本部分规定了鱼类细菌病检疫的常用试剂、培养基、器械设备、检验的常用方法以及结果的害虫定。本部分适用于鱼类细菌病的检疫。 SC/T 7201.1-2006 鱼类细菌病检疫技术规程 第1部分：通用技术 SC/T7201.1-2006 标准下载解压密码：www.bzxz.net

1CS 65.020.30
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7201.1-2006
鱼类细菌病检疫技术规程
第1部分：通用技术
Rules for quarantining bacterial diseases of fishPart I: General technique
2006-12-06发布
2007-02-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T7201《鱼类细菌病检疫技术规程》分为五个部分：第1部分：通用技术；
第2部分：柱状嗜纤维菌烂鳃病诊断方法；第3部分：嗜水气单胞菌及豚鼠气单胞菌肠炎病诊断方法：第4部分：荧光假单舱菌赤皮病诊晰方法；第5部分：白皮假单胞菌白度病诊断方法。本部分为SC/T7201的第1部分。
本部分的附录A和附录B为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会回Ⅱ。SC/T 7201.1—2006
本部分起草单位：中国水产科学研究院长江水产例究所、中国水产科学研究院珠江水产研究所。本部分主要起草人：何力、邹为民、徐忠法、姜兰、周瑞琼、罗晓松。一范围
鱼类细菌病检疫技术规程
第1部分：通用技术
SC/T 7201: 1—2006
木部分规定了鱼类细菌病检疫的常用试剂、培养基、器械设备、检验的常用方法以及结果的判定。本部分适用于鱼类细菌病的检疫。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过木部分的引用而成为本部分的条款。凡是痒口期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用丁本部分，然施，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡足不注口期的引用文件，其最新版本适用于本部分。C3/T4789.28--1994食品卫生微生物学检验巢色法、培养基和试剂GB/T18652--2002致病性嗜水气单胞菌检验方法SC/T7014—2006水生动物检疫实验技术规范3常用试剂和培养基
3.1常用试剂
除非另有说明，在检验中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水：3.1.1崩酸铅（或三氯化铁)：用于硫化氢试验。3.1.2柠檬酸铵铁：用」-七叶苷(esctilin)水解试验。3.1.3酪氨酸：用于酪氨酸水解试验。3.1.4二氯化求：用于明胶液化试验。3.1.5儿丁质：用于儿丁质分解试验，3.1.6-七叶芹：用于七叶水解试验。3.1.7可游性淀粉：用于淀粉水解试验。3.1.8
脱脂奶粉：用于酪素水解试验。3.1.9过氧化氢：用于过氧化氢酶试验。3.1.10#
碘液：用于淀粉水解试验。
明胶：用丁明胶液化试验。
葡萄糖：用葡萄糖利用试验。
乙醚：用十靛基质试验，
溴麻香草酚蓝：用于葡萄糖利用试验5V.P.试剂。
吲哚试剂。
格单斯氏(Griess)试剂：用于硝酸盐还原试验。3.1.18革兰氏染色液。
3.1.19Kocs试剂：用于靛基质试验。SC/T 7201.1--2006
3.1.20鞭毛染色剂。bzxz.net
3.1.21微量或常量糖发酵试剂管（葡葡糖、蔗糖、阿拉伯糖、七叶荠、水杨苷）。常用试剂与染色液的配制见附录A。细菌生化鉴定管可代替相应的生化试验培养基和试剂。3.2培养基
3.2.1普通营养琼脂培养基
按GB/T4789.28--1994中的4.7执行。3.2.2 Rimler-Shotts 培养基
按GB/T18652--2002附录A中的A:3执行。3.2.3胰膝琼脂(Cytnphaga Agar)培养基见附录B中的B.1。
3.2.4鉴别用培养基
见附录 B 中的 B.2~B.12.
