本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物和代谢物残留量的液相色谱?串联质谱检测方法。本标准适用于液相色谱-串联质谱法测定河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中奥芬达唑、芬苯达唑及它们的代谢物奥芬达唑砜，阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜，甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑，氟苯咪唑及其代谢物2-氨基氟苯咪唑，噻苯咪唑及其代谢物5-羟基噻苯咪唑，噻苯咪唑酯，氧苯达唑的残留量。 GB/T 22955-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22955-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

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中华人民共和国国家标准
GB/T 22955—2008
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of benzimidazoles residues in fugu,eel and baked eel--LC-MS-MS method
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标摊的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质基监哲检验检疫总局提出并归口。GB/T 22955—2008
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇朗出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫周。
本标准主要起草人：林峰、林海丹、吴映磁、张美金、邵琳智、庞国芳。1
1范围
河豚鱼，鳗鱼和烤鳗中苯井咪唑类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T 22955—2008
本标准规定「河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物和代谢物残量的液相色谱-中联质谱检测方法。
本标准适用于液相色谱-串联质谱法测定河豚鱼，颤鱼和烤缓中奥芬达唑、芬苯达唑及它们的代谢物奥芬达唑碱，阿苯达唑及其代谢物阿举达唑-2-氨基，阿苯达唑亚砜、阿举达唑砜，甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪噬、羟基甲苯咪唑，氟苯咪唑及其代谢物2-氨基氟苯咪唑，啤苯咪唑及其代谢物5-羟基噻苯咪唑，噻苯咪唑酯，氧苯这唑的残留量。本标推的方法检出限；奥芬达唑，芬举达唑、奥分达唑矾、阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基、阿苯达唑亚、阿笨达唑限、甲苯咪唑、氨基甲苯咪峰、羟基甲苯咪唑、氟苯咪唑、2-氨基氧苯咪唑、唑苯咪嘧、5-羟基嘧苯咪唑、噬苯咪唑脂、氧苯达唑均为0.010mg/kg，2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是往日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用本标准，然而，鼓根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测尽方法与结果的准确度（正确度与精密度）第】部分：总则与定义(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT)GL/T6379.2测方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2--2004,ISO5725-2:1994，IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682：2008,150)3696：1987，M()D）3原理
试样在碱性条件下以乙酸乙酯提敢、离心、浓缩后，残渣以乙脂-0.1mo1/盐酸溶液解，正已烷脱脂，经MCX固相萃取柱净化。样品游液供液相色讲·串联质讲仪检测，外标峰面积法定量：4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙酸乙酯。
