本标准规定了蜂王浆中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量液相色谱?串联质谱测定方法。本标准适用于蜂王浆中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定。 GB/T 22945-2008 蜂王浆中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22945-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICs 67.050
山华人民共和国国家标准
GB/T 22945--2008
蜂王浆中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of streptomycin,dihydrosireplomycirand kanamycin residues in royal jelly--LC-MS-Ms meihod2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标证的附录 A,附录B为资料性附录。本标准由国家质显监督检验检疫总局提出关归I。本标准起草单位：中华人民共利润秦皇岛出人境检验检疫局本标准主要起草人：刘晓茂.张守年张进杰.尊彦、尊亚平，孙海侠、庞国炸，http：//foodmate.netGH/T22945—2008
1范围
蜂王浆中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T22945—2008
本标谁规定了单工浆中链霉素、双氢链需索和卡那辑索残留量液相色谱-中联质谱测定方法。本标准适用于肇干浆中链霉素、双氨链霉素和卡那报素残留量的测定。本标的为法检出限：链称素、双链需素和下那霉素的检出限均为10.0/k：2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的用前成为本标准的条款，凡是注口期的引带文件，其随后所有的修改单（不包括谢的内容)或修订版均不适用下本标准，然而，效励根据本标推达成协议的各方硼究是否可使刑这些文件的最新版本，凡是不耗日期的引用文件其最新版本适用于本标准，(R/T37.1测方法与结果的征确度（正碟度与精密度）第1 部分：总则与定义(GB/T 6379. 1—2004,1SO) 5725-I:1994,IT)GI3/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现们的基本方法(GB/T6379.2.-2001,1S0 :72,-2：1994,IDT)G3/T6682分析实验用水规和试验方法(CB/T6582-2008.1SO3696：1987.MO))3原理
蜂于浆试样巾的抗生案磷酸溶液提取，三氮乙酸沉淀蛋白，用苯磺酸型和羧酸型固相萃取柱净化。液相负谱-平联质谱仪(ESI十)检测，外标法定垦。4试剂和材料
除另有说明外-所用试剂均为优级纯。4.1水：GB/T6682--级，
4. 2甲醇;色落纯。
4. 3乙睛：色滋纯。
4.4甲酸。
4.5浓磷酸。
4.6磷酸氢二钾（K,HPO）
三氯7.酸(C,HCl, ,)
4. B虞烷磺酸钠(,HsNaO,S-H,O),4.95%磷酸溶液(1+19):联h0 mL浓鳞暧(4.5).用水能容至1 E.4.100.2 1n101/L磷酸盐缀冲溶液:P1I一8.5，称取 31.8 g磷酸氢一钾(4.6)用水溶解定容至1 1.,用氢氧化钠溶瑕调节pII=8.5.
4.11一乙酸溶液:50%(质量分数)。取20 g三氯乙殷(4.7),用水定容至20 m上。4.120.iot/.胰磺酸钠溶液：称取2.20号庚烷横酸钠（4.8),用水溶解，定容至1L4.13SPE凯脱溶液：取4 r:1l.甲酸(4.4)用0.01 mol/I.庚烷酸钠溶液(1.12)定容至[C0tnl4.1425%4醇液（113）：取35mL中醇(4.2),用水定容至100ml.门

GR/T 72945—2008
4.15标准物质：链霉素(CAS:3870-74-0)、双氢链莓素(CAS:128-46-1)和下那辑素（CAS:2:389-94-0)，纯度购298，
4.161,0mg/mL标确储备溶液：称取适量的链套素,双氢链霉素和卡那霉索标准物质（4.15）.分别用0.3%7酸水溶溶解并配制成1.0mg/ml的标雅储备济液。避光保存下-18℃冰柜中。4.170.1μg/mL混合标准溶液：吸取适量链霉素、双氢链露素和卡邮霉素标准储铲溶液（4.16),用0.3%乙酸水稀释成0.1g/ml.的握合标推溶液，避光保存于18℃冰柜中，4.18 举磺酸型固相萃取柱(500 mg,3 ml)或相当者。使用前依次用 5 LFI醇和 10 mL水预处理,保持社体湿润，
