本标准规定了动物源性食品中玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮残留量的高效液相色谱-串联质谱的测定方法。本标准适用于动物肌肉、肝脏、鱼肉、蛋和牛奶中玉米赤霉醇、β?玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮残留量的测定。 GB/T 23218-2008 动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T23218-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T23218—2008
动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of zeranol residues in aninal original food-LC-MS-MS method
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-06-01实施
本标准的附录 A,附录 B 为资料性附录前言
本标准由中华人民共和国国家质量监替检验检疫总局提出并归口GB/T23218—2008
本标准起草单位：中华人民共和国皇岛山入境检验检疫局、中华人民共和国土海山人境检验检接局，
本标准卡要起草人：方晓明、盛水刚、王敏、王传现、庞国芳。1
1范围
动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的测定浚相色谱-患联质谱法
GB/T 23218—2008
本标雅规定了动物源性食品中玉米赤露醇（ztatol)、p-玉米赤等醇（B-ztatalanol)和玉米赤等烷酮(zeatalanone)残蛋的高效越制色谱-串联质谱的定方法。本标准适用于动物肌肉,肝脏,鱼肉、蛋和牛奶中玉米赤霉醇、3-玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮残留量的谢定。
本标准方法检出限为1产g/kg，
2规范性引用文件
下列文件中的系款通过本标准的引用而成本标准的茶款。凡是注口期的引用件，其随眉所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据在标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文低，其最新版本适用于本标难GB/T6379.1测氧方法与结果的推确度（正确度与精龄度）第 1部分：总则与定义(GB/T 6379.1 - 2004,IS0 5725-1,1994,IDT)GB/TG379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准測量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.22004,ISO5725-2：1994，IDTG乃/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987,M0D）3原理
样品经-葡萄糖苷酸-硫酸酯复合酶水解后，用乙醚提取，提取液经液液分配、HLB固相萃取杜净化后，用液相色谱-串联质谱仪测定.外标法定量。4：试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682一级水的标准。4.1甲醇：色谱纯。
4. 2乙睛:色谱纯。
4.3无水乙醚。
4.4三氮甲烧。
氢氧化钠。
乙酸钠(NaAc·3H,0)。
4.7磷酸：纯度大于 85%。
4.B冰乙酸。
4.90.5m1/L氢氧化钠溶液：称取20多氢氧化钠，用水溶解并定容至1L。4. 100. 05 m1ol/L乙腰钠缓冲溶液:称取 6. 8 g 乙酸钠,用 950 mL水溶解,冰乙酸调节 pH值至 4. 8,旋穿至1 I，
4.11磷酸溶液（1十4）：10mL磷酸和40mL水混合。4.12甲醇-水洛滋(1十1)50mL甲醛和0L水混合。1
GB/T 23218-—2008
4.139-葡萄糖苷酸醇-硫酸酯复合酶：96000U/mLβ-髓萄糖节酸酶；390U/mL硫酸酯酶（H-2,formhelix pomatia).
4.14玉米赤霉醇、B玉米赤霖醇和玉米赤霉烧酮标准物质：纯度三99为。4.15100 区/mL标准储备溶液：分别准确称取适量标准品（精确至0.1 tg）,用乙腩溶解,配制成浓度为100 \g/mL的标准储备溶蔽。一18℃以下冷冻避光保存。4.1610g/ml和1.0μg/mL的混合标准中间溶液：分别准确吸取1.Dml和0.10mL标准储备溶液（4.15)于10mL容基瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为10μg/ml和1.0μg/tnl混合标准中间溶液。0℃～4℃玲溅避光保存。4.17基质混合标准工作溶液：根据露要，取适量的混合标准中间溶滤（4.16），用空白样品提取液配成不同浓度的基质混合标准溶液。基质混合标准工作溶液现用现配。4.8asisHLB固相求取柱或相当者500mg/6tmL，使用前分别用5mL甲醇和5mL水预淋洗。4.19滤膜：0.20um
5收器和设备
液相色谱申联谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。5.2组织碎机。
5.3分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.4移液:10μ1.10μL,100μ1-1000 μL5.5均质器：100001/min
5.6涡旋混合器。
5.7恒温振药器。
5. 8离心机:4 000 r/tnin
5. 9 pH 计:测量精度±C., 02 μH单征,5.10
氮吹仪。
固相萃取装皆。
具塞离心管:5D ml.。
刻度试管:10 mL.
