本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留量的液相色谱?串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定。 GB/T 22959-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22959-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22959—2008
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Dctermination of chloramphcnicol, thiamphenicol andflorfenicol residues in fugu.eel and haked eel-LC-MS-MS methorl
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、际录 3为资料性阴录。本标准山国家质监督检验检疫总局提山》归口。GB/T22959—2008
本标起草单位：中华人民共和国泰岛山人境登验登疫局、中华人民共和国广东出人境检验疫局
本标淮轰起芊人：林海丹、李究华、谢守、株峰、黄华不、邯琳御、庞国芳foodmate.net
会品k伴网httn：//www
1范围
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T22959—2008
木标准规是『河豚血,鳗血和烤鳗中需需素(rchlarxrrphrical)中讽霉素(iliarrphrica和氟苯尼考（nlorlemie)及其代谢物苯尼考接(lurlenicu_imire)残留量的液相色谱申疾质谱测定方法。本称雅适用下河豚仙、艇负和烤强中的氯等素，甲砜霉素、制来尼考和共尼考娶留呈的测定本标雅的方汰检山限,豚,绝和虑毁中氯幂素为9.1/k,中等素，黏最考米尼考胺为1.cug/k
2规范性引用文件
下列文件中的条款通划本标准的引用而成为本标准的条款：儿是注日期的引用文件：点随后所有的修孜单（不包活斯误的内容)或修订版均不活用于本标，然而，鼓励根据本你准达成协议的冬方矿究足否可使用这些文件的最新版本，凡足不注期的叫用文件，其最新被举适用于本你准G3/T6379.1测品方达与结果的准确度（正确度马精密度）第1部分：总则马完义（GB/6279.12601.180 5725 1:1694.111
GH/T6373.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密履）第2部分：矿定标准测量方法重复座寸再现座的基本方送(G6379.220043057252：181,1DT)GB/T6682分析实验室用水料和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD)3原理
样品中的急毒素,口碘藓索、氣苯尼考氟苯尼考胺在碱性条件下，乙酸乙酷提最,提取液旋转蒸发深「残渣以水济解，经正已烷羧分配脱脂，酸色谱中埃质仪检测：氯寄素，甲疯需素和制架屁考以内孙汰峰面积烂常荆卡冠考胺以外孙法-峰面积是4试剂
所用试剂除注明外均为分折纯：水为GB/T6682是的一缀水：4.1H醇:塔纯
4.2乙酸乙酯。
4.3正己炼
4.4氨水;25%~~28泌，
4.5无水硫酸销：镜用前经650灼烧1h，4.6标准物质：穿素(CAS:56-75-7），中预掌索（CAS:15318-45-3)和氛苯尼号（CAS:76639-94-6)，纯度99.5：甚尼考腰，纯度98.9次4.7内标标准液：允代点素（-无得素），10CPg/m1.,落剂为乙情，尔化度98。4.8[0/m.标催各般：分别准价称取适量的氢寄素、甲砜需素、氟只尼考和氟苯尼考胺标准物质（4.6）用中分别而放100/m的标准储各液，该溶液十一18存4.91μ/mL氯霉索、中霉索和氯茎尼考混会标准诺备液：分准碎吸取 1. ImL氯霉索，中霉1