4. 19 羧酸型固相萃取杜(500 mg,3 ml.)或相当者。使用前依次用 i ml.甲醇和 10 ml. 水预处理,保持柱体湿润，
4.20德膜：0.2un，
5仪器
5.1羧相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.1mg利0.01g。5.3液体混匀器。
5.4固相萃取装置，
5.5均质器。
5.6真空录：真空度应达到80 kPa。5.7行
微量注射器：25μL，100μL
5. 8 PH计:测量精度 t-0. 02 pH 单位。5.9具塞离心管：100mL。
5. 10 刻度离心管,5 mL,
5.11被器.50 ml.。
离心机:转速 4 00 r/min 以上。6试样的制备与保存
6.1试样的制备
实验室群品混合英射，分出,5k作为试推6.2试样保存
试样暨于-18℃冰柜，避光保存
7测定步骤
7.1待测样品溶液的制备
7. 1. 1 样品提取和初净化
称取蜂浆样品10（粘确到0.01）.骨→100ml.离心管，加人30In1.5%磷酸溶液（4.）,均质3min并用5%磷酸溶液清况均质器刀头合并洗涤液，加入3ml氯2.殿溶羧（t.11)涡旋混合后在4000r/tnin下离心13min.上清液全部倒人下接苯磺酸型周相苯段柱（4.18）的液帮中.在固相获取装置上使样液以小上 2 mL/mi的流速通过萃取柱，待凌全部通过固相苯取柱后，依达 5 mI5%磷酸溶液(4.9)和10 InL水洗涤苯磺酸型凹相萃取柱（4.18),弃去全部流出被。20mL.磷酸盐缓冲溶液(4.10)洗脱至5) ml.离心管中，7.1.2样品溶液再净化
1述洗脱液倒人飞接发酸型原相萃取柱1.9)的贮液器中,在司树笨取装置1:仗样液以小上2
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2 nL/min 的流速通过萃取柱待样羧全部通固相萃取柱后,依次用 1 mI. 水和 1 mI.甲醇溶液(4.11)洗涤羧酸型相萃取柱(4.19),弃去个部流出液。减压抽干酸型固相萃取柱(4.19)3) tnin。用 2 ml.SPF洗脱(4.13)洗脱至 5InL刻度离心管中,用 SPE洗脱液(4. 13)定容 2. 0 mL,混勾后过0,2m滤膜4.20)，供液色谱串联质谱测定。7.2基质混合标准校准溶液的制备称取五个阴性蜂正浆样品10（精确到（.01g）,分别置于100tml.H塞离心管巾，加人适量混合标准溶液（4.17)，制成链承素、双氢链霉素和-那霉素含量均为5.Gug/kg、10.0ug/kg、2c.0ug/kg、100.0ug/kg和200.0tg/kg的基质标准溶液，其会按7.1步骤操作完成，1.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
色谱柱：Atlantis(，3.5utt，150mx2.1mtn(内径）或相当者；b）柱温：10；
进样量：30pL；
流动相：流动相A为0.1不中酸水溶液，流动相1为0.1%甲避乙腈溶液，流动相（为甲醇。梯度洗脱参专条件见表1，
时间/nn
质谱参考条件
液速/(aL /n2:n)
离子源：电喷雾离于源(ESI)：
扫描方式：正离子扫措；
液相色谱梯度洗脱参考条性
流达相A/%
检测方式：多反应监测(MRM)：
电噬雾电压(IS):5 000 V;
辅助（AUX）流速：7I./min：
辅助气温度(TEM)：i50℃：
聚焦电压（FT)：150V；
链套素、双氢链莓素科卡那素的质谱参数见表2，流动相15/%
表 2链霉素,双氨链霉素和·卡那需素的质谱参数化合物名称
链葡素
(strepteny:in)
双氢链素
(dilyd:ustreptomycin)
(kamnyin)
定性离子对(m/2)
5827263
582/24G
584/263
554/246
485/163
485/321
守趾离了刘
582/253
5827263
485/163
合品秋伴网ht
云解电(
采集时间/
流动相 C/为
撞气能单((E)/
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7.4液相色谱-串联质谱测定免费标准下载网bzxz
7. 4. 1定性确证
每种被测组分选择「个过离子，2个以上于离子，在相同试验条件下，样靠市待测质的媒留时间与混合其质标准校准溶液中对应组分的保留时问遍差在士2.5%之内；月样品谱图中各纽分的相对离子卡度与浓度接近的混合基质标校准游液谱图中对应的相对离了卡度进行比较，偏差不超过表3规定的范国，卿可判定样品中存在对应的待测物。表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子斗度K
