本标准规定了河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松九种糖皮质激素残留量的液相色谱?串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中九种糖皮质激素残留量的测定。 GB/T 22960-2008 河豚鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22960-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22960—2008
河豚鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨芙、头孢洛宁、头孢喹
残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of cefazolin , cefapirin,cephalexin , cefalonium,cefquinome residues in fugu and eel-.-LC-MS-MS method
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录 A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局本标准主要起草人：李学民、王贺琴、母健、曹意忠，刘晓茂、庞国芳，GB/T22960—2008
1范围
河豚鱼和鳗鱼中头抱唑嘛，头孢匹林、头抱氨、头孢洛宁、头抱喹
残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T 22960—2008
本标准规定了河豚鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氮芋、头孢宁，头孢喹残留量的液相色踏-串联质测是方法
本标准适用于河豚鱼和鳗鱼中头孢唑咪、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹残留量的测定。本标准的方法检出限：头孢唑啉为10g/kg；头孢匹林、头孢氮芊、头孢洛宁、头孢喹为2.0g/kg2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然前，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测景方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义（GB/T6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379.2-2004,ISO5725-2:1994,IDT)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987，MOD）3原理
试样中五种头孢菌素药物残留用乙睛提取，旋转蒸发除去乙腈，用水定容，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯。4. 1 水:GB/T 6682,—级。
4.2甲醇：色谱纯.
4.3乙：色谱纯。
4.4乙酸。
4.5正已烧。
4.6乙腈饱和的正己烷：取100mL正已烷（4.5)和50mL乙腈（4.3）于250mL分液漏斗中，振摇1min，静置分层后，弃掉乙腈。
4.7标准物质：头孢唑啉（CAS：25953-19-9）、头孢匹林（CAS：24356-60-3）、头孢氮（CAS：16549-56-7）、头孢落宁(CAS：5575-21~3)，头孢唑(CAS：118443-89-3)，纯度≥99%4.81.0mg/mL五种头孢菌素标准储备溶液，准确称取适量的每种标推物质（4.7），分别用水配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液。储备液贮存在一18℃冰柜中。4.9五种头孢菌索标准混合工作溶液：根据需要吸取适景的每种头孢菌紊标准储备溶液（4.8），用水稀释戒适当浓度的标准混合工作溶液。1
GB/T 22960-2008
4.10滤膜：0.2um。
5仪器
5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.1mg，0.01g。5.3均质器。
5. 4微量注射器:25 μI.,100 μL-。5.5刻度样品管:5mL,精度为 0.1mL。5.6高速冷冻离心机：带有 50 mL其塞离心管,转速达到10 000 r/min以J:。5.7氮气浓缩仪。
6试样制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份：分别装人洁净容器内。密封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
6.2试样的保存
将试样于—18℃保存。
7测定步骤
7.1试样溶液的制备
称取 5名试样(精确到 0.01 g)置于 50 mL离心管中,加人 20 mL乙腊(4. 3),使用均质器(5. 3)均质 1 min,提取液使用高速冷冻离心机(5. 6)在 10 ℃,10 000 r/min 离心10 tin,把上层提取液移至另一离心管中。用15mL乙睛重复提取次，台并两次的提取液，并加入10mL乙晴饱和的正已烷（4.6)，振荡 1 min,弃掉正已烷。把提取液移至100 nL鸡心瓶中,在 40 ℃旋转蒸发除去乙晴，用2 mL水溶解残渣，摇匀后,样液过0.2μm滤膜（4.10)供液相色谱-串联质谱仪测定。7.2空白样品添加标准混合工作溶液的制备分别准确移取适量五种头孢菌紊标准混合工作溶液(4. 9),添加到5. 0 名样品中,按照 7.1 步骤操作，制得头孢唑啉浓度分别为101g/kg、20μg/kg、40μg/kg、100 μg/kg;头孢匹林、头孢氢芋、头孢落宁、头孢唑浓度分别为2.0μg/kg、4.0μg/kg.8.0μg/kg、20μg/kg四个样品添加标准混合工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3测定条件
7.3. 1液相色谱参考条件
