本标准规定了牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量气相色谱?负化学电离质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量的测定。 GB/T 22967-2008 牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量的测定 气相色谱-负化学电离质谱法 GB/T22967-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22967-2008
牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量的测定气相色谱-负化学电离质谱法
Determination of β-estradiol residues in milk and milk powderGas chromatography-negative-ion chemical ionizationmass spectrometry method
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。前言
GB/T22967-—2008
本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：王建华、张艺兵、郭翠、王境堂、孙忠松、庞国芳1范围
牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量的测定气相色谱-负化学电离质谱法
GB/T22967-2008
本标准规定了牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量气相色谱-负化学电离质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量的测定。本标准的方法检出限：牛奶0.25μg/kg，奶粉2μg/kg。2
规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.1-2004,ISO5725-1:1994,IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2--2004，ISO5725-2:1994，IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，ISO3696:1987MOD）3原理
牛奶和奶粉中雌二醇经过酶水解，用乙腈作为蛋白沉淀剂和提取剂进行提取，固相萃取柱净化后，经酰化行生化后，用气相色谱-负化学电离质谱选择离子监测模式测定，内标法定量4
试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1β-葡糖苷酸酶/芳基硫酸苷酶：Helixpomatia，每毫升含β葡糖苷酸酶100000单位，每毫升硫酸酯酶≤1000单位。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3乙腈：色谱纯。
4.4乙酸乙酯：色谱纯。
4.5正已烷：色谱纯。
4.6吡啶：色谱纯。
4.7异辛烷：色谱纯。
4.8正丙醇：分析纯。
4.9衍生化试剂：五氟苯甲酰氯，在避光、防潮环境冷冻储藏。4.10碳酸氢钠。
4.11三水乙酸钠。
4.12氯化钠。
4.130.1%乙酸溶液：移取0.1mL冰乙酸，用水定容100mL。http：
GB/T229672008
4.14乙酸钠缓冲液（pH-5.2)：称取43g三水乙酸钠（4.11）用水溶解，加人25,2g冰乙酸用水定容至1000mL
4.15千爆乙酸乙酯：在密封试管中加人500mg无水硫酸钠和20mL乙酸乙酯，振荡混合约30min后，2000r/min离心10min。
4.16乙酸乙酯-吡啶（9+1）：将10mL吡啶和90mL干燥的乙酸乙酯（4.15）混合，室温保存4.170.5mol/L碳酸氢钠（NaHCO,）溶液：称5gNaHCO,手100mL容量瓶中，用水定容至刻度，4.18OasisHLB固相萃取柱\或相当者：60mg，3mL。使用前分别依次用6mL甲醇，3mL0.1%乙酸溶液和3mL纯水活化，保持柱体湿润4.19标准物质：β难二醇，纯度≥99V24，16，16-4年代P唯一牌D4），纯度9%4.20内标标准物质：阝雄二醇
最10mg标准物质（4.19）分别子100mL客量瓶中，用甲醇（4.2)定容4.21B雕二醇标准溶液：准
存于一20℃，再以甲醇稀释成适用浓度的溶液，保存于4℃冰至刻度，浓度100μg/mL
箱中。
4.22内标标准落液
容至刻度，浓度100
箱中。
10m起
内标标准物质
储备液储存于-20℃
一雕二醇标准阁液
4.23标准工作落料
步骤衍生化后备用
5仪器
5.1气相色谱-质
配有负化学
5.2离心管：5ml
5.3移液器：20四
5.4分析天平，感量
5.5冷冻离心机：量
5.6揭旋混勾器
5.7氢气浓缩仪
5.8水平摄荡器。
5.9瓶转热发仪，
5.10旋问振器。
6试样制备与保存
6.1试样的制备
mL，具塞
4.20）分别手
100mL客量瓶中，用甲醇（4.2）定再以甲醇辅释成适用浓度的落液，保存于4℃冰2和B雕
最大转速100
醇D4内标标准溶液4.22）混合，按照7.3OuL
6.1,1牛奶：取有代表性试样约500g，搅择均勾后装人洁净容器内，密封，并做好标识。6.1.2奶粉，取有代表性试样约500g，搅拌均勾后装人清净容器内，密封，并做好标识。准确称取12g乳粉试样（精确到0.01g）于250mL烧杯中，少量多次加人50mL煮佛并冷却到60C左右的水溶解，冷却至室湿后，移人100mL容量瓶中，用少量水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移人容量瓶，再用水定容到刻度，混勾，制备成奶粉复原乳试样。6.2试样的保存
将试样于4C保存
1）OaisHLB困相举政柱是Wates公司产品的翻品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。http：/
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7测定步骤
GB/T229672008
7.1提取
