本标准规定了牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定。 GB/T 22968-2008 牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22968-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22968—2008
牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of ivernectin,abamectin, doramectin and eprinomectinresidues in milk and milk powder-LC-MS-MS method2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
数码防传。
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22968—200B
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局
本标推主要起草人：林峰、吴映、姚仰励、欧阳少伦、林海丹、庞国芳。含体伴网httn·//uww
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1范围
牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定液相色谱-事联质谱法
GB/T 22968—2008
本标准规定了牛奶和奶粉中伊维菌素（ivermectin）、阿维菌素（abamcctin），多拉菌素（doramectin）和乙酰氢基阿维菌素(cprinomectin)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌索和乙酰氢基阿维菌素残留量的測定。本标准的方法检出限：牛奶中伊维菌紫、阿维菌案，多拉菌索和乙酰氨基阿维菌素均为5 g/kg：奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氮基阿维菌索均为40 μg/kg2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括劫误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1—2004.ISO 5725-1:1994,IDTGB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-21991,IDI)GB/T6682分析实验室用水规格利试验方法（GB/T6682—2008,15O3696.1987MOD)3原理
牛奶中戏留的伊维菌素、阿维菌素，多拉菌素和之酰氨基阿维菌蔡线留用乙晴-二氯甲烧提取后，正已烷脱脂，液相色谱-串联质谱检测，外标峰面积法定量。奶粉中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素用乙腈取后，正已烷脱脂,样品溶液供液相色谱-串联质谱仪检测，外标峰面积法定量：4试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/6682规是的一级水。4.1乙睛色谱纯。
4.2二氮甲烷。
4.3甲醇。
4.4正已烷，使用前以乙晴饱和。4.5氧化钠。
4.6乙腈-二氟甲烷溶液(4十1):分别量取80 mI.乙腈(4,1),20 mL 二氮甲烷(4.2),混合均勾。4.7饱和氯化钠水溶液。
4.8标准物质：伊维菌素、阿维菌素，多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素，纯度≥99%。4.9100μg/mL标准储备液：准确称取适的伊维菌素、阿维菌景、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标准品（精确至0.1mg),用乙分别配制成100μg/mL的标准贮备液,在一18C储存。1

GB/T 22968—2008
4.100.500μg/nL混合标雅工作液：摊确吸取0.500mL伊维菌索、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标准储备液（4.9）至100mL容量瓶中，以乙腈稀释并定容，此混合工作液的浓度为0.500 μg/mL。在一20 C储存。4.11基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的混合标准工作液（4.10），用空白样品提取液配制成不间浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制。4.12滤膜：0.2μm
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾电离源。5.2分析天平：感量0.1 ng和0.01 g。5.3离心机：转速大于或等于40001/mi。5.4超波水浴。
5.5涡旋混匀器。
5.6氮吹浓缩仪。
6试样的制备与保存
6.1牛奶
取均勾样品约250装入洁净容器作为试样，密封置4℃下保存，并标明标记。6.2奶粉
取均勾样品约250g装人洁净容器作为试样，密封，非标明标记。制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。7测定步
7.1提取
7.1.1牛奶
准确称取2g样品（准确至0.01g），置于25mL离心管中，加人5ml饱和氯化钠溶液（4.7)，涡旋混勾1tnin，加人7.5mL乙腈-二氯甲烷混合溶液（4.6）涡旋混勾1min，40001/min离心5min，上滑液转移至50mL氮吹替中，离心管中再加入7.5mL乙睛-二氣甲烷混合溶液，涡旋混句1min，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL氮吹管中，45℃氮气吹干。准确加人2.00nL乙腈至氮吹管中，涡旋混匀1min，加人3mL乙睛饱和正已烷（4.4）.涡旋混勾1min，静置30min，取下层溶液过0.2um滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。7.1.2奶粉
谁确称取0.5g样品（准确至0.00lg），置于10mL离心管中，加人3mL乙睛，超声振荡5min，4000/min离心5min，上清液转移至15ml带盖离心管中，渣再用2.0mL乙睛提取一次，离心后的清液合并至15mL带盖离心管中，用乙定容至5.mL刻度，混勾，加人3mL乙晴饱和正己烷（4.1），祸旋混匀1min，静置30min，取下层溶液过0.2um滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。7.2测定条件
7.2.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：ntersilC8-3,5μm，150mmx4.6mm（内径）或相当者：b)
柱蕴：40℃
c）进样量：25μ，
d）流速.0.8mL/min；
e）流动相：甲醇-上水，梯度洗脱程序见表1。2
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时间/rain
7.2.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
a）离子源：电喷雾电离源（ESI)：b）扫描方式：负离子扫描；
检测方式：多反应监测MRM;