a）色谱柱:70RBAX SB-Cis.3.5 μm,150 mm×2, 1 mm(内径)或相当者;b)
流动相组成、流速及梯度程序见表1;c)
柱蕴：30℃
进样量;20 μL。
表1流动相梯度程序及流速
时间/min
流速/(μL/min）
水(含 0.1%乙酸)/%
乙睛/%
时间/min
质谱参考条件
流速/(μL/min）
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应监测；
电喷雾电压：5500V：
雾化气压力：0.055 MPa;
气帘气压力：0.079MPas
辅助气流速：6L/min；
离子源温度：400℃；
表1(续）
水（含0.1%乙酸)/%
定性离子对、定量离子对和去簇电压(DP)、碰撞气能量(CE)见表2。GB/T 22960—2008
乙睛/%
表 2五种头孢菌素的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞气能化合物中文名称
头孢唑啉
头孢匹林
头孢氨苄
头孢落宁
头孢喹
化合物英文名称
定性商子对(m/z）：定量商子对(m/2)cefazolin
cephapirin
cephalexin
cefalonium
cefquinnme
7.4液相色谱-串联质谱测定
7. 4. 1 定性测定
456/324
456/156
424/292
424/152
348/158
348/174
459/152
459/123
529/134
529/396
456/324
424/292
348/158
459/152
529/134
去簇电压/V
碰撞气能盘/V
选择每种待测物质的1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在七2.5%之内；样品谱图中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准溶液的谱图中离子相对半度相比，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 K
允许的最大偏差
7.4.2定量测定
2010以%表示
K≤10
用7.2制备的空自样品添加标准混合工作液分别进样，以标准工作溶被浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中五种头孢菌素的响应值均3
GB/T 22960—2008
应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，五种头孢菌素标准物质的多反应监测（MRM)色谱图参见附录 A 中的图 A. 1,
本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B.1。7.5平行试验
按述步骤，对同一试样进行平行试验测定。7. 6 空白试验
除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。8
结果计算
试样中五种头孢菌素残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：X10
式中：
X一一试样中被测组分残留量，单莅为微克每千克（/）c—一从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；V——-试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);m——最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克（g）。计算结果应抑除空白值。
9精密度
9.1—般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的，其重复性和再现性的值是以 95%的可信度来计算。
9. 2盈复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，试样中五种头孢菌素添加浓度范围及重复性方程见表4。表4五种头孢菌素漆加嵌度范围及重复性和再现性方程头孢菌素名称
头孢噬啉
头孢匹林
头孢氨带
头孢宁Www.bzxZ.net
头孢肟
添加浓度范画
10-100
注；m为两次测定结果的算术平均值重复性限
1gr - 0, 971 9lgm - 1. 053 5lgr=1, 221 3lgm -- 1. 157 7
lgr=1.050 41gm-1,025 7
lgr=1, 070 41gm-1. 117 3
1gr=0. 665 61gm-0.731 3
单位为微克每克
再现性限R
IgR=0. 890 81gm-0. 514 8
R-0.194 7m+0. 122 3
IgR=0. 916 71gm-0. 605 5
IgR=0, 852 31gm-0. 609 9
IgR=0. 926 11gm-0. 650 2
如果两次测定值的差值超过重复性限，应含弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，试样中五种头孢菌素添加浓度范围及再现性方程见表4。附录A
(资料性附录）
标准物质多反应监测(MRM)色谱图五种头孢菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图A,1。9. 38
头孢唑啉
sd/面
头孢匹林
头孢氨苯
头孢洛宁
头孢唑
图 A. 1 五种头孢菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图GB/T22960—2008
GB/T22960—2008
附录B
(资料性附录）
回收率
五种头孢菌紊添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1。表B.1五种头孢菌素添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称
头孢唑啉
头孢匹林
头孢氨卡
头孢洛宁
头孢噬
添加浓度/(μg/kg)
乎均回收率/%
103, 4
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