本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中阿维菌素类药物伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的液相色谱?串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定。 GB/T 22953-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22953-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T22953—2008
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素，多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of ivermectin ,abamectin,doramectin and eprinomectinresidues in fugu,eel and baked eel--LC-MS-MS method2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录，前言
本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22953—2008
本标准起草单位：中华人民共和国案皇岛出入境检验检局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局。
本标准主娶起草人：林峰、吴映璞、姚仰励、欧阳少伦、林海丹、庞国芳。I
1范围
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T 22953—2008
本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中阿维菌素类药物伊维菌素（ivcrmectin）、阿维菌素（abamec-tin)、多拉菌素（doramectin）和r乙酰氨基阿维菌素（eprinomectin）残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于河豚鱼無肉、鳗色肌肉、烤鳗中伊维菌素、阿维菌索素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定。
本标准的方法检出限：河豚鱼肌肉、毁鱼肌肉、烤鳗中伊维菌素，阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素均为5μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第 1 部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-—2004,ISO 5725-1,1994,IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，IS05725-2：1994，IDT)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987,MOD）3原理
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留用乙提取后，正已烷脱脂，中性氧化错柱净化。样品溶液供液相色谱-串联质谱仪检测，外标峰面积法定量，4试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的级水。4.1乙腈：色谱纯。
4.2甲醇。
4.3正己烷，使用前以乙腈饱和。4. 4 中性氧化铝:活度 I级。
4.5无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。4.6中性氧化铝净化柱：取-空的固相萃取柱管，下部填人少量脱脂棉，装入2g中性氧化铝（4.4)，上部再填充4g无水硫酸钠，使用前装填。4.7伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素标准物质：纯度≥99%。4.8100μg/mL标准储备液：准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标准品（精确至0.1mg），用乙腈分别配制成100μg/mL的标准贮备液，一18℃储存。1
GB/T 22953—2008
4.90.500μg/mL混合标准T作液：准确吸取0.500mL伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氮基阿维菌素标准储备液（4.8)至100mL容量瓶中，以乙腈稀释并定容，此混合工作液的浓度为0.500μg/mL。一20℃储存。
4.10基质混合标准工作溶液：根据需婴，吸取不同体积的混合标准工作液（1.9)，用空白样品提取液配制成不同浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制。4.11滤膜：0.2μm。
5仪器和设备
5.1液相色谱-申联四极杆质谱仪，配有电喷雾电离源。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3组织热碎机。
句浆机:转速于或等于8 000 r/min。5.5离心机：转速大于40001/min。5.6超声波水浴。
5.7液体滤匀器。
5.8固相萃取装置。
5.9氮吹仪。
6试样的制备与保存
取样品约500g用组织揭碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记，于一18℃冰箱中保存。
制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。7测定步骤
7.1提取
准确称瑕2g组织样品（准确至0.01g）至50ml.离心管中，加人8tmL乙睛（4.1），勾浆机上8000z/min均质20s，4000/min离心5min，上清液转移至50mL离心管中，另取一50mL离心管加入8mL乙睛，洗涤匀浆刀头10s，洗漆液移入前一离心管中，用玻摔捣碎离心管中的沉淀，液体混勾器上振荡30s，4000r/min离心5min，上清液合并室50mL离心管，离心管中的沉淀再加人6mL乙腩，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器上振荡30s，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL离心管中，乙睛定容至25.0mL刻度，混匀备用。7.2净化
向上述装有样品提取液的50mL离心管中加入10mL乙腈饱和的正已烷（4.3）脱脂，涡旋振1min，4000t/min离心5min，弃去上层正已烷，重复此操作一次，下层乙溶液待用。将中性氧化铅净化柱（4.6)安置在固相萃取装置上，准确移取10.0ml.口脱脂的样品提取液至中性氧化铝净化柱中，控制流速在1mL/min～~2mL/min，用2mL×2乙淋洗净化柱，收集全部流出液，流出液转移至吹氮管中，50℃下氮气吹至干，用1.00mL乙腈溶解残渣，并置超声波水浴中超声振荡10 min,0.2μm滤膜(4.11)过滤，供液相色谱-串联质谱测定。7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：lntersilC8-3柱，5μm，150mm×4.6mm（内径）或相当者；b）柱温：40C；
进样量：25μ
流速:0.8 mL/min:
流动相：甲醇十水，梯度洗脱，见表1。表 1 梯度洗脱程序
时间/inin
质谱欲考聚件
离子源：电喷雾电离源(FSI)；
扫描方式：负离子扫描：