4.2正己烷。
4.3甲醇：色谱纯。
4.4乙腊色谱纯：
4.5无水硫酸钠：经650C灼烧4h，置于于燥器内备川。4.62,6-二叔丁基对(BHT)。
4.7盐酸，
GB/T22955—2008
4.8氢氧化钾，
4.925%氨水。
4.10甲酸：优级纯
4.11乙酸铵。
4.121%BHT溶液：称取1.DgBHT.乙醛乙酯溶解并稀释至100mL，临用前配制。4.130.1mol/L盐酸溶液：量取浓盐酸9ml.加水稀释至1000mL，4.140.005mo1/L甲酸溶液：准确吸取188μL甲酸，加水稀释至1000mL。4.1550%氢氧化钾溶液：50g氢氨化钾溶解于100mL水中，冷却至室温后待用。4.1610氢乙晴溶液：量取10mL25%氨水，乙腊稀释至100mL.临用前配制。4.170.025o1/L乙酸铵溶液：1,93g乙酸铵溶解手1000ml.水中。4.18标准品：奥芬达唑（oxfenda2nle，CAS：53716-50-0）、芬苹达唑（fenbendazole，CAS：43210.67-9）奥芬达唑砜（oxlcndazolesulfone，CAS；54029-20-8），阿苯达唑（albendazole，CAS：54965218）、阿苯达唑-2-氢基砜（albendazule-2-aminosulfone，CAS80983-34-2）、阿苯达唑亚矾《albcndazolesulfoxideCAS:54029-12-8）、阿苯达唑碘（albendazolesulfoncCAS：75184-71-3）甲苯咪唑（rmebendazole,CAS14798000）、氢基甲苯味唑（mebendazole-amine，CAS：52329-60-9）、羟基甲苯咪唑（5-hydraxymebendazole,CAS：60254-95-7）、氟苯咪唑（Elubetdazole，CAS：13678000）.2-基氟苯味唑（2-aminnflubemdazole），哮苯唑（thiabcndazole，CAS：148798）、壁苯咪唑酯（cambendazoie，CA5：26097-80-3）、氧苯送哗（oxibendazole，CAS：20559-55-1）标准品：含最均在98为以上，5-羟基嚏苯咪唑（thiabendazole-5-hydroxy，CAS；17450500>标准溶液浓度为10mg/L。4.19标准溶液
4.19.1标准储备液
准确栋取按其纯度折算为100%质量的奥芬达唑、芬苯达唑、奥券达唑砜，阿苯达哗、阿苯达唑-2-氢基碱、阿苯达唑亚矾、阿萃达唑砜、甲苯咪唑、氨基甲苯沫唑、羟基甲莱咪唑、氟苯咪唑、2-氨基氟苯咪唑、噻苯咪唑、唑苯咪唑酯、氧苯达唑标准品各10mg（精确至0.1mg）分别用甲醇溶解并定容至100mL，配成标准储备辫液浓度为100μg/mL。4.19.2混合标准工作溶液
根据需要，用乙情-水(1+4)将标准储备液(4.19.1)及 5-轻基噬举咪唑标推溶液配成证用浓度的混合标准工作溶被。混合标准工作溶获使用前配制。4.20固相萃取柱：阳离子交换周相萃取柱MCX杜或相当者，150mg/6mL。使用前依次用5ml.甲醇活化.5niL0.1mol/L盐酸平衡。4.21滤膜：0.2μm。
5仪器
5.1液相色谱·中联质谱仪：配有电喷务离了源。纽织揭碎机：
5.3约浆机：转速大于或等于80001/min。5.4涡旋振荡器。
5.5离心机:转速大-卡或等于4000 1/min。5.6减压旋转蒸发仪，
超声波水浴。
5.8分析天平：感量0.1mg0.01g
6制样方法
CB/T 22955—2008
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500名，用组织揭碎机充分捣碎均勾，装入消净容器中，密封，并标明标记，于一18℃以下玲冻存放。制样操作过程中应防止样品受到污染戴发生残留物含量的变化。7分析步骤
7.1提取
称取2g样品<准确至0.01g），于50mL离心管中，加人20mL乙酸乙酯（4.1）.0.15mL50%氛氧化钾液(4.15),1mL1为BHT溶液(4.12)置超声波水浴巾掠荡 5min,勾浆机.上8000r/min均质30s，加入1g无水硫酸钠混勾，4000r/min离心5min，清液转移至100ml.梨形瓶中：另取一离心管，圳入20ml.乙酸乙酯、0.15mL50%氧氧化钾溶液和1mL1头BHT溶液洗涤勾浆机刀头，用玻摔捣碎离心管中的沉淀,加人上逆洗涤匀浆机刀头的碱性乙酸乙酯溶液，在涡旋振药器上振荐2min，置声波水浴中振荡 5 min,4 000 r/min离心5 min,清液合并至 100 mL 梨形瓶中,38 ℃减压旋转发至于。7.2净化
