本标准规定了蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量液相色谱?串联质谱测定方法。本标准适用于蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定。 GB/T 22941-2008 蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22941-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/22941—2008
蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Delcrmination of lincomycin, erythromycin, spiramycin, tilmicosin tylasin, josamycin, kitasamycin, oleandumycin residues in honey-LC-MS-MS method
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录 A、附录 B为资料性附录。本标推由国家质量监督检验检没总局提出并归口。言
本标推起草单位：中华人民共和国案皇岛出人境检验检疫局本标准上要起草人：曾彦忠、张梅、贾光群、张游杰、石玉秋、宠国片。http：//foodmate.netG3/T22941-2008
1范围
蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T 22941—2008
木标湘规定了蜂蜜中林川霉素红霉索、螺旋霉素、替来考望、泰乐菌素，交沙霉素、古他霉素,竹桃素残留最液相色谱-中联成谱测定方法。本标准适用子蜂索中林可霉索、红霉素、螺旋霉素、替米考、泰乐菌素，交沙霉素，吉他霉素，竹桃霉素残留量的测定。
本标准的方法检山限均为2.0ug/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。州是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不创括期误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不能日期的引用文件：其最新版本适用丁本标推。G13/T 6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1—2004,ISO 5725-1:1994,1LIT)GB/T6379.2测量方法与结果的推确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测方法重复性与再现性的进本法（G13/T6379.22004，IS0)5725-2：1994.II))GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(CB/T 66822008,ISO 3696：1987,MOD)3原理
蜂密中残留的林川素红露素、璨旋藓素，替米考呈、泰乐菌素，交沙霉素、古他霉素，竹桃穿素用三羟甲基氨基甲烧(Tris)缓净溶没(pH.1)氨取,划滤后,经(ns1HI.B固相萃取柱\或相当的固相萃取柱净化，用甲醇洗脱并蒸干，残渣用乙腈-0,C1mol/I.乙酸铵溶液溶解，过0.2Hm滤膜后，拌品溶液供液框色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。4试剂和材料
4.1水:(GI3/ 6582,—级。
4. 2 中醇:色谱纯
4.3之腩：色谱纯，
4.4三羟甲基氨基甲烷(Tris):优级纯。4.5氯化钙(CnCI·2H0)：优级纯4.6乙酸铵：优级纯：
1）OsisHI.同福举取证Warts公产品的商品名称，给出这信息为了方便本标谁的使用套，并不尼表示对该产品整认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可恢用这些等效产品，GB/T 22941—2008
4.7盐酸：优级纯。
4.8淋洗液：甲醇溶液（.2+3)。量取1GmL甲醇（4.2)与60mL水混合：4. 90. 01 m01/L乙酸铵溶液:称取 0. 77 g Z.酸铵(4. 6)落于 1 000 mE水中。4.100.2mol/.一羟甲基氢基甲烷(Tris)缓冲落液：称取12.0 g三羟甲基氨基H烷(1.4)和7.35只氯化钙（4.5），放入1000ml.烧杯中，加人800ml.水溶解，用监酸（4.7)调至p11值为9.0月月水定容至 1 000 mL.
4.11定容液：Z腈-0.011ol/L 乙酸铵溶液（3十17)。量取15ml.乙(4.3)和sml.2.酸铵溶淤(4.9)混合均匀。
4.12标准物质：林可需素（CAS:7179-45-）、红莓素（CAS：59319721）.螺旋绿素（CAS：8025-81-8），替米考星（CAS.08050-04-0）、泰乐菌素（CAS：7460-55-2）、交沙霉素（t:AS：16816-24-5）、片狗霉素(CAS：1392-21-8)、竹桃德素（CAS.7060744)，纯度≥99%。4.130.1mg/nL标准情备落液：报确称取适量的各标准物质（4.12），用币醇分别配成0.1tmg/l.的标推储备溶被。该落澈在4℃保存。4.141.0μg/ml.混合标准L作溶液：吸取各标准储备溶液（4.13)0.1Iml移全10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液在4“C保存，4.15内标物质：岁红素（CAS.80214-83-1）、克林露素（CAS:21462-39-5），纯度09%4.160.1ng/nL岁红露素.克林每素内标储备溶液：准确称取适量的罗红摄素、克林得素标难物质(4.15)、用甲醇配成(0.1rug/ml.的内标储备溶液。该溶液在4℃保存4.171.Cμg/ml.混合内标.1作溶液：分划吸取罗红霉素和克林霉素内标储备液（4.16)0.1mL移至10mL容或瓶中，用甲醇稀释至刻度。该落滋在4保存。4.18基质标准7作液：吸取不同休积混合标准工作落液（4.[4)和201u1.混台内标下作溶波（4.17）用空白样品提取液配成2.0ng/ml、5.0ng/mL、10.cng/tnL、20.0ng/ml、:0.0ng/ml.不同浓度的基质标准工作落液。当天配制。
4.19OasisIi.1固相萃取柱或相当者：200ng，6nL使用前依次用5ml.中醇（4.2)利19mni.水活化，保持柱体湿润。
4.20滤膜：0.2m.
