(V)的水解产物(8.2.2)至250mL容量瓶(5.11)中，定容后羟脯氨酸的浓度在 0. 5 μg/mL～2 μg/mL之间。注：移取体积取决于带品中结缔组织的含量。通常情况下，移取的水解产物体积(V)在5mL～25mL之间。8.3.2移取4.00mL上述溶液(8.3.1)于比色管中，加入2.00mL氯胺T试剂（4.3)混合后于室温下放置20 min士1 min.
8.3.3加人2.00mL显色剂(4.4)于比色管中，充分混合，用铝箔或塑料薄膜（5.6)将比色管封口。8.3.4将比色管迅速放入60℃水浴(5.7)中，加热20min。8.3.5取出比色管，用流动水冷却比色管至少3min，在室温下放置30min。8.3.6用水作参比，于558nm土2nm处用分光光度计或光电比色计<5.8）测定吸收值。8.3.7扣除空白溶液的吸收（8.4)，从8.5所得标准曲线查得水解产物中羟脯氨酸的含量。8.4空白测试
用水代替稀释溶液，重复8.3.2至8.3.7的操作。注：若空白落液的吸收值超过C.040.则篇重新配制显色剂（4.4），如有必要，带纯化对二甲氢基苯甲液（见4,4)。8.5标准曲线
8.5.1用4.00mL羟脯氮酸标准工作液（4.5)依次代替稀释后的水解产物，进行8.3.2至8.3.7的操作。8.5.2以扣除了空白的标准工作液的吸光度为纵坐标，以相应的浓度为横坐标，绘制标准曲线。再次分析应重新绘制标准曲线。9计算
试样中羟脯氨酸的含量按式(1)计算：式中：
X——试样中羟脯氨酸的含量,%；X=6.25c
c—由标准曲线得到的试样溶液中羟脯氮的浓度，单位为微克每毫升(g/mL)；m—试样质量，单位为克(g);
V—从250mL容量瓶中吸取滤液的体积（见8.3.1)，单位为毫升（mL)计算结果保留至小数点后两位。10精密度
方法的精密度是根据1SO5725组织的联合实验室测试获得的。对于重复性限r和再现性限R，置信度均为95%。
10. 1重复性
同一分析者在向-实验室、采用相同的方法和相同的仪器、在短时间间隔内对同一样品独立测定两3
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GB/T9695.23—2008/ISO34961994次。两次测试结果的绝对差值不超出由式(2)求得的重复性限了：T= 0. 013 1 +0. 032 2X
式中：
一重复性限,%;
x一-两欲测试结果的平均值，%。如果两次测试结果的绝对差值超过重复性限值，含弃这两个结果，重新测定两次。10.2再现性
不同的分析者采用相同的方法、在不同的实验室用不同的仪器、对同一样品独立测定两次。两次测试结果的绝对差值不超出由式(3)求得的再现性限R：R = 0. 019 5 +0. 052 9X
式中：
R--再现性限，%；
一两次测试结果的平均值，%。
11试验报告
试验报告应说明：
取样方法；
一所采用的方法；
-测试结果；
-如果检验了重复性，列出最终结果。-(3)
试验报告也应说明本部分未规定或未列为可选的所有操作，以及可能影响测试结果的其他因素。试验报告还应包括所有与识别样品有关的必需信息。http：
umrfondmatono
参考文献
GB/T9695.19肉与肉制品取样方法[
GB/T9695.23—2008/IS03496:1994GB/T6379.1-2004测量方法与结果的准确度（正确度和精密度）第1部分：总则与定义[2]
(IS0 5725-1.1994,Accuracy(trueness and precision)of measurement methods and results—Part l.General principles and definitions,IDT)GB/T6379.1—2004测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方[3]
法重复性与再现性的基本方法（ISO5725-2：1994，Accuracy（truenessandprecision）ofmeasurement methods and resultsPart 2: Basic mcthod for the determination of repeatability and repro-ducibility of a standard measurement mcthod,IDTy5
http：//foodmate.ntGB/T 9695.23-2008
http：//foodm
中华人民共和国
国家标准
肉与肉制品羟脯氨酸含量测定
GB/T 9693. 23-2008/ISO 3496:1994中国标准出版社出版发行
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