上述残渣马上用1. 5 mI.乙睛获解，涡混匀,超声 min,加人 1. 5 mL 0. 1 mol/L盐酸猝液（1.13）.涡旋混勾.转移到15mL离心普，加5mI.止已烷（4.2)洗涤裂形瓶，合并转移到离心管中，渴旋混匀,4 000 r/min商心5 min,齐上层正已烧层,加人 3 mL正已烷重复操作次：脱脂后的样获加人3mL0.1mol/L盐酸溶液，讷旋混勾，注人已活化处现的MCX固相苯取相(4.20)+依饮用5 tmL 0.1Tol/L盐酸溶液,5 mI.甲醇(1.3)淋洗,1mI.10%氨乙游液(4.16)洗脱,洗脱被38 ℃减压旋转蒸发至干,残液加入0.5mL乙随.超声波水浴中振荡5min+加人 1. 5 mL 0. 025 mol/L乙酸铵溶（4.17)，满旋混勾.吸取100μL该样液：加人1900μI.乙睛-水（1+4）滤匀后过0.2μm滤膜（4.21）.供液相色谱-中联质谱仪测定。7. 3测定条件
7.3.1液相色谱着考条件
a）色谱：YMCCa，3μm，150mm×2.1mm（内径>贼相当；b）流动相:乙腈:0.005 mol/L甲酸溶液(4.14),梯度洗脱;乙：15%--80%(7 min 内线性增加）,80%保持2min80%~15%（0.01min内线性递减），15%保持11minc）流速：0.25ml./min:
d）柱温：40℃；
e）进样量:5 μl.。
7.3.2质谱称考条件
a）离了化模式：电喷雾屯离正离子模式(ESI十）：1）质谱扫描方式：多反应监测(MRM)：分辨率：单位分辨率；
d）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他台适气体，使用前应调市各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、长簇电压、碰撞能等电压值应优化至最住灵敏度；
e）16种苯并咪唑类药物的定性离节对、定量离子对和去集簇电压，硅撞气能量，参考保留时间见表I.
GB/T22955—2008
表116种苯并咪唑类药物和代谢物的蚕考保留时间、参考质谱参数化合物名称
奥芬达唑
芬苯达唑
奥芬达唑酬
阿苯达唑
阿苯达咪-2-短基斑
阿非达哗亚
阿举达矾
甲苯咪唑
氧基甲味唑
羌基甲苹味唑
噻苯咪噬
5经基案苯咪唑
氧苯咪唑
唑萍咪唑醇
氧苯达唑
定性离于对(m/z）定或离子对(m/2)318/150
316/191
300/159
300/268
332/159
332/300
266/191
256/231
240/133
240/198
282/191
282/208
298/224
298/159
296/105
296/264
238/105
238/133
298/160
298/266
202/131
202/175
218/147
218/191
3147123
314/283
266/93
256/123
303/217
03/261
250/176
250/218
316/159
300/268
3327159
266/234
240/133
282/208
298/159
296/264
238/105
298/266
202/175
218/151
314/123
255/95
303/217
250/218
去集慈电压/
碰换气能量/
！奉考保留时间/
7. 3.3液相色谱-串联质定
7.3.3. 1定性测定
GB/T 22955—2008
被测组分选择1个母离子，2个子离子，在同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内：当样品谱图中被测组分监测离子的相对离子卡度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对离子半度进行比较，偏整不超过表2规定的范国，则可判定为样品中存在对应的待测物：
表 2定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子半度K
允许融大偏差
7. 3.3.2定最测定
以关表示
在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作溶液进样（4.19.2），以峰面积为纵坐标，混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，16种苯并咪唑类药物和代谢物标准物质的多反应监测（MRM)色谱图参见附录A中的图A.1，16种苯并咪唑类药物和代谢物的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B.1。
7. 4平行试验
按以上步，对间一试伴进行平行试验测定。7. 5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算
河豚鱼、蟹鱼、烤鳗中16种苯并咪唑类药物和代谢物的残留基按式(1)计算：xcx