检测方式:多反应监测(MRM):
甲醇/%
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雾化气、气帘气、辅助加热气、磁撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流d
量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电乐、去集簇电压，碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度！
监测离子对和相应的参考质谱参数，见表2。伊维菌素、阿维菌素、多拉菌紊和乙酰氮基阿维菌素的监测离子对和相应的参考质谱参数化合物名称
伊维菌素
阿维菌素
多拉菌案
乙酰氨基阿维菌素
定性离子对
873.7/567. 8
873.7/229. 2
871.7/565.2
871.7/229.3
897.6/591. 4
897,6/229.0
912.5/270.0
912,5/565.4
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3. 3. 1定性测定
定量离子对
873.7/229.2
871.7/565.2
897. 6/591.2
912.5/565.4
采集时间/
去巍电压/
碰能量/
每种被测组分选择1个母离子，2个以F子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准落液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物，表3定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度 K
允许最大偏差
7. 3. 3. 2 定量测定
20KA50
10K≤20
以%表示
K≤10
外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样（4.10），以峰面积为纵坐标，基3
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质混合标准溶液浓度为横坐标绘制标推工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定最，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。四种阿维菌索的标准物质的多反应监测（MRM）色谱图参见附录A中的图A.1～图A.1。四种阿维菌素的添加浓度及其平均国收率的试验数据参见附录B中的表B.1。
7.4平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌索、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的残留量按式（1)计算：x×10%
式中：
试样中被测组分残留量，单位为微克每干克（ug/kg);X
从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；V—样品落液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m“样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克()。计算结果应扣除空白值。
9精密度
一般规定
本标准的精密度数据尼按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限被测物的添加浓度范围及重复性方程见表4、表5、表6。表4添加浓度范围及重复性和再现性方程（基质为河豚鱼肌肉）单位为微克每干克化合物名称
伊维菌素
阿维菌素
多拉菌素
乙酰氨基阿维菌素
恭加我度范
注：m为两次测定结果的算术平均值。重复性限T
r=0. 243m-0. 242
r=0,325m—0.76
r=0. 228m+0. 072
1g r=1. 391g m-1, 05
再现性限 R
R=0.261 72+0.277
lg R=0.9651gm—0.591
R=0.376m-1.43
表5添加浓度范围及重复性和再现性方程（基质为缦鱼肌肉）单位为微克每干克化合物名称
伊维菌豪
阿维菌察
多拉菌素
乙酰氨基阿维菌素
添加浓度范围
注：m为两次测定结果的算术乎均值4
重复性限，
r=0. 109m+0. 367
r=0. 234m—0. 702
r=0. 229m—0. 363
+=0. 199m—0, 563
再现性限R
R=0.217m-0.188
R=0. 191m+0.149
R=0.262-0.587
R=0. 203m—0. 240
化合物名称
伊维菌素
阿维菌素
多拉菌离
乙酰氨基阿维菌素
添加浓度范围及重复性和再现性方程（基质为烤鳗）表6
添如浓度范围
注：m为两次测定结果的算术平均值。重复性限r
lg r=0,88alg m-0.583
r=0.252m—0,771
r-0.239—0. 020
=0. 295m-1. 200
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。再现性
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单位为徽克每干克
再现性限R
1g R=1. 15lg m-0. 875
R=0.288m—0.775
R=0.232m+0. 214
R=0.248m-0. 478
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的添加浓度范围及再现性方程见表4、表5、表6。GB/T22953-—2008
附录A
(资料性附录)
标准物质多反应监测(MRM)色谱图伊维菌素.阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标准物质多反应监测（MRM)色谱图见图A.1图A.4。
图 A.1阿维菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图6. 6
图 A.2伊维菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图6.3
日000.DO
4 000. 0-0
图A.3多拉菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图6wwW.bzxz.Net
图A，4
5 000. 0 -
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乙酰氨基阿维菌素标准物质的多反应监测（MRM)色谱图7
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附录B
(资料性附录）
回收率
伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收萃试验数据见表B. 1
表B.1伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的添而浓度及其平均回收率试验数据样品基质
河豚鱼肌肉
馒鱼肌肉
化合物名称
伊维菌素
阿维菌察
多拉菡案
乙酰氨基阿维菌素
伊维菌素
阿维菌素
多拉菌素
乙酰氨基阿维菌索
添加水平/（μg/kg）
平均回收率/%
104, 4
样品基质
化合物名称
伊维爾案
阿维谢紫
多拉菌案
乙酰氨基阿维菌素
表B.1（续）
添相水平/（ug/kg）
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平均回收率/%
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