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素和共尼考称诺备液(1.8),移率100) ril.容呈瓶中：用H婷配成1ng/ml.的氯需素.甲砜毒素和氟苯尼考混合你准诺备液。该溶液于一18（保存。4.101pg/ml.氟苯尼考胺标准带各液：准饰吸取1.0m rml.氟表尼考胺标准倦备液(4.8).移至109 ml.容量坂,用中萨配成1，n的氟艾尼号胺标准储备液。该液于一18保存4.112)rg/ml氛需素，中佩用素和就来尼考退合标准中问液：准确吸收1.001ml.混合标准铭备液（4.9），移至5C深量概,用水配成2019/的氯霉索，中测霉索和氟茎尼考混标准液：该溶波丁4保存，
4.1220ne/niL氟苯尼号胺标准巾问液：准确披取1.00mL氟苯尼考胺标准储备液（4.10).移至59mL穿呈瓶中,用水配成20 ng/ml.的然兴尼考胺标雅中问液：该济液丁1℃保行。4.131/让内标你准储备液：准碎及取1.00内标标准液（4.7),稳10m容量瓶中，用中醉配放1μ/ml.内标标淮诺各波，该溶波于18保存，4. 1420 rg/mL内标标准中间液：准确披取1.00 mL内标标准储备液（4. 13).移至50 niL容量粘中，用水配战r/ml的内标标中问液，该溶液于！（课存：4.15氣需素、甲砜毒素和氟苯尼考混含书质标准1.栏溶液：恨求母标准的灵敏度和仪睾线性范围临用时吸取一定量的泥个标淮中川波（1.11)和内称标准中间波(4.14).用空白基质溶被配成适当浓度的混合甚质标准工作液，每靠该泥合基质准工忙溶液含有0.15工岛氢代氯省素(d，氯等素）。4.16氟苯尼考胺基质标准工作率液：根据标准的灵敏度利仪器线性范围：临用时坡取-定量的标准中问液（1.12,用空白基质溶铱配成适当度的栽米尼考胺基质标「作液，4.17滤膜：C.2
5仪器
5.1波相色谱巾联质谱议:配有电喷务离了源5.2分析天半：感量2.1m利0.c1g5.3肉心机转速 900 r/min。
小型台式离心机:转迹学13coin
5.5红织掏碎机，
5.6约紧机
战压旋转蒸发仪，
5.8超市波水落。
5.9旋涡振荡
5.10聚内烯离心管：带,5℃ niL.1.5 niL5. 11鸡心瓶:25 mL
5.12兵寒比色管：501L，
6试样制备与保存
6.1试样的制备
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分而红织鸠碎机充分岛碎均匀报人清净容耀.密封，并标明标记。
制栏操过理中成防止样品受到污染或发生阐物含量的变化6.2试样的保存
将试样」冰箱中保行
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7测定步骤
7.1提取
GB/T 22959—2008
称取5或样.精矿至2.01，告于5℃ niL聚内烯离心管中：加入内际标准巾可液（4.14)75.0μL：加人 2 ril. 7.骏7.酯,, ml 氨水(1.1),3 只无水硫峻钠,匀浆探瑕 3: s.1 0t /nir 离心 5 nir,上清液转移牟50r1l比色管中。另收一5:m离芒人20ml.7酸7酯0.69ml氨水，流涤氧浆买1s，洗落液移人第支离心管，用玻诈境动娥添，旅振慈是最1I1，跑声波眼荡提取5n. o0 min离心5 in1清液台于至50m比血管较乙酷穿容尘的.0mL：探匀片移最0.0 乙酸乙酷尧最液」2ml.鸡心瓶：4h（殿压旋转浓缩至1。7.2净化
鸡心瓶中的残渣而2.0 ml水溶辫，旋涡振荔混匀·起山5min,加人3ml.正己饶旋涡振落混个3℃5.静分层，弃拉上层的正二烧.再加3ml.正二烧旋祸摄落混个30$萨置分层·移部分下层的水相于1.5 n的紧内烯离心管中;13 20) /min离心5 mi.经c.2 ui滤膜过德后·供液色谱-串联点谱测定氯霉素.H砜需和凯米尼考：另吸收100，工滤液丁液和样瓶，加人400江水，靓匀供液杠色谱市联质谱测定栽米尼考胺
7.3空白基质溶液的制备
称取5”牢凹样品，精确分0.℃1·除不加人内标你准「间液，其构接1和.2步蝶燥作，7.4测定条件
7.4.1液相色谱参考条件
7.4.1. 1氯需素、甲砜需素和氟苯尼考测定a
它谱柱:sUrEl.CO Discovtry C，5 μm,15 mmx2.1 mm(内径)或相当者：h
