GB/T 17999的本部分规定了鸡白痢沙门氏菌检验的技术要求。本部分适用于对SPF鸡进行鸡白痢沙门氏菌的分离和鉴定。用血清平板凝集试验进行鸡白痢沙门氏菌的抗体检测，结果难以判断时，可采用本部分进行复检。 GB/T 17999.8-2008 SPF鸡 微生物学监测 第8部分：SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验 GB/T17999.8-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 11. 220
社华人民共和国国家标准
GB/T 17999.8—2008
代替 GB/T 17999.71999
SPF鸡
第8部分：SPF鸡
微生物学监测
鸡自痫沙门氏菌检验
SPF chicken-Microbiological surveillancePart 8: Examinalion of Saimonella putiorum for SPF chicken2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
GB/T 17999SPF鸡
徽生物学监测》分为10个部分：第 1 部分;SPF鸡
徽生物学监测总则；
红细跑凝集抑制试验：
一第 2 部分 SPF鸡
第3部分：SPF鸡
第4部分：SPF鸡
而清中和试验：
血清平板凝集试验；
琼脂扩散试验；
一第 部分:SPF 鸡E
第 6 部分:SPF 鸡
第7部分：SPF鸡
n-第8部分:SPF鸡
一篇 9 部分:SPF鸡
酶联免疫吸附试验；
胚敏感试验；
鸡白刺沙门氏菌检验；
试管凝集试验：
第10部分：SPF鸡
间接免疫荧光试验，
本部分为GB/T17999的第8部分。GB/T 17999.8—2008
本部分修订参照了NY/T556一2002衣鸡传染性曦气管炎诊断技术多和OIE《陆尘动物（哺乳动物、禽些和密峰)诊断试验和疫苗手册(第止版)中的有关规定本部分代赞GB/T17999.7—1999≤SPF鸡鸡白沙门我菌检验》。本部分与（H/T17999.7—1999相比主要变化如下：增加了活禽泄殖腔拭子检测样品；增加了沙门氏菌菌休抗原血清学检测方法；-增加了附录A“革兰氏染色方法及生化试验结果判定”，-对试验操作程序进行了修订，将细菌镜检程序提前；在范围中进一步明确了本部分使用的情况；删除了小用标准；
修订了试验操作程序。
本部分的附录A为规范性附录。
本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国动物颐疫标摊化技术委员会(SAC/TC181)归。本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心，济南斯帕法斯家离有限公司，
本部分士要起草人：曲连东、姜鑫、韩凌霞、那卫星、朱果、单忠芳、刘家森、司吕德、郭东春、于海波、益庆文。
本部分所代替标滩的历次版本发布情况为：.GB/T 17999.71999.
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1范围
SPF鸡
微生物学监测
GB/T 17999.8—2008
第8部分：SPF鸡鸡白沙门氏菌检验GB/T17999的本部分规定了鸡自窥沙记菌释的技术要求。本部分适用于对SPF鸡进行鸡白痫沙门氏菌的分离和紧是用血清平板凝集试验进白痴钞门脂解玩杯检测结策难以判断时，可采用本部分进行复检。2原理
坡符检样品(肠内在
菊关唯露
养物转移到选择、鉴培土境
与血清学试验，以确燕鸡晶朔沙3www.bzxz.net
试剂和嚣材
3.1材料
3.1.1培养基O
酱养肉汤鲜鸡
DHL琼脂
琼脂。
3. 1.2生化反毒割
糖发酵培幕基、囊白陈水、硝
判定见阻录 A)
3.1.3沙门氏联清
A-F多价O
H-g.P 围子血清
3.2器材
37C恒温培养箱：
4操作步骤
4.1采样
因了血
第洲消
无菌采取卵巢、肝、脾以及小肠和育汤质禽泄殖腔批面4.2分离培养
种于增菌培养中进行增，然后将培脂培养上,廖培养物逊行生化试验铁培养基（SI）营养琼脂、半固体羧酶试验埗养、尿索培养基(结果H-d 因著血潜、H-g. 因了i血清和E