式中：
X——试样中待测药物残留量,单位为微克每千克(g/kg）;r——从标造工作曲线得到的得测药物落液浓度，单位为纳克每毫升（n&/mL）样品溶最终定容体积.单位为毫升(ml);样品溶被所代表最终试样的质鼠，单位为克(g)。m
让算结果应扣除空白值，
9精密度
9. 1 一般规定
本标推的精密度数据按照GB/T6379.1和GB/T637!.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
9. 2重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限「，被测物的恭加浓度范围及重复性方程见表 3,表 4、表 55
GB/T 22955—2008
添加浓度范围及重复性和再现性方程（基质为河脉鱼肌肉）单位为微克每千克麦3
化合物名称
阿苯达唑-2-氮基研
么氨基氧苹唑
阿苯达唑
阿萃达唑矾
阿萃达哗亚砜
噬苯咪唑酪
芬牟达唑
氨基甲苹咪唑
甲苯咪噬
奥芬达唑
奥好站哗砜
氧苯达哗
羟基甲翠咪唑
唑苯咪吨
5-羟基学举咪唑
嵌加浓度范围
10-100
10~100
10~100
10--100
10~100
10~100
10--100
18--103
10-100
10~100
10~:100
10~100
10~105
10~100
10--100
10~100
性：班为满次测定结果的算术平均值。表4
化合物名称
阿率达唑2氨基死
2-氨然抵未唑
阿苯达唑
阿苯达斑
阿苯达唑亚讽
瑙苯蛛唑骼
芬苯达唑
氟萃味唑
甲苯味唑
奥芬达唑
奥分达唑
氧苹达噬
郑基甲苯味唑
噻苹咪唑
5-羟基噬苹咪唑
重更性限 -
r=0. 832 9m-0. 619 3
I= 0. 780 3m—0. 682 7
r=0. 752 5m-0. 817 8
r=1.089 9m-1.171 9
r=0. 833 0m- 0. 581 1
r=0. 908 6m-1. 054 7
r=1. 148 1m-1. 429 7
r=1. 202 4m—1. 359 2
--0, 688 0m0. 603 7
r=1. 086 6m--1. 155
=0. 872 Rm—0. 843 4
r=1.144 7m 1. 322 6
r- 0. 910 3m-1. 142 7
+=0. 902 R- 1. [34 1
r=1. 269 1m-1.506 9
=1. 132 0m—1. 095 1
再现性限R
R=D. 849 2m0. 424 5
RD, 973 7#— D, 677 4
R=0. 569 5m— 0. 192 5
R=1. 050 9m 0. 725 6
R=0. 965 9m-0, 554 6
R=1. 110 1m-0, 857 6
R=0. 700 7m-0. 285 2
R=0.985 6m-0.755 0
K=D. 555 Bm --0. 060 8
R=1.0739m0.8610
R-.0, 765 4m—0. 360 5
R=1. 136 6m-0, $68 9
R=0. 758 6m-0, 436 8
R--1. 125 5m-0. 832 9
R=1. 057 0m-0, 807 5
R-1. 076 9m-U. 788 2
添加浓度范围及重复性和再现性方程(基质为鱼肌肉)添加浓度
l0-1n0
10-100
10~100
10--:100
10--10G
10~100
10--100
10-100
10~100
10--100
10-100
10~-100
10-100
10~100
注：m为两次测定结果的算术平均值，5
再复性限r
r=0, 809 1m-0. 541 7
r=0. 960 9m-0. 816 0
r=m. 987 3m
r=1. 163 4m2
r=0. 827 9m-0. 533 3
7=0. 901 7m-0. 875 G
r=1. 000 9m
r=1. 043 2
r= 0. 756 7m : 0. 598 7
1. 150 5m- 1. 177 6
r=0. 896 3m -0. 707 9
r=1. 180 8m-- 1. 234 1
r=1. 329 6m-1. 565 0
r=1. 004 2m-1. 054 5
r=1. 371 7m—1. 533 7
r=1. 226 2—1. 209 4
单位为微克每千克
再现性限R
R=0. 797 5m-0, 312 6
R=1.105 5m--0. 854 4
R=0. 893 9m-0, 749 6
R=0.951 0m-0, 536 0
R=C. 896 5m-0. 513 6
R--0. 792 5m-0, 653 1
R=0. 972 5m-0. 809 3
R=1. 092 4m0, 938 7
R=0. 515 9m-0. 040 0