往温：4℃（
r）流动:H醇-水(2一3);
d)流退.n.30 ml/min;
进样:20
氟苯尼考胺测定
7. 4. 1. 2
仁谱柱:Irersi C.-3.5 nm,150 rmmx4.t mn(内径)或村当者;b)
柱温4：
流动相几醇 水(11)：
流返：0.30mL/min
进样量:1℃L，
质谱参考条件
离干源：旦喷雾肉子源（I)；
归方式:负离了妇描(急霉索、甲臧霉索和舞苯尼考测定)止离了扫描(無萃尼考胺测)；检测方式：多反应选拯离子检测(MRM);dh
良喷雾电压(IS)：4 20V氯需素、甲砜寄素和氟共龙考测烂).400)V(氟苯考胺测定）：e）雾化、帘捐购加热，碰谨气均为亮纯氮（及H他合适气体，使用前应调节各体流品以议质谱灵敏度达到检测要求；辅助气温度(TEM):GO0
定性离广对,定量离了对,采集吋间,卡簇电压及碰撞能量见表1。g）
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表 1氯霉素、甲砜霉素、氛苯尼考、气代霉素(d,-氯霉素)和氟苯尼考胺的质谱参数化合名称
莱尼者
氧代氮森素(d，氯萨素）
武苯尼按
性离」对
320.1257.0
320. 6.152. 0
339. 6200. 3
333. 1.185. 2
336.0336.0
336.0.183.0
325. 0.157. 0
2481/230.2
248. /130. 2
7.4.3液相色谱-串联质谱测定
7.4.3.1定性测定
量离对
326. 97 152. 0
3:3. 1/18..2
3:6. 37333.0
226. 03157. 0
218.3/130.2
来集叶间
云施中压
编择量
何种被测纠分造择1个母高了，2个以「了离了,在树同诚验条件下，样品待给测物质和内标物的识率时间之比：也就是相对保留时间：与标准液中对成的析对保南付间偏差什工2.与之内;且样品谱医中各组分定叫离了的相对丰度与液度接近的标准溶波谱图中对应的定性离了的相对丰度进行比较，遍萃不超对表2规定的范用,则间判为样品中行在刘应的待测物表 2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差村的离」丰妻K
分许的長人佛草免费标准下载网bzxz
7.4.3.2定量测定
限策素示
氯需素,甲佩需索和栽苯起考测定以内标法完虽：在议案最伴「作祭件下，对基质标汇1作溶被(4.13)进样:以标准落液中被测组分峰积和充代需素(小-氛得素)峰面积的比值为纵坐标：标准落液巾测组分浓度与氛氣霉素套素）浓度的比位为懋平标经制际准工作西线用标准工作西线对弃品进行定量，样品溶液中得测物的响应值均应在仪器视定的线性范国内。氟将是考眩测定以外标法定量：在仪器最任1作条件下.刘比质标准「.栏溶液(4.16)进详：以标溶中被测纠分峰而积为瑟标标准溶液中被测纠分浓度为横坐标绘制你准工作山线，用标准工作山筏对样品恶行定量，样品溶液中待测物的响应传虚在这路测定的性范国内，氢需素巾需素、氟苯尼考、氯代氯消索(d氯等索)和氟苯尼考安标准物质的多反应蓝测(MRM)免谱图参见附录A中的图A.1~图A.急霉索,中碘霉索,氟苯尼考和氣茎尼卡胺的添加浓度及其平均回收索验数据参见附录的丧 13. 1
7.5平行试验
按以上步猴，对同一试样进行平行试验测定：7. 6 空白试验
除不称取样比外，与技「述步骥进行。8结果计算
急霉索,中碱霉索和氟苯尼考残留量的测定结某按式(1)算：4
http:
试栏中被测物商量，单位为设克每「克（ug/kg）o
质标准1作落液中被测的浓度，单位为纳克华亳升(r/ml)：诚样溶液中被测物的色谱泽向积：基质际滩工作溶液山被测物的血谱而识；诚伴溶液中内标物的浓度，单位为纳克荷毫升（nml)，基质标滩1作济液中内标物的浓度，单位为纳克年毫升(r/m)：基质标滩「作溶液中内标物的色谱-面积;试样溶液中内际物的仁谱举而积；评液最终定容体积：单位为毫升（m）；试拦溶液所代丧试拦的质，单位为克(α），计算结景应扣除空白值，
氟常考胺戏陷量的测楚结果接式(2)计算：x=X
试栏中被视组分残留量，单位为微克每下兄（g/kg）：...