5仪器
镀相色谱-串联质谱仪：配右电遗雾离子源。5.2分析天平：感量0.1ng和0.01g：5.3氮气浓缩仪。
5.4液体混勺器。
5.5液器：50mL
5.6真泵：最大负压80kPa，
5.7同相萃取装置。
5.8干管:l0 ml.。
试样的制备与保存
6.1试样的制备
对尤结品的实验窄样品，将其拌乌勺。对结晶的样品，在密情况下，置于不超过55的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后揽勾，冷部雀室温。分出0.5k作为试样。制备好的诚样置了样品瓶2此内容来自标准下载网
中，密封，并做标记，
6.2试样保存
将试样子常温下保存。
7测定步骤
7.1提取
GB/T 22941—2008
称圾2g试样，精确至C.01g，置于5rmL三角瓶中，加人20mL混合内标作液（4.17），加入25nTris缓冲溶液（4.10），于液体混匀器（5.4)上快速混勺1Imin，使试样完全溶解7.2净化
将塞有玻璃施的玻璃贮液器(5.5)连到OasisHLB固相萃取柱(4.19)上，祀样液倒人玻璃贮液器中，调节流速小子3mL/min，待样液完个流出后.依次用5mL水和5mL淋洗液（4.8）洗柱，弃去全部流出液。域压抽干20min，然后用5mL甲醇（4.2)洗脱，收集洗脱液下10ml.吹-f-管（6.8）中：用氨气我缩仪（5.3)于50吹下：准确加入1.0ml.定容液（4.11)解残渣，过0.2μm滤膜后，供液根色谱申联质谱仪测定。
按上述操作步骤，制备用了配制系列质标准工作溶液的样品准自提收液。7.3测定条件
液相色谱参考条件
色谱柱：AtlantisCs，3n，IEsomm×2.1mm(内径）或树当者：b)
流速:0.2 ml/mn;
柱漏：30；
避样量：20pL：
流动相：A.7腈，3.0.1%甲腰溶波，：甲醇。梯度洗脱条件见表1。表1梯度洗脱条件
时向/min
质谱参考条件
高了源：电喷雾离子源；
扫描方式:止离了扫描；
检测力武：多反应测；
电喷雾电压：5500V;
需化气压力:0.069 MPa;
气压力：0.o9MP
辅功气流速：71/mi;
高了源温度：45C℃；
定性离了对、定量离子对撞气能量和去簇电压见表?。htt
GB/T 22941--2008
化合物中文名称
林可聋素
红筹素
螺流等素
荠米考星
森萄索
交沙霉素
吉他霉素
竹桃稀素
表2定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压化合物英文名族
linccnycin
uiythromytin
epiramycin
itnicesin
rylasin
josamycin
zitasamycin
oleandornyein
7.4液相色谱-串联质谱测定
7.4.1定性测定
定性离千对
(rn/2)
407/126
407/359
688/158
588/541
734/158
734/576
864/174
869/132
916/174
916/145
425/126
425/377
843/122
8137174
772/215
772/109
定缺离了对
(rm/e)
107/126
688/138
7341/158
869/174
916/174
125/123
843/143
772/215
碰撞气能册/
老簇压
被测组分选择1个母离了,2个以上广离产，在和同的试验条件下,样昂中待测物质的保留时间与标证溶液中对应的保留时间偏差在十2.5%之内；且样品中各组分定硅离了的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离了的相对卡度进行比较，若偏差不超过表3观是的范围，则判样品中存在对应的持测物
表 3 定性确证时相对离子半度的最大允许偏差相对子度K
充许较大痛益
7.4.2定量测定
以火表示
在仪器的最佳工作条待下，用基质标准工作露液（1.18)分别样，以各标准踏液巾被测组分峰面积与内标物峰而积的比值为纵坐标，以各标准溶效被测组分浓度与内标物浓度的比值为横标，绘制标准「作曲线用标下作谢线对样品逊行定，样品游液中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考尾、泰乐菌靠，交沙提素，售仙凝索，竹桃霍素的响成值均府在俊器测实的绒范围均：在负譜系件和质条件下，林可霉索、红霉素、螺施莓素、替米考星、素乐南素、交沙霉素、古岱筹素、竹桃霉素的参考保留时间见表4。林可猎素、红霉素、螺凝符素，替米考昆，泰乐菊素、交沙霉素、古伯莓素，竹桃享索的标滩物质多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图A，！。本方法的添加平均问收率数据参现附录B中哟表1表 4林可霉素、红霉素、螺旋霉素,替米考呈、泰乐菌素、交沙霉点,吉他需素、竹桃霉参考保留时间化合物名款
林可猴素
红苏素
品林伴网
保智洲间/min
7.5平行试验
化合物名称
昏米考星
森乐密素
交沙霉素
吉他霉索
竹桃霉素
表4（续）
按以上步骤，对同一试样逃行平行试验测定。7.6空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤避行。8结果计算
保留时间/min
GB/T 22941—2008
蜂鳖中林可霉素、红素、螺旋霉素、替米考军，泰乐菊紫交沙霉素、吉他素、竹桃霉索残曾望的测定结果按式(1)计算
式中：
-试样中被测物残留量，单位为徽克每于克（ng/kg）；1000
基质标推工作溶液中被测物的浓度.单位为纳克每毫升（ng/mI.)：A
试样溶液被测物的色谱峰面积：A，一一基质标准工作溶液中被测物的免谱峰两积；c.