4器械设备
4.1常用仪器
4.1.1超净工作台。
4.1.2显微镜（10倍×100倍）
4.1.3双简解剖镜。
4. 1.4离心机(RCF 10 000× g30 00)×g)。4.1.5恒温培养箱。
4.1.6 高压灭荫锅。
冰箱。
普通天平（相对精度1/1000，分度值0.1g~0.01g)。4.1.8
4.1.9生化培养箱。
4. 1. 10 电位 pH计=
琪箱。
恒温水浴锅。
对质器或乳钵。
4.1.14全自动细菌鉴定仪。
4.1.15细菌生化鉴定管。
4.2常用用具
4.2.1骨剪。
4.2.2直头解剖剪刀。
4.2.3眼科手术小剪刀。
4.2.4(直头,弯头)小镊了。
直头粗镊子。
4.2.6解剖万。
4.2.7接种针(环)。
4.3常用器血
白据瓷解剖盘(桶、脸盆)。
4.3.2培养而。
4.3.3试管。
4.3.4洒精灯。
4.3.5兰角烧瓶：50）ml250mLa
4.3.6载(盖)玻片，
4.3.71瓶:500 mL。
4.3.8玻璃量筒
4.3.9铅皮标本箱。
5采样方法
按SC/T7014—2006第4章的规定执行6临床诊断
6.1活动情况
观察病鱼鱼体的摄食倩况、行为特点等。6.2外部检查
SC/T 7201. 1—2006
观察病鱼体的体色。将病鱼放在色的糖瓷盘中，记录下病鱼的种类、年龄、全长、体长、体高和体重，俭香鱼体体表的各部位（包括眼晴、剪孔、吻、鳍条、口腔、鳃丝等）观察其充血、溃烂、发炎、黏液情况;皮胀粗糙、溃燃情况；麟片、鳍条、腹部肿大、肛门肿胀倩况:病鱼是否畸形等。6.3制片镜检
用弯头镊子（或解剖刀）刮取病变或异赏部位黏液（或取具部分组织)放在预先已滴有法次水满的载玻片上，盖上盖玻片，镜检，6.4解剖检查
将仙的体壁剪么一面，观察是否有腹水；消化道内食物情况，肠内壁黏液、充血、发炎情记；按病症分别检查肝、肿、肾、心等器官。7实验室诊断
7.1取样
将检验个体以活体或用无菌操作采下病变组织，迅速放入密闭的无术容器，低温运送到实验室。体表病灶明显的个体，用刀片刮去表面腐烂部分后，用接种坏（针）在病灶处无菌取材进行病原菌分离；无明显体表病灶的个体，应无菌取心血、肝、脾，肾等器它，无菌条件下操作，将样品捣碎，加无菌生理盐水或无菌水，勾浆后进行病原菌分离。7.2病原体分离与鉴定
7.2.1 培养基
除特蛛要求外，一般选用普通营养琼胎培养基。7.2.2分离方法
按7.1的规定用无菌接种环在病灶处取样，在培养基平板上划线。可采用各种不同的常规划线方法，需尽量使其产生单个分散的菌落。在28℃～30℃塔养24h7.2.3纯培养
用无菌按种环挑取单个菌落，接种到普通营养琼脂培养基斜面试管上，在28℃30℃培养24h7.3鉴定方法
SC/T 7201.1—2006
7.3.1生化鉴定法
根据细菌在代谢过程中所产生的合成或分解产物的不同，成用生物化学方法检测细茵的代谢产物，从而整定细菌的种、属的技术。多采用细菌生化鉴楚管进行试验，也可利用全自动细菌鉴定仪鉴定。7.3.2免疫学检测法
利用抗原抗体的特异性免疫反应来检测病原体。包括免疫荧光检验、酶联免疫吸附检验和免疫（或转移印迹）实验等。免疫荧光技术检验处SC/T70142006的7.1.3.1；联免疫吸附检验见SC/T70142006的7.1.3.2
7.3.3核酸检测法
通过分析病原休的核酸分子来检测病原体。包括核酸杂交、特定基因片断的PCR、DVA指纹和16SrRNA等技术检测！
8细菌致病性实验
8.1条件
在分离培养基上落类型根多，而且分不消土次，需重新分离缅菌，并H应选择儿种不同类型的菌落，分别培养后接种鱼体，测试其致病性。8.2感染对象
应选摔与被检样品同龄、同规格的健康负类(而清检测阴性)。8.3感染方法
用无菌生理盐水或蒸馏水稀释菊落，制成菌悬液，采用肌肉（或腹腔）注射、涂抹、浸泡的感染方式。观察 24 h--168 h实验鱼的反应,8.4感染结果
山现与自然发病鱼症状相同的菌落为致病菌菌落。9果判定
符台以下所有特征者，可判为相成的鱼病：）有明显症状者,其表现符合临床检验的要求；鉴定的病原菌的种属符合其相应病原菌别；b)
c）或鉴定后的病原菌的致病性实验，鱼体症状符合临床检验的要求，8
A.1革兰氏染色液
按GB4789.28—1994中2.2的规定A.2格里斯氏(Griess)试剂
A.2.1 A液:
对氮基米磺酸
10%的醋酸
附录A
【规范性附录】
试剂的配制方法
150 mL
SC/T7201.1—2006
先用10%的10L落解对氛基苯磺酸，然后再加至150m，4%～10℃保存。A.2.2 B液:
α-藜胺
蒸馏水
10%酷酸
150 mL
稍加热溶解，用脱脂棉过滤，放棕色瓶中。4℃10℃保行。A.3 kovacs 试剂
戊醉或昇戊
对二基甲醛
浓盐殿
4.4鞭毛染色剂
按CB4789.28—1994中2.7的规定。A.5微量或常量糖发酵试剂管
按GB/T18652—2002附录B中B.5的规定。9
SC/T7201.1—2006
胰琼脂培养基
B.1.1配方
胰盈白豚（Tryptone）
牛肉膏
醉丹膏
醋酸钠
琼脂粉
B.1.2配制
附录B
（规范性附录】
培养基配方
1 000 ml.
