本标准规定了牛奶、奶粉中黄曲霉毒素Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ２、Ｍ１、Ｍ２ 含量的液相色谱?荧光检测法。本标准适用于牛奶、奶粉中黄曲霉毒素Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ２、Ｍ１、Ｍ２ 含量的测定。本标准方法的检出限：牛奶中：黄曲霉毒素Ｂ１ 为０．００２μｇ／ｋｇ，黄曲霉毒素Ｂ２ 为０．００１μｇ／ｋｇ，黄曲霉毒素Ｇ１、Ｇ２ 为０．００３μｇ／ｋｇ，黄曲霉毒素Ｍ１、Ｍ２ 为０．００５μｇ／ｋｇ；奶粉中：黄曲霉毒素Ｂ１ 为０．０２μｇ／ｋｇ，黄曲霉毒素Ｂ２ 为０．０１μｇ／ｋｇ，黄曲霉毒素Ｇ１、Ｇ２ 为０．０３μｇ／ｋｇ，黄曲霉毒素Ｍ１、Ｍ２ 为０．０５μｇ／ｋｇ。 GB/T 23212-2008 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-荧光检测法 GB/T23212-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T23212—2008
牛奶和奶粉中黄曲霉毒素
B、B2、G1、G2、M1、M2 的测定液相色谱-荧光检测法
Determination of aflatoxin B,,B, Gi ,G?, M, . M, contentin milk and milk powder-
HPLC-fluorescence deteclion method2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录 A,附录 B为资料性附录。本标雅由中华人民共和国国家质意蓝督检验检疫总高提凹并归！。GB/T23212—2008
本标准起节单位：中华人民共和国皇岛止人境检验检疫局，中华人民共和国河北出人境检验检疫局。
本标准主婆起草人：陈崩寿，段文仲、吕红英、郭春海、王丹娜、刘凌云、姚春徽、杨秀萍、庞国芳、http：//foodmate.net1范围
牛奶和奶粉中黄曲霉毒素
B.B?、G1、G?、MLM2的测定
液相色谱-荧光检测法
GB/T?3212—2008
本标准规定了牛奶、奶粉中黄曲宽毒素B.、B.G1.G2、M.M.含鼠的液相色语荧光检测法，本标准适用于牛奶、奶粉中黄曲需毒素13，、13z、G1G、M1、M，含量的测定。本标谁方法的检出限：牛奶中：黄曲霉毒素B，为0.0c2μg/k，黄曲毒素B，为0.001μg/kg黄曲声素G、G：为0.003g/kg，黄曲霖毒索M:、M，为0.005μg/k：奶粉中：黄庙霉毒素B为0.02 μg/kg,黄曲综毒素 B为 C,0l μg/kg,黄曲霉毒素 Gl,Gz为 0.03 μg/kg,曲蛋萨素 M、M.为0.05pg/kga
2 规范性引用文件
下列文件中的条款逼过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注片期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用下本标准，然而，鼓励根据本标达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注H期的引用义件，其最新版本追月于本标准。GB/T6379，1测量片法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与义（GB/T6379.12004.ISO 5725-1:-994,IDT)
GB/T5379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法童复性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO 5725-2：1994,IT)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，IS3696：1987,MOD）3原理
试样经溶解、离心,过滤后，当样品道过免疫亲和杜时，黄由霉毒素特异性统体选择性地与存在的黄由霉素素B.BGIG：，M、M（抗原)键合.形成抗-抗原复合体。甲醇乙臂混合溶液洗脱，帮荧光检测器的高效液相色谱仪经柱后衍生浏定黄曲毒素B、B、GIG2.M、M，的含量，外标法定量4试剂和材料
除另有说明外，所月试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水，4.1甲醇：色谱纯，
4.2乙腈：色谱纯。
4.3过漠化溴化吡啶。
4.4甲醇-乙睛泥合溶液（4十5）：取40mL中醇，加人50 mL乙腈，混合均勾，4.5柱后衔生液：称取0.05g过溴化溴化吡啶，溶解于1C00ml.水中，以0.45um的尼滤膜过滤，4避光保存。
4.6黄曲霉毒素 B: (CAS NO. 1162-65-8)、B. (CA5 NO. 7220-81-7),G, (CAS NO. 1165-39-5),G,(CAS NO.7241-98-7),M,(CAS NO. 6795-23-9).M, (CAS NO. 6885-57 0)标准物质:纯度 人于等于99%。
ht
GB/T232122008
4.7黄芷霉毒素(B:.B、GlG2、M,、M,)标准储备溶液:将黄曲等毒素B,、Bz、GI,GM、Mz标准物质(4.6)，分别历甲醇配成6Gng/m.的标谁储液。倦备液于一4C保存。4. 8黄曲霉毒素(B,B,G1,G、M,、M,)混合标准工作液根据需要用流动相将黄曲霉毒素B、B2Gr、G、M,M2稀释成所需浓度的泥混合标准丁作溶液混合标准T作溶液现用现配。4. 9免疫亲和柱：免疫亲和杜应含有黄曲薇毒素B1、B、G，、G2、M.、M2的抗体，亲和柱的最人容量个小于[00 ng黄曲霉毒素 B:、B.,G,G2,M, 、M（相当于50 mL浓度为2 g/L的试样）。4.10滤膜，c.45±m。
5仪器和设备
5.1液相色谱仪：配有荧光检测器，带柱后衔生系统.01g。
5.2分析天平：感景0.1 mg
5.3水浴：5G℃±2℃
5.4冷冻离心机。
5.5空气压力泵。
5.6旋涡混合器。
玻璃纤维滤纸
塑料离心管
5.9玻离注射器
玻璃刻度tDlomL.