试祥溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升（n1g/mL)：基质标摊工作溶被中内标物的浓度，单位为纳克排（/mL）；基质标准工作溶液中内标物的包谱峰而积；试样溶液中内标物的色谱峰面积；样液最终定容体积，单位为毫升（)：试样溶液所代表试样的质片，单位为克（g）。计算结果成扣除究自值，
9精密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照（3/G379，！和（3/T6379.2规定确短的，其重复性和再现作的值是以95为的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性试验条件下，获得的调欲独立测试结累的绝对差值不超过重复性限了，蜂蜜中称可霉素，红素，螺旋带素、替米考型，泰乐菌素、交沙恶素、古他需、竹桃霍素添加浓度范围及币复性方程见表5。
htt
GB/T 22941-2008
化合物名称
林可莓素
红霉素
螺璇霉索
潜求考
泰东茵索
交沙霉素
吉他蒋素
竹桃惩兹
表5添加浓度范周及重复性和再现性方程新加依度范
2. 0 ~50. 0
2. 0~ 50. 0
2.0~·50.0
2. 9~-50.0
2.0~·55.0
2. 0~ 52.0
2.0~-50.0
2.0--50.0
注：m为两测定值的算术乎均值。重复性限？
Ig 7 -1. 051 0 ig m- 1, 265 0Ig r. 1. 033 5 lg - 1. 225 1Ig r-0. 870 2 ig m -1. 101 4lgr1.0934gm-1.3451
lg r-0. 970 7 lg m- -1. 145 3Ig r-0. 937 9 le in- -1. 177 9Ig r=1. 02C 8 lμ m- 1. 338 6lgr=0.9757lg1.2742
单位为微克每干克
出现许跟R
lg R - 2. 865 6 x n - 0. 652 0l R-1. 11c 8 Ig m -0. 999 1
Ig R - 1. 102 8 lg m -1. 016 0Ig R-0. 902 1 lg m0. 807 0
Ig R-0.815 7 1g m 0, 680 1
lg R-C. 857 1 lg m 0. 756 5
Ig R=0. 919 8 Ig m 0. 9:G 4
Ig R-u. 886 3 1g m--0. 581 9如果差值超过重复性限一，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的筑对差值不超过再现性限R,蜂蜜中林可霉素红素、螺旋霉素、替米考晕、泰乐菌素、交沙莓素、舌他霉素、竹桃霉素的添加浓度范问及再现性方程见表5.
http:
附录A
（资料性附录）
标准物质多反应监测（MRM)色谱图GB/T 22941—2008
林可行素、红霉素、螺旋霉素、替米考是、泰乐菌素，交沙得素，吉他舒素，件桃得素标准物质多反应监诞(MRM)色谱图见图A1。
成9.00e4
值8. 004
信1.424+
8-10121416//mm
娱航酶素
1012745/mi
泰乐关著
810121416/mm
他蒜紫
哨1.6esy
销1. 2ec5
值3. Uc4
响1. He5/
16810121416/
红能素
桥米学乐
21416/cain
1012 14 161/mn
交沙解
6810 12 (4 161/mm
竹桃莓素
4a 1a 14 Tn nim
图A.1标准物质多反应监测(MRM)色谱图合品伙伴网httn：
GB/T 22941—2008
附录B
（资料性附录）
回收率
本方法中林可释紫、红霉素、螺旋素、替米考星、泰乐菊素、交沙莓素、吉他霉素、竹桃霉素添加浓度及平均回收率的试验数据见表3.1。表B.1林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐茵素、交沙需素、吉他霉点、竹桃霉录添加浓度及平均回收率的试验数据化合物名称
林可霉素
红霉素
螺旋素
替米考
泰乐荫茶
交沙海素
古他教
漆加滋度/(ug/kg）
合品秋伴网
平均回收率/洛
化合物名称
竹桃霉素
表B,1（续）
语加浓度/(ug/kg)
http://foodmate.netGH/T22941—2008
平均回收许/%
GB/T 22941-2008
打即：2009年4H28
中华人民共和国
国家标滩
蜂密中林可霉素、红窑素,螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙雷素、吉他需素、竹桃需素残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GE/T 22041: 2008
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