GB/T 22959—2008
以正质标准.1作曲线得到的被测组分溶波浓度,单位为纳克每亮升（ng/ml.)：详品落液最终定容体积.单位为毫升（ml.)，群品溶液所代表最终战样的质量，单位为京（）计算结某底扣除空白值,
9精密度
9.1—般规定
本标准的精密度数是按照GH,=G379.1GB/=6379.2的观定矿定的：重复性和再现性的位以05多的可倍度来计算
9.2重复性
在重复性试验条件下，获得的奶次独立测试结景的绝对关不超过平复性限1，被视物的添加浓度范同重复性方程见表3
化会积名称
甲划年素
杀加激度范
0. 1to-- 1. o.
1.10 ~.10.
添加浓度范围及重复性和再现性方程栏品版
河豚鱼
河螺作
复性限下
lgr-1.13 (gm+t, (G51
lgr-0.979 .a t. 762
1g—1. 11 g+, 5
Igl 0. 73 lgm-0. c93 1
Igr6.93 Igmr t, 17:
Igr-c, 853 -gm
http:
单位为激点每二与
IgN-1. Igm+0. G7?
tgR-1. 60 lgm 1 0.762
IF-1. 1 1gm+0. t32
μR 1.08 gwm—3.062 2
JkN-(0.906 lkm 3.138
IgR-IC2 Igm 0.111
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化一物名称
萧华宠考
氣莱尼考胺
添弧浓度范用
1, 0 --10, 0
1. co--8. 30
栏品选质
河螺竹
河啄仁
注：为两次测定果的养均作。
表3（续）
重复性限”
Ig--0. 98: .8m-t. 116
Igr-0.95t gnt . 150
Ju 0. 973 -2m-C. 115
lg—1.9s gm6,179
Igr—1.12 Igm
Ig-1.17 Igm C. 20:
单位为额克间一型
平现性阳R
JeR-0. 957 lgu-d. 127
lgF-0,9N1 Igm 1.130
IgR 1. C1 Jgw-0.118
kk—0.974 lkm
IgR-o.3 Igm
Ig-0.959 lgm
如果差值超过车复性限”,应舍分试验结果并车新完成两茨单个试验的测，9.3再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结某的纶对差忙不超过再现性限R，被测物的漆加浓店范同再现性方程见表3
http://foodmate.net附录A
（资料性附录）
标准物质的多反应监测(MRM)色谱图GB/T22959—2008
烈哥素，中砜寄素和氟苯尼考标准物质的多反应蓝测免谱见阁A，「，尔少翁寄素的多反应斋测色谱图见图A.2.氟茎尼考胺标准物质的多反成蓝测血谱图见图A.3.4. 964
320.9/152.0
0, 5 1. 0 1.5 2. 0 2.5 3. 0 3.54. 0inin
353. 9/185. 2
0. 5 1. 0 1. 5 2. 0 2.5 3.0 3. 54. 0/min
356.0/336.0
0. 5 1. 0 1. 5 2. 0 2. 5 . 0 3. 5 4. 0min
20.9/257.1
51.[ 1.5 2.0 2.5.0 3.5 4.0
353.9/290. 3
,5 1. [ 1.5 2. 0 2.5 5.0 .5 4.0/mr
2.56.0/1R5.0
2.53.08.04.0
.o 1. 6 1.b 2.0
氯霉素,甲砜霉素和氟苯尼考标准物质的多反应监测(MRM)色谱图图A.1
品伙伴网httr
GB/T22959—2008
4 100.00-
320.9/157. (
0.。 1.0 1.5 2. 0 2.5 3.0 .5 1. 0/rain
气代氯霉素(d-氯霉素）标准物质的多反应监测(MIR)色谱图24R./230.2
4 00 -
24R.3/190.2
氟苯尼考胺标准物质的多反应监测(MR.M)色谱图http://foodmate.net附录B
(资料性附录）
回收率
G8/T22959—2008
烈哥素，中砜需素、氟表尼考和氟及尼考胺的淤川浓度及平均叫收率的试验数据见13.！表R.1氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的添加浓度及平均回收率的试验数据锌品紫所
河豚鱼
化物名称
点能素
中褪孟
氧求尼考胺
氧苯尼考胶
品林伴网httn
浓度ek
平均可收率/究
GB/T 22959—2008
化合彻务称
氟芊尼考
氣苯尼考版
表B.1（续）
添加激度（ukg）
http://
华均吸率
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