准确移取2.0g牛奶或量取2.0mL奶份复原乳试样（6.1.2）置于50mL具塞离心管中，加人5mL乙酸钠级冲溶液（4.14)）、约1g氧化钠（4.12）.旋涡系荡1min后，加人10mL乙腊（4.3）.充分旋涡混合1min，于水平报荡器上（5.s）剧熟振荡2min，超声提取10min，7000z/min于4C离心10min，用吸管将上清液移人另一离心管。残查中加人10mL乙晴，按上述方法再提取一次，合并上清液。上清液中加人10mL正已烧（4.5）.刷别瓶款000/min于4C离心5min，吸正己烷，弃去下层溶液转移至梨形瓶，加人0.5m正丙醇（4.8）于40℃水浴旋转蒸发（约剩余1mL左右不能完全蒸千），加人1mL乙随，旋涡减场1min.转放至10mL高心管，再mL乙晴请洗瓶一次，溶液转移至上达高心管后，用纯水定
7.2净化
特捷取液(7.D档
OusisHLB柱·特落
脱，收集洗脱液于
7.3街生化
在上述10m
(416).20五
0.5mo/L碳酸
上清液进行测定
7.4测定条件
7.41气相色
包滋糕
asisHLB柱（4IS的吃液器中，溶液不大出后，
用3ml纯
主新去全
淋出油抽干
座商心管（5.2）中、用爱气茶缩仪（5.7）Q
商心管中依次加人
酸氟（4
燥的乙酸乙
60七放置
min后
涡旋求房、传容减道
液（4.17)
请后·准确加
测定参考染件
流速·
柱温：12
进样量：1
进样方式·光
老样口温度
度≥99.999元
min.保持
min.然后
然后以15C
特2min
接口温度：280
负化学源：150eV：
商子源温度：150C：
四板汗温度：106C
反应气：甲烧，纯度≥99.99%：反应气流量：2mL/mins
1ml/min的流速通过
最后用9mL乙睛洗
红乙酸乙酯-吡啶
用氮气蒸缩仪吸干，加人500叫L1mL异等烷
理合捷取·静置，取
或相当者：
温至250C
min速度升至3/mins
再以5
选择离子监测：监测离于、丰度比、允许相对偏差见表工。表1监测离于、丰度比、允许相对偏差上酒商于艺
丰度比/%
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m开温至300C保持
充许国对精差/%
GB/T22967-2008
7.4.2定性测定的依据
被测样品色谱峰的保留时间与标准工作溶液相一致；所选择的离子均出现，被测样品的监测离子的相对丰度与标准工作溶液的相对丰度两者之差不大于表1中所列允许相对偏差。7.4.3定量测定下载标准就来标准下载网
配制系列标准工作溶液（4.23）分别进样，仪器测定β雌二醇以m/z660为定量离子，内标β雌二醇D4以m/=664为定量离子，以峰面积比对浓度绘制标准工作曲线，用标准工作曲线内标法对样品进行定量，样品溶液中待测物质的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，β-雌二醇衍生物参考保留时间约为26min。β-雌二醇和内标衍生物总离子流图和质谱图参见附录A中的图A.1、图A.2、图A.3。
本方法中牛奶中β-雌二醇添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B。7.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算
牛奶中β-雌二醇的测定结果按式（1）计算A
式中：
试样中被测物残留量，单位为微克每千克（ug/kg）：1000
基质标准工作溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样溶液中被测物的色谱峰面积：基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积：试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）基质标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积：试样溶液中内标物的色谱峰面积：样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。计算结果应扣除空白值。
9精密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性试验条件下，牛奶中β-雌二醇的含量在0.25pg/kg~2.0μg/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，本标准的重复性限按式（2）计算：r=0.2399m-0.0138
式中：
mβ-雌二醇测定值的浓度，单位为微克每升（ug/L)。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。..（2)
9.3再现性
在再现性试验条件下，牛奶中β-雌二醇的含量在0.25μg/kg～2.0μg/kg范围内，获得的两次独立http://foodmate.net测试结果的绝对差值不超过再现性限R，本标准的再现性限按式（3）计算：式中
R-0.2867m+0.0103
β-雕二醇测定值的浓度，单位为微克每升（μg/L）。GB/T22967-2008
GB/T22967-2008
1400000-
1200000
1000000-
800000-
600000-
400000-
200000
280000
260000
240000
220000
200000
180000
160000
140000
120000
100000
100000
附录A
（资料性附录）
β雌二醇和内标行生物总离子流图和质谱图10
β-雌二醇和内标行生物总离子流图图A1
196240
300350400
100150200250
450500550
700750800
600650
β雌二醇标准物质行生物质谱图454
β-唯二醇D4标准物质行生物质谱图图A3
伴网httn
附录B
（资料性附录）
回收率
本方法中牛奶中β雌二醇添加浓度及其平均回收率的试验数据：在0.25μg/kg时，平均回收率为95.3%；在0.5μg/kg时，平均回收率为89.7%；在1.0μg/kg时，平均回收率为84.1%；在2.0μg/kg时，平均回收率为87.1%。GB/T22967—2008
GB/T22967-2008
中华人民共和
国家标准
牛奶和奶粉中雌二醇残留量的测定气相色谱-负化学电离质谱法
GB/T22967--2008
中国标准出版社出版发行
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开本 880×12301/16印张0.75字数13千字2009年5月第一版 2009年5月第一次印刷书号：1550661-36928定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
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