6试样的制备与保存
试样的制备
实验室样品用组织撼碎机绞锌，分出0.54作为试样。6. 2试样保存
试样置于·18℃冰箱，避光保存。7测定步翻
7.1样品处理
7. 1. 1 水解
称取5试样(精确至0.1)于 50 11L其塞离心管中，加人 10 mi.乙酸纳缓冲溶液(4.10)和0.025mLP-葡萄糖苷酸-碗酸酯复合酶（4.13),旋涡混勺.于37C水浴中振荡12h。7.1,2提取
水解后加入15mL无水乙醛，振荐提取5min后，以40001/min离心2min，将上清液转移至浓缩1）OasisHLB围相萃取柱是Water公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。2
GB/T 23218—2008
瓶中，再用15nl.无水乙避重复提取次，合并上清液，40以下旋转浓缩至近于，残留物加1.0mI三氮甲烷解后，转入10mL离心管中，再用3ml氢氧化钠溶液（1.9)润洗浓缩瓶后转移至同一离心管中，旋涡混匀，以4000r/min离心2min，吸取上层氢氧化钠溶液。再用3mL氢氧化钠液（4.9)重复润洗苯取一次，合并氢氧化钠溶液，加入1mL磷酸溶液（4.11).混勾后待净化。7.1.3净化
将样品提取液(7.1.2)转人HLB固相取柱(1.18)。用5mL水、5mI.甲醇-水溶液(4.12)淋洗，弃去，再用10mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液，整个固相苯取净化过程控制流速不超过2ml./min。洗脱液在40℃以下用氮气吹于。残留物用1.0mL乙腊溶解，旋泻混匀后，过0.2um滤膜，供仪器测定用：
7.2测定条件
7. 2. 1 液相色谱参考条件bzxZ.net
色谱柱：Cia，2m，50mm×2.0mm（内径）或相当者；柱温:40 ℃;
流速：0.2ml./min
进样量:5 μl;
流动相及梯度洗脱条件见表1。
流动相及梯度洗脱条件
时间/min
质谱参考条件
电离方式：电喷募电商（ES1)；离子源喷雾电压(IS):3500 V
离了源温度（TEM)：350℃：
喷募气流量：11L/min；
扫描方式：负离子扫描：
检测方式：多反应监测（MRM），监测条件见表2.表 2多度应监测条件
化合物中文名称
2-天米亦醇
玉米赤海醇
玉米赤舞烷酬
离子用于定盘，
化合物英文名称
zearalanol
catalanol
ceralenone
7.2.3液相色谱-串联质谱测定
7.2.3.1定性测定
母离子(m/z)
子离子（m/2）
去簇电压
水/浆
碰撞能盘/V
每种被测组分选择--个母离子，两个以.上子离于，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间3
GB/T 23218-2008
与基质混合标准工作落液中对应物质的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品谱图中各定性离子的相对丰度与液度接近的基质混合标准工作溶液谱图中对应的效性离子的相对丰度进行比较，着悔差不超过表3规定的范，则可判断样品中存在对应的待测物。表 3定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰虚
允许相对偏差
7.2.3.2定量测定
在仪器最工作条件下，用基质混合标推工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，以基质混合标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准上作曲线，用标准工作曲线对样品进行定屋，样品游液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范内。在上述色增条件下，β玉米赤霉醇、玉米赤暴醇和玉米赤烷标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见图A.1.图A,2和图A.3。本标准的添加回收率数据参见表B.1.7.3平行试验
按以上步骤，对同一样品进行平行试验测定。7.4空白试验
除不称取样品外，均按上述步骤进行，8结果计算
3-玉米赤霉醇、玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮残留量的测定按式(1)计算：y1 000
X——试样中被测组分残留盘，单位为微克每下克(ug/kg)：从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每率升（ng/mI)；-样溶液定容体积单位为毫升(uL)：-样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g）m
计辩结果应扣除空自位。
9精密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照CB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算，。
9,2重复性
