本标准规定了牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮-、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定。 GB/T 22973-2008 牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22973-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB/T22973—2008
牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮
醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮
残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determination of melengestrol acetate,chlormadinone acetate and megestrolacetateresidues inmilk andmillk powderHPLC-MS-MSmethod
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22973—2008
本标准负责起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：王传现、唐毅锋、方晓明、盛永刚、庞国芳。1范围
牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮、
醋酸地孕酮和醋酸甲地孕酮
残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T22973—2008
本标准规定了牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮（melengestrol acetate）醋酸氯地孕酮（chlormadinoneacetate）和醋酸甲地孕酮（megestrolacetate)残留量的液相色清电联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮、醋酸氧地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定。本标准的方法检出限：牛奶中醋酸美仑孕酮、醛酸甲地孕酮和醛酸氯地孕酮检测限均为2/kg：奶粉中醋酸美仑孕酮、醛酸甲地孕酮和醛酸氧地孕酮的检测限均为20/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勤误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.1-2004.ISO5725-1.1994,IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2--2004ISO5725-2:1994.IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008.ISO3696:1987.MOD）原理
从牛奶样品中捷取脂肪后，用乙睛提取，皂化后，经鼠内基型固相萃敢柱净化，C色谱柱分高，液相色谐-申联质潜检测，外标法定量。4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯。4.1水：GB/T6682.一级.
4.2乙腩：色潜纯。
4.3甲醇：色谱纯、
4.4乙酸乙醛：色谐纯。
4.5正已烧：色谱纯
4.6氯化镁（MgCl·6H,O)。
4.7氢氧化钠。
4.8甲酸。
4.925%氨水
4.1095%乙醇
4.11石油醚。
4.12无水硫酸钠。
GB/T229732008
乙酸乙酯+正已烷（1+19）：量取10mL乙酸乙酯（4.4）与190mL正已烷（4.5）混合。乙酸乙酯+正已烷（1+4）：量取40mL乙酸乙酯（4.4）与160mL正已烷（4.5）混合。1.0mol/L氧化镁溶液：称取20.3g氯化镁（4.6），用水溶解并定容到100mL。4.15
4.160.1mol/L氢氧化钠溶液：称取1.00g氢氧化钠（4.7).用水溶解并定容到250mL。4.17乙腈+水（7+3）：量取700mL乙腈（4.2）与300mL水混合，摇勺4.18标准物质：醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮，纯度≥97%。4.191000μg/mL标准储备溶液：准确称取醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准物质（4.18）各0.0500g于50mL容量瓶中，用甲醇（4-3）落解并定容至刻度。标准储备溶液于4C保存。分别吸取10.0mL醋酸美仑及酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮4.20100μg/mL混合标准溶液I
标准储备液（4.19）于100mL容量瓶中，用甲醇定容该混合标准溶液于4℃保存。
1.取10mL混合标准溶液1（4.20）于100mL容量瓶中，用甲醇定4.211.0μg/mL混合标准溶液
容。该混合标准溶液于4℃
格据需要，取适量的混合标准溶液Ⅱ（4.），用生白样品提取液配成不4.22基质混合标准工作
同浓度的基质混合标准
标准工作浴液现用现配
4.23氰丙基固相萃取柱或相当者3ml/500mg.
使用前分别用
用5mL乙酸乙配和6mL正已烧淋
洗，保持柱体湿润。
4.24滤膜：0.2μm
5仪器和设备
O仪：配有电喷雾高子源（ESD）5.1液相色谱-串
5.2分析天平：感
5.3氨气浓缩仪
有真空泵，
5.4固相萃取装置
5.5低温离心机：
5.6液体混匀器。
5.7恒温水浴。
至室温，最大转速5000/min。
5.8微波炉。
5.9移液器：10μL~
和100
6试样制备与保存
6.1试样的制备
取样品500g搅拌混勾，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记6.2试样的保存
如果制备好的试样不立刻测定，则将测式样置于4℃中保存7测定步骤
7.1样品称量
7.1.1牛奶样品
称取10g（精确到0.01g）牛奶样品，置于50mL具塞聚丙烯离心管中7.1.2奶粉样品
称取1g样品（精确到0.01g)，置于50mL具塞聚丙烯离心管中，然后加人8倍质量的水溶解后混匀。7.2样品提取
加1.0mL氨水（4.9），混勾。加入10mL95%乙醇（4.10），混勾后加人10mL乙酸乙酯（4.4），振播1min，再加人10mL石油醚（4.11），同样振摇1min，以4000r/min离心5min，吸取上层提取液通2
httn：
oemeto
CB/T229732008
过装有15g无水硫酸钠的玻璃柱过滤到50mL具寒聚丙烯离心管中，再用8mL乙酸乙酯（4.4）和8mL石油醚（4.11)重复提取残液一次，以40001/min离心5min，提取液过相同的无水硫酸钠的玻璃柱，用5mL乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱后，合并提取液，提取液于60℃用氢气浓缩仪吹干。加人5mL乙睛，于60℃水溶中保持3min，使脂肪融化。竭旋1min，于一5℃以4000z/min离心7min，吸取上清液至15mL具塞聚丙烯离心管中，再向沉淀物中加人5mL乙脂重复提取一次，合并上清液，向合并的乙腈提取液中加人2mL正已烷（4.5），祸旋1min，于-5C以4000r/min离心5min，弃去正已烧层，再用2mL正已烧重复洗条乙腈相，弃去正已烷层。乙腩携取液于60℃用氮气浓缩仪吹干。
7.3皂化
向乙腈提取液（7.2）中依次加人4mL正已烧（45）1mL氢氧化钠溶液（4.16）和0.5mL氢化镁溶液（4.15），于液体混匀器
上快速混108，在60℃水浴中保错15min于-5℃以4000z/min离心5min，吸取上清液至15
15min后，于-5℃以
已烷落解残渣，待净化
7.4净化
将上述样液（
房管中向沉淀物中再加人4mL正已烧混勾，于60℃水浴中加热NbZxz.net
min离心5min，合并上清液。于60℃用氢气老缩仅吹干，用1.0mL正人氰丙基固相萃取柱中C23)，用2mL已烷分两次润洗玻璃试管，洗液也祥液流出后，依次用5mL正己烷和6ml移人固相萃取柱
乙酸乙嘴+正已烷溶液（1+19）
（4.13）淋洗固相幸取柱，
，淋洗液流出后，周固相萃取柱抽干2min，最后用3.5ml（1+4)（4.14)洗脱脱液收集于另—1乙酸乙酯+正已烧溶液
ml商心管中，手60C用氮气浓缩化吹干。乙腩+水（7+3
涡旋溶解过滤膜，
供液相色谐-申联质谐测定。
7.5测定条件
7.5.1／液相色
色请售者条件
液相色谱参
件如下：
Ce柱，3μm，50mm×2.0mm（内径）或相当者a
色谱柱
柱温：30
流速：0.