将采集样品放人灭菌乳钵或均浆器中研磨成句浆，划人少量当养肉汤稀释，取培养物或活禽泄殖腔拭了分别在SS或IS和T)H1.琼脂半板培养基工划线接种，置（36土1)℃培养24h18h。在DHI培养基上若出现黄褐色透明小菌落；或在SS琼脂乎板上山现无色半透明阅形小荫落，或在BS琼脂平板上山现黑色或黑绿色小菌落，则为可菌落。如果经24h48h培养后未发现可疑菌落，再取增菌培养物重复划绒分离培养1饮。
4.3病原鉴定
4.3.1镜检
取可疑菌葬，涂片作革兰氏染色，具体操作见附录A，镜检可见革兰氏阴性杆菌，大小为合品伙伴网httn：
GB/T 17999.8—2008
(0.3μm~0.5μm）×（1μm~2.5ptn),尤芽胞，多单个散在.4.3.2生化鉴定及运动性检查
4.3.2.1生化鉴定
接神TSI，斜面划线，底穿刺，置（36+1)%培养24h。其生化反应为斜面呈红色，底层变，有或无气体，不产4:硫化氢（H.S)。如果衍合则进行其他项目的检测及血清学鉴定，不符合则判为阴性。4.3.2.2运动性试验
将可疑菌落穿刺接种半固体培养基，（36+1)%培养24h后，观察结果。鸡白剃沙门氏菌无运动性，
4.3.3生化项目
发酵葡萄糖产酸或产气，不发障乳糖和薰糖。触酶、赖氮酸脱峻酶、确酸盐还原成验刚性。氧化酶、尿素酶、码哚试验、卫矛醇、麦穿糖阴性。鸟氨脱羧作用阳性。4.4沙门氏菌A~F群多价0血清玻片凝集试验敢可疑培养物接种三糖铁琼胎料面，37℃培养18h--24h，先用A~F多价血清与培养物作平板凝集反应，若呈阳性，再分别用09、O12、H-a、H-d.H-g.u和Hg.P单价因子血作平板凝集反应，如果培养物与<9、O12因子血清呈附性反应,而与H-aII-d、II-g.m和 H-g.P因子而清呈阴性反应时，鉴穿为鸡白痢沙门氏荫。
5结果判定
符合上述各项实验结果，为鸡向摘沙门氏菌阳性，否则结果为阴性。生化试验和血清学试验不效时，以距清学试验为主。
A.1革兰氏染色法
A，，涂片，在北焰上固定。
附景A
（规范性附录）
革兰氏染色方法及生化试验结果判定A.1,2满加结晶紫染色液,染色 min,流水孙洗,甩。A.1.3滴加碘液，媒染1min，流水冲洗，甩干。A,1.4滴加95%醇脱色药 15 s~30 s,流水冲洗,甩干。GB/T 17999.8--2008
A1.5滴加沙黄复红染液，染色10s～20s，流水冲洗，甩干，风于或滤纸吸干店镜检，A1.6结果：使油放大1000倍观察，毕兰氏阳性菌吴蓝紫色，单兰阴性菌呈红色。A 2三糖铁琼脂培养基(ISI)结果观察斜面和高层均变黄者为分解葡萄糖、蔗糖利乳糖；高尽破碎者为产气；高层变黄面斜面不变或变红者为分铎葡萄糖，不分解蔗糖和乳糖；高层沿接种线变黑者为硫化氢阳性，A.3基质试剂结果观察
培养物中加人柯凡克试剂者，在两种溶液交界处呈红色为阳性；加人欧-被试剂者，在两种溶液交界处呈政瑰红为阳性。对弱阳性者可先在培养物中加入少量二甲苯，充分混勾后再加人靛基质试剂。A.4甲基红试验结果观察
向培养物巾人中基红试剂滴，立即变为鲜红色为引性，黄色为阴性。A.5V-P试验结果观察
向培养物中加入6%-萘酚-乙醇溶液0.5mL.,10%氮氧化翻落液0.2l数分钟内出现红色消为阳性，不变色为阴性。
A.6硝酸盐培养基结果观察
塔养物中先加人甲液3滴～5滴，再加入乙液3滴～5滴，出现红色者为阳性A.7氧化酶试验结果观察
取滤纸条粘取菌落，划氧化酶试剂一滴，30s内呈现红色至紫红色为阳性，丁2min内不变色为阴性；对弱阳性者应同时用绿脓托菌做阳性对照，用大肠杆菌做阴性对照。准：不能用接种针挑取菌落，只能用被样或竹签。4.8氨基酸脱羧酶试验结果观察
从琼脂斜面上挑取培养苯接种，下（36士1)℃培养18h～24h观察结果。氨酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应虽紫色，阴性者无碱性，似因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色，对照管为黄色A,9尿素试验结果观察
培养基由黄变红为阳性。
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