试样的制备与
试样的制备
将牛奶从冰箱中最出，放置全室温，摇匀，备用，6.2试样保存
牛奶置=（
冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存7测定步骤
7.1提取
7.1.1牛奶
g，置于50ml.的离心管中。于1000min、5℃条件下离心
称取20g试样，精确到
Iomin，玻璃纤维滤纸过滤，得净7.1.2奶粉
称取 2 g试拦,精确到 0.01 g,置于 501mL的离心管中。将20 mL已预热至」 5GC的水边加边振摇至奶粉完全溶解，旋祸混合器（5.6）振荡2mm.混合均匀，如果奶粉不能完全溶解，将离心管在50°℃的水浴(5.3）上加热，仔细混匀。将奶粉乳决液冷却至室温后，于10000 r/1riz、一5 ℃条件下离心10min，再用玻璃纤维滤纸过滤，待净化，7.？净化
将7.1的过滤液全部转移到10 ml.玻璃注射器(5.9)巾，调节空气匹力泵（5.5),控制试样以2 inL/min~-3mL/uin稳定的流速过柱，真至2nL~-3mL空气通过柱体。向上述注射器内加人10mL水，以稳定的流速洗杜，弃去全部流出液，并使2ml~3mL空气通过柱体。准确加入1.0ml.甲醇-乙睛混合溶液（4.4）至1:述注射器，以2mL/min~3tnL/min稳定的流速将亲和柱上的黄由筹毒素B,、B2,G,G?、M1M，洗脱下来，收集全部洗脱液丁玻璃刻度试管(5.10)中，用水定容至2ml.。于旋涡混合器(5.6)上振兹1mia，过C45μm滤膜（4.10），供液相色谱测定。2
ht
7.3测定条件
7.3. 1液相色谱参考条件
谱柱:Incrtsil 0DS-3,5 un,250 mmX4. 6 mm(内径)或相当者;a)
流动:水+甲醇+乙睛(11+4+5);
GB/T 23212—2008
流速：流动相：1.0 tmL/min,柱斥衍生液:0.45 mnL/min.柱后衔生反应器温度:35 ℃；d）柱温:35℃；
检测波长：激发波长：3551im，发射波长：430nm；e)
f)进样量：1coμI.。
7.3.2液相色谱测定
根据样液中黄曲霉毒素B,、B2,GC2、M，,M，的含量情况，选定依度相近的混合标推工作液,混合,、G2.M、M。的响应值应在仪器检测的线性范围内。，对混合标工标雅『作液中黄也霉囊
作液和样液等体积参
问分别为7.1min、
在上述色谱条件下，黄曲稳毒素定，
.9,2 mi
M，标准物质液相色
电谱图参见图A.工
7.4平行试验
按以上步骤
7.5空白试验
除不称取请
7.6回收率试出
向阴性试
妆率范围参见
结果计算
每种黄曲霍
武中：
试样进行平行试验测定。
，均按上述步骤同时完或空自试验min。
(G2M,M2考保留时
黄曲霉素 B1、J3:、GI、G2、M1亲加标准溶液，均按上述步骤操作，测定后计算试样中添加的回收率，添叫浓度及问S
含量的测定按式（1）计算
试样中被测组务留量，单位为微克每「克(ug/kg)；X.