表1梯度洗脱程序
甲醇/%
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雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他含适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；定性离子对、定量离子对、采集时闻、去簇电压和碰撞能最见表2。e)
表2伊维菌素、阿维菌紊、多拉菌素、乙氨基阿维菌素参考质谱参数化合物名称
伊维菌案
阿维世案
多拉菌素
乙酰氨基阿维菌素
定性离了对(m/z）定盘离子对(m/2）873.7/567.8
873. 7/229. 2
871.7/565.2
871.7/229.3
897. 6/591. 4
897.6/229.0
912.5/270.0
912.5/565.4
7.2.3液相色谱-串联质谱测定
7.2.3. 1 定性测定
873,7/229.2
871.77565.2
897.6/591.2
912.5/565.4
采渠时间/ms
去旗电压/V
碰撞能盘/V
每种被测组分选择 1个母离子2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离了的相对丰度与浓度接近的标谁溶被谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为择品中存在对应的待测物。
表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离于丰度 K
允许最大偏差
7.2.3.2定量测定
外标法定量：在仪器最佳工作条件下,对基质混合标准工作溶液(4.11)进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。伊维菌素、阿维菌案、多拉菌案和乙酰氨基阿维菌素的标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图 A,1~～图 A,4。伊维菌素,阿维菌素、多拉菌3
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素和乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B.1。7.3平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.4空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。B结果计算
牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌紧、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定按式(1)计算：V
式中：
X—一试样中被测组分残留意，单位为微克每千克(ug/kg)；从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)V——样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL);-
样品溶液所代表最然试样的质量：单位为克（g）。计算结果应扣除空自值。
９精密度
9.1一般规定
本标推的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性实验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限下，被测物的添加浓度范围及重复性方程见表 4,表 5。表4添加浓度范围及重复性和再现性方程（基质为牛奶）化合物名称
维菌素
阿维菌素
多拉菌索
乙酰氨基阿维菌素
透加浓度范臣
注：扭为两次测定结果的算术平均值。事某性限
r-0. 332m-0. 971
r=0.271m—0.318
r=0.259m-0.015
+=0. 230m+0. 085
添加浓度范围及重复性和再现性方程（基质为奶粉）化合物名称
伊维荫索
阿维菌素
多拉菌素
乙酰氨基阿维菌索
添加浓度范围bZxz.net
40~400
40~400
40~400
40~400
注；m 为两饮测定结果的算术平均值。重复性限：
r=0, 215m—0, 652
r=0, 220m+0, 113
r=0, 229m-0. 122
r=0. 111m 10. 437
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
单位为微克每干克
再现性限R
R=0. 346m +0. 182
R=0.272n+0. 323
R-0.308m+0. 599
R-0. 408m-1. 24
单位为微克每干克
再现性限R
R=0.188m-0. 262
R=0. 266m 1 0. 333
R=0.195m+0. 026
R=0. 117m+0. 179
在再现性实验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R），被测物的添加浓度范围及再现性方程见表 4,表 5。4
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附录A
【资料性附景】
标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图GB/T22968—2008
伊维菌紫、阿维菌索、多拉菌紧、乙酰氨基阿维菌素标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图，见图 A, 1 ~图 A. 4。
阿维菌素标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图6. 5
伊维菌囊标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图6.1
6 000. 00 -
图A.3多拉菌素标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图5
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GB/T22968—2008
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图A.4乙酰基阿维菌素标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图http：//

附录B
（资料性附录）
回收率
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本方法中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙疏氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据.见表B.1。
衰B.1伊维菌索，阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据样品基质
化合物名称
添加浓度/（μg/kg）
伊维菌案
多批菌
乙酰氨基阿维菌
伊维菌素
阿维茵素
多拉菌素
乙既氨基阿维菌素
◆日科
平均回收率/%
中华人民共和国
国家标推
牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T22968--2008
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