在重复性试验条件下，获得的两饮独立测试结果的绝对差值不超过重复性限,试样中 β-玉米亦舞醇，米赤霉醇和玉米赤霉烷耐的添加浓度范国及重复性方程见表4。表4添加浓度范围及重复性和再现性方程样品基质
化合名称
}-玉米赤意醇
玉米赤舞醇
玉米赤萨烷漏
添加浓鹿范围
重性限r
gr-0, 860 6 lxm 0. 538 4
Igr-0. 749 3 Igm--0. 437 4
Igr=0. 878 4 lgm—0. 458 9
单位为旁克每千克
再现性限R
IkR=D. 873 3 lkm 0. 6C2 7
IgR-0. 792 1 lgm C.539 4
IgR=0. 928 2 lgm—0. 555 6
样品基质
化合物名称
β 玉米赤疆醉
玉淋赤雄酸
玉米赤爆烷酮
玉米亦肆醇
玉米赤蓉醇
玉米汞爆烷醇
β-玉米赤醇
玉米赤醇醇
玉米赤霉烷酮
β·玉米赤霉醇
玉米赤裤酸
玉米赤霉烷酮
注：证为两次测定值的平均值，泰加粮度范围
表4（续）
重复性限
Lgr=0. 863 1 Igm0.503 0
lg—0. 885 6 1gm—0. 431 9
Igr=0.890 8 lgm 0. 434 8
1gr=0, 781 9 Igm0. 429 5
Igr=0.856 1 Igm± C. 457 4
Jgr=0. 821 0 lgm—0. 429 3
1gr=0. 884 6 Igm0. 474 D
Ix3-0. 712 7 ixm -0. 392 4
Igr=0. 869 4 lgm-0. 464 3
1g-=0,9510 lgm—0.441 4
Igr=0, 920 1 lgm
1gr=0. 876 心 lgm-0. 438 7
GB/T 23218—2008
单位为迄克每干苑
再现性限R
IgR=0.8991 1gm0.5027
lgR=0. 917 6 1gm-0. 483 1
1gR=0. 950 2 Igm-0, 515 1
1gR -- 0. 805 5 lgm- 0, 491 5IgR0.831slgm-c.4951
IgR -.0.8665 Igm-0.4813
IgR=0, 73 4 Ig—0, 498 8
Jgf=0. 736 6 igm—u. 468 3
IgR=0.8338Igm-0,48C8
1gR - 1. 003 7 l2m- 0. 534 C1gR=0. 885 0 lgm-0. 528 5
IgR-0. 739 5 1gm
如果两次测定值的差值超过重复性限，应含弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
在再现性试验条件下，状得的两次独立测试结果绝对差值不超过再现性限R,试样中β玉米亦醇，玉米赤霉醇和干米赤穿烷酮的涨加浓度范围皮再现性方程见表4,GB/T 23218—2008
附录A
（资料性附录）
标准物质多反应监测(MRM)色谱图P-玉来赤需醇标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图A.1。X10):MRM(821.100D1-277.00DDO)0. 日
X10*MRM (321. 10001-302. 10156)2. 5 -
0.5 11.5 22. 5 ± .5 4 4.h 5 5.56 0.57 7.5 H 8.5
图A.1B-五米赤霉醇标准物质的多反应监测(MRM)色谱图米亦霉醇标准物质的多反应监测(MRM)色诺图见图 A. 2。X102MRM (521.00000--277,90000>8
0.511.5 2 2. 5 3 .54 4.55 5.5 6 6.5775RA5
X102MRM(321.00000-303.00000)2.5
t/cenin
0511522.53354565666.577588.5fmin
图A.2玉米赤霉醇标准物质的多反应监测(MRM)色谱图玉米赤烷酮标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图 A. 3,MRM（319.20001→275.00000）
X1021 MRM ($19. 20001301. 00000)3
GB/T23218-2008
4.5 55.5 66. 57 7.5
玉米赤霉烷酮标准物质的多反应监测(MRM)色谱图7
GB/T23218--2008
附录B
（资料性附录）
回收率
序·玉米赤霉醇,玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B,1,表 B. 1β-玉米赤霉醇,玉米标霉醇和玉米赤霉烷酮添加浓度及其平均回收率的试验数据样鼎基质
化合物名称
3-玉米添醇醇
玉米赤酶醇
京米赤蛋烷荫
3-五米苏器醇
来亦霉醇
玉米杰滞统制
-玉米亦霉醇
添加度/(μB/g)
平均回收率/
品基质
化合物名称
下米赤萎醇
玉米赤霉烷副
9-玉米赤莓醇
玉米赤霉醇
玉米苏霉烷
3-玉米赤益醇
五米志酶醇
玉米赤燕烷雨
表B. 1 (续)
添加浓度/(ug/g)）
GB/T 23218—2008
平均回收率/9
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