从标摊工作曲线（得的被测组分溶液浓度，单位为纳克每享升(ug/mL)；样品溶液定容体程，单位为享升（mL)；样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。表示第主黄曲霉毒素，计算结果应却除空白值精密度
9. 1一般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，享复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性条下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（），牛奶和奶粉力黄曲霉声素B.BG、G2M,、M恭加浓度围及重复性方程见表+和2，GB/T 23212—2008
化合物名称
曲霉素3
黄曲霉毒素
黄曲鹤毒烹G
黄霉毒素 G
此由霖毒素 M,
黄曲霉毒索 Mz
添加浓度范围及重复性和再现性方程（牛奶）添加浓度花围
C, 002~~0, 02
0. 001--0. 01
0,C03--0.03
0. C03--0,03
C.005~.0.05
0, 005--- 2, 05
注：m芮次测定结果的算术长均值重复性限，
r-0. 082 8m +0. 135 6
r-0. 070 6m+0. 019 9
r=0.2G49m0.4593
r--0. 261 2m-0. 370 5
r-0. 135 4m+0. 034 7
=0. 219 6m0. 501 6
表2添加浓度范国及重复性和再现性方程（奶粉）化合物名秘
黄曲霉毒素 B,
黄曲莓毒蒸 132
黄曲萨素 G
黄雨军毒素G
黄曲M
黄曲霉毒素M：
添加浓度防围
C. 02 ~ 0. 2
0. C1~0. 1
0, 03-C. 3
C, 03~-5. 3
c. 05 --0. 5
0. 05--0. 5
注：为为次测定结秉的算术平均值重复性限r
r=0. 084 1m FC. 218 7
r0. 151 5m—9.155 8
T=0.1316m-0.C758
r-0.1326m+0.4572
r-0.150 7m-5.587 9
r=0. 150 0m-3. 647 6
单位为微克每下克
将现性限R下载标准就来标准下载网
R=0. 281 0m C.149 4
R=0. 226 6m+0. 034
R-0.401 1m -0.328 8
R=0. 342 4m—C. 305 G
R--0. 325 1m-0.080 8
R=0. 419 8m+-0. 269
单位为克每千克
斑性R
R=C. 192 9m I 1. 304 4
R=0.284 0m0.464 2
R-0, 153 6m+1.509 4
R=0.183 8m+0.732 9
R= 0. 246 1m / 2.496 4
R-C. 327 4m -7. 669 5
如果差值超过重复性跟，应舍弃试验结果并重新完成两欲单个试验的测定。9.3再现性
在再现性条件下.获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性跟（R），牛奶和奶粉中黄齿霉毒素B,B、GG2,M、M添加浓度范围及再现性方程见表［和表2。http:
附录A
（资料性附录）
标准物质色谱图
黄曲霉毒素 B,、B:、G1,G?、M、M, 标准物质液相色谱图见图 A、1。HU 12. 00 -
货的幕素Ma：
黄的霉毒紫 Mr
5素：
6黄率素B.。
GB/T23212—2008
图 A. 1黄曲霉毒囊 B1、B2、G,,G2、M1、M2标准物质液相色谱图合伙伴区
GB/T23212—2008
附录B
（资料性附录
回收率
黄曲霉毒素,B.G:、GM.、M,添加浓度及其回收率范围的试验数据见表B.1.表B.1黄曲霉毒素B.、Bz、G.、G2、M,、M,添加浓度及其回收率范围的试验数据化合物名称
黄曲霉毒素 B.
黄由素G
黄森素G
黄曲莓声素 M,
素 M2
添加浓度/(μg/kg)
回收率范雨/%
55. 0~71. 0
61. 5--67. 5
57.0~~76. 1
61.0~78.5
62. 7 --75. 5
63. 5 -~83. 5
6c. 4~-87. 8
71. 5~-86. 1
69.C-~96.7
62.C~.81. 5
64. 7~-95. 3
63. 3-~ 100
71.3.~-98.3
79.2~-91.3
75. 3--$6. 0
74,3.~102
58.8~$3. 6
7C. 1~-97. 5
66. 8-~85.2
71.8-86.2
43.0~-74.8
51.3~73. 5
50.8.--74.5
54.C~-75. 6
机伴网
添加浓度/(ug/kg）
回收率范国/%
51.8-~67.5
53.3---69.8
56. 9~-68. 5
58. 5-~72. 0
54. 2 ~73. 5
61. 5 ~ 77. 0
60. 8--80. 0
59.8-~80. 5
56.3~72.0
73.3--85.0
55. 1-~76. 0
73. 0~-83. 7
71.0~9%.7
81.5~95.5
83.3--93.3
77.0~-94.7
68.4-~86.8
66. 5.~90, 1
60. C~-86.8
72.4~90.2
51.0~64.6
61.6.--72.3
55.2~72.8
58.0-~71.
GB/T23212-2008
打单上规：2009年6月21月
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中华人民共和国
国家标准
牛奶和奶粉中黄曲霉毒素
B,,B,G1,G,,M,、Mz 的测定
液相色谱-荧光检测法
GB/T23212—2008
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