R-1. 041 1n—0, 783 7
R=0. 765 3m-U. 364 5
R=0. 991 Cm-0, 685 B
R=0. 916 6m-0. 651 1
R=0. 854 1m—0. 394 1
R-1. 029 9m-0. 767 6
R-0. 817 2m-0. 426 9
化合物名称
阿苯达唑2氨基砜
2基氯苯味唑
阿莱达唑
阿苯站唑
阿苯达啮业碳
噬苯咪唑酯
势苯达喽
氧举深唑
氮基甲苯咪
中苯咪唑
奥芬达唑
奥芬达怪砜
氧苯达
基甲苹唑
噻苯咪唑
5-羟基噬军咪唑
5添加浓度范围及重复性和再现性方程（基质为燎鳗）裁5
添加浓度范围
10-100
10--100
10~100
10--100
10~100
10---100
10--100
10--1c0
10--100
10--10n
10--100
10~103
些：的为两次定结果的算术平均值。重复性限T
r=1. 248 1m-1. 425 4
r=0. 961 6m0. 968 6
r=0. 957 1m -0. $04 9
#=0. 390 6m-1. 095 5
r=0. 892 1m-0. 805 8
r=1. 193 6mt—1. 281 5
r=1. 248 1m -1. 425 4
r=0. 857 rm-0. 914 5
r-0.6628m-0.521 2
r=0. 819 5m-0. 754 3
r=1, 213 7m:1. 393 3
x=0. 937 8m-0. 539 9
r=0. 621 4m -0. 538 5
F--0. 768 1m-0. 682 9
r=0. 974 5m J. 100 9
=0, 798 1m-0. 805 2
GB/T 22955--2008
单为微克每千克
再现性限R
R=1.C128m—5.8278
R=0. 742 3m-0. 411 6
R=0.827 1m-C. 552 3
R-1. 009 4m—0. 923 5
R=0.853 1m-0. 570 8
R 0, 800 4m-0. 471 5
R=1. 012 8m-0. 827 8
R--0. 897 7m-- 0. 717 8
R=0.7976m-0.5901
R -0. 995 5m- 0. 782 5
R -- 1. 063 6m-0. 999 2
R=0.864 9m—0, 551 0
R= 0. 754 7m-0. 553 6
R. -0. 7c0 5m-0. 438 7
R=0.770 4mD. 603 7
R 0.911 1m- 0. 801 5
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的游如浓度范围及再现性方程见表3、表 4、表5。A
CB/T22955—2008
附录A
（斑料性避录）
标准物质多反应监测(MRM)色谱图16种萃并咪唑类药物和代谢物标准物压的多反应监测(MRM)色谱图见图A.1。7. 9
锂2. 0e4-
H. doe4 -
2. D024 -
描 2. 04
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3. Ghe4 -
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奥芬达唑：
芬苯达唑；
阿萃达唑；
噻苯咪唑，
噬苯味唑酯，
—甲苯咪唑：
氣萃咪；
氢羊达唑；
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timir:
1615-tinein
阿苯达唑2·氨基研：
阿苯达唑业砜：
奥芬达唑砜：
L-—阿苯达醛砜+
--- 2-氮基氯苯咪唑;
羟蒸甲苯咪噬；
—5-羟基噻苯咪理。
图A.116种苯并咪唑类药物和代谢物标准物质的多反应监测（MRM）色谱图附录B
（资料性附录）
回收率
GB/T 229552008
河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中15种苯并咪唑类药物和代谢物的添加浓度及其平均回收率的试验数据,见表 B. 1 .
表B.116种苯并咪唑类药物和代谢物的添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称
奥芬达唑
芬苯达瑾
阿苯达
噻苯咪唑
唑举唑醋
甲苯味唑
释加浓度/(pg/kg）
河豚鱼肌肉
平均回收率/%
鳗鱼肌肉
GB/T 22955—2008
化合物名称
氟本达唑
氧苯达哦
5-羟基曦苯咪唑
阿苯达唑-2-氨基风
阿苯达唑亚瓯
奥芬达坐斑
阿苯达瑾矾
添加袋度/（μg/kg）
表B,(续）
河豚鱼肌肉
平均回收率/%
毅鱼肌肉
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