分许最人偏券
7. 4. 2 定量测定
以%凑示
外标法定量：在仪器最传工作条件下，对链霉素、双氢链再素和卡那霉素的混合基质标准校准溶进样测定，以混合基质标准校准溶液浓度为坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标雅工作曲线对待测样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范国内。链霉素,双氢链霉素和卡那赛素的多反应监测(MRM)色谱图参见附录 A中的图A,1。链霉素,双氧链得素和卡挪需素的添加浓度及其平均回收率的试验数据参所附录B中的表B.17.5平行试验
以上步骤，对同--试样逊行平行试验测定。7.6空白试验
不称取样品，其余均按试样步骤进行。7.7回收率试验
朗性样品中添加标推溶液，按7.1和7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。8
结果计算
链霉素双名靠素和卡那霏素的残留按式(1)计算。X=tX
式中：
X：试样中被测组分残留量，单位为微克舒千克(ug/kg)；r一一从标推［作曲线得到的被测组分溶皴浓度，单位为纳克每开（1g/mL)V一样品浴液最终定容体积，单位为需升（ml.）：m：样品液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。计算结果应拉除穿值。
9精密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据尼按GB/T5379.1和GB/T6379.2规定确定的，重复性和再现能的值以95为的可信度来计算，
9.2重复性
在重复性试验条件下，猴得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复证限7。链需素、双氢链独素和卡那毒素的淤加浓度范围及重复性方程见表1，1
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化合物名称
链惩素
双宝链零素
那霉茶
表4添加浓度范围及重复性和再现性方程添加浓度范围
5.4--209.0
5.0-~205. 0
8. 0.~202. 0
注：m为两次测定结果的算术平均值，章复限，
Igr 1. 124 4'g 1.031 6
Igr-1.179 7lgm 1. 016 2
Igr-0. 981 0lgm -1. 002 0
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单位为微克每干克
现性限R
IgR-1. 14c 1lgm1. 021 3
Igk-1. 023 2lgm -0. 983 8
IgR=0. 935 31gm—0. 9R4 4
如果差值超过重复性限一.应舍弃试验结果并重新完成网次单个试验的测定。9.3再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R。链需素,双氢链霉素和卡那霉素的添加浓度范调及再现方程见表1。http:/
unFondn
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附录A
（资料性附录）
多反应监测(MRM)色谱图
链霉素、双氢需素和卡那露素的多反应监测（MRM)他谱图见图A.115wg
30 000-
25000-
10 000-
6E2/263
双海素
581/263
16/muin
链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的多反应监测(MRM)色谱图图A.1
http:
unFonc
附录Ｒ
(资料性附录)
回收率
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错霉素、双氢链霉素和卡那霉素的添加浓皮及其平的回收率的试验数据见表B.1表B.1链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的添加浓度及其平均添加回收率添如浓度/
(μg/kg)
蜂密样品守链荐素、双氧链素和卡那霉素的平齿回收率/%钱疆素
http：
双象链军素
ate:ne:
Eondme
东邯鞍素
CB/T 22945-2008
打H期：2009年1月28日
中华人民共知闲
国家标准
蜂王浆中链霉素,双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定波相色谱-串联质谱法G/T 22945208
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