混勺],加热使之完全溶解,用1 mol/L, 的 NaOH 谢节 pH,使灭菊后为7.2--7,4,分装烧瓶,[21C高压灭菌15min。4℃~10℃备用。
B.2明胶琼脂(Gelatin Agar)
B.2.1配方
蛋白陈
牛肉浸粉
磷酸氯二钠(NazHPD12H,O)
氯化钠
B.2.2配制
混匀,加热使之完全溶解,用1mol/.的 HCL调节pH,使火菌后为 6.4+0.1。分装试管，116℃高压灭菌15min，制成高层4℃~·10℃备用。B.3氏枸酸培养基（Christensen）B.3.1 配方
酵母没粉
盐酸半胱氨酸
枸橡酸钠
氯化钠
磷酸“氢钾
葡鲨糖
B.3.2配制
约13g
1000 mL
SC/T 7201.1—2006
除酚红外，各成分加于水中，加热溶解，用1mol/L的NaOH或HICI.调节pH,便灭菌后为6.5~6.9,加人酚红分装试管，116℃高压灭菌15min，制成斜面，B.4硝酸盐液体培养基
R.4.1配方
肉汁陈培养液
硝酸饼
B.4.2配制
1000ml
用1mol/L的 NaOH调节 pH,使灭菌后为7.0--7.6。每管分装4mL～5ml-,121C蒸汽灭菌15 min--20fninc
B.5蛋白葡萄糖磷酸盐培养基
B.5.1配方
蛋白陈
葡葡糖
磷酸氢二钾
B.5.2配制
谢节pH,使灭菌后为7.2~7.4。每管分装4mL~5nL,115灭菌30mimsB.6 休和利夫森二氏(Hugh-Leirs(n)培养基B.6.1配方
强白陈
氯化钠
磷酸氢：钾
葡菊補
1%溴百单酚蓝(溴厨否草酚蓝水溶液水
B.6.2配制
1000 mL
除1%浪百里酚蓝外，各成分加于水中，加热溶解，调节pI.使炎菌后为7.0-7.2，加人1%漠百单酚蓝，分装于试管，每管约3InL，并在培养基内倒置1个Lurham发酵管，116C高压灭菌10mine
B.6.31%溴百里酚蓝(溴麝香草酚蓝)水溶液的制备先用少量95%酒精落解后，再加水配成工%的溶液。B.7酪蛋白琼脂(Casein Agar)
B.7.1配方
脱脂牛乳
1 000 mL
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B.7.2配制
混勾各成分，缓慢加热至沸腾，分装容器，121℃高压火菌15min，倾注无菌平Ⅲ备用。B.8溴甲酚紫淀粉琼脂(Starch Agar with Bromuresol Purple BCP淀粉琼脂）B.8.1配方
蛋白藤
玉米淀粉
0.2%溴甲酚紫溶液
B.8.2 配制
1 000 ml.
各戒分加入水中，删热游解，调节plI.使灭菌斥为7.2±0.1。分装容器，116℃高压灭菌15mim，制成斜面或平板备用。
B.9七叶苷培养基（AesculinMedium)B.9.1配方
0.5%的映蛋凹陈培养基
北叶苷
柠像酸铁
B.9.2配制
1000 mL
混句各成分，加热辫解。分装小管，121℃高压灭菌20ininB.10酪氨酸琼脂（TyrosineAgrar）B.10.1配方
普通营养琼脂
酪氨酸
B.10.2配制
1000 mL
调节pH.使灭菌后为6.8--7.2。将酪氨酸灿人邑辫化的琼脂培养基中，混勾，王16℃高压蒸汽灭15min，冷至50℃，缓慢充分播句.使略氨酸分布均句，制成板。4℃--10备用。B.11FWA培养基
B.11.1 配方
牛肉膏
磷酸氨二钾
葡萄糖
蛋白陈
酵母膏
B.11.2配制
1000ml
调节pH.使灭菌后为7.2~7.4。121C高压灭菌25min~30min，将琼脂添加量提高到15名，即为12
固体培养基。4～10℃备用
SC/T 7201.1—2006
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