进样量：1
梯度洗脱，
ain；
顺利字见表
时间/min
7.5.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
离子源：正离子电喷雾：
扫描方式：多反应检测MRM
电喷雾电压：4000V：
离子源温度：350C：
液相色谱梯度洗脱程
0.1%甲酸水溶液/%
残余物用1mL
艺脂含0.1%甲酸/%
雾化气、气布气、辅助气：均为高纯氢气，使用前调节各气流流量，以使质谐仅灵敏度达到检测要求；
定性离子对，定量离子对，去簇电压和碰撞能量见表2D
http：//foodmate.neGB/T22973-2008
化合物名称
醋酸美仑孕丽
醋酸氧地孕酮
醋酸甲地孕面
表2定性离子对，定量离于对，去族电压和碰撞能量定性离于对（m/a）
397/337
397/279
405/345
405/309
385/325
385/267
7.5.3液相色谱-串联质谱测定
7.5.3.1定性测定
定量商于对（m/）
397/337
405/345
385/325
去镶电压/V
硅童能量V
每种被测组分选择1个母离子，2个以上于离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与湿合基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在土2.5%之内，且样品谱图中各定生高子的相对丰度与浓度接近的退合基质标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范图，则可判断样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离于丰度的最大允许偏差相对高于丰度K
允许相对偏差
7.5.3.2定量测定
20KK50
在仪器最佳工作条件下，用混合基质标准校准溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，以测合基质标准校准溶液旅皮为横坐标·绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量·样品液中特测物的响应值均应在仪器测定的线性范图内，在上述色谱条件下，醋酸美仑孕酮、醋酸氧迪孕酮和醋酸甲地孕酮标准物质的多反应检测(MRMD色谱图参见附录A中的图AI、图A2和图A3.本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B1.7.6平行试验
技以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.7
空自试验
除不称取样品外，均按上述步骤进行。8结果计算
醋酸美仑孕酮、醋酸氧地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定式(1)计算：V1000
×1000
试样中被测组分戏留量，单位为微克每干克（）从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每升（题/mL)：样品液定容体积，单位为毫升（ml）：样品溶液所代表试样的质量，单位为克（）。计算结果应扣除空白值。
9精密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的、重复性和再费性的值以95%的可信度来计算
品伙伴网http://foodmate.netGB/T22973-2008
9.2重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，，牛奶中醋酸美仑率酮、醋酸氨地孕酮和醋酸甲地孕酮添加浓度范围及重复性方程见表4小、奶粉中醋酸美仑孕酮、醋酸氟地孕酮和醋酸甲地孕酮添加浓度范围及重复性方程见表5。表4牛奶中三种孕酮的添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为毫克每干克
化合物名称
醋酸美仑孕酮
醋酸氨地孕酮
醋酸甲地孕酮
添加液度范围
0.002-0.020
0002-0.020
0.002-0.020
注：m为两次测定值的平均值
重复性限
gr-0.7576lgm-o.9527
lgr-0.8868lgm-0.9084
lgr0.8718lgm-0.9059
再现性限R
IgR=0.9725lgm-0.5187
IgR-0.9314lgm-0.4942
IgR-0.8964lgm-0.4976
表5奶粉中三种孕酮的添加浓度范围及重复性和再现性方程呈单位为毫克每干克
化合物名称
醋酸美仑孕醋
醋酸氨地孕酮
醋酸甲地孕酮
添加浓度范围
0.020-0.200
0.020-0.200
0,020-0.200
注：就为两次测定值的平均值
重复性限，
lgr=0.9336lgm-0.9724
lgr-0.6814lgm-0.4461
lgr-0.9876lgm-0.9798
再现性限R
IgR=0.9876lgm-0.5460
lgR-0.9166lgm0.4235
IgR=0.9636lgm-0.5525
如果两次测定值的差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，牛奶中醋酸美仑孕酮、醋酸氧地孕酮和醋酸甲地孕酮添加浓度范围及再现性方程见表4，奶粉中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮添加浓度范围及再现性方程见表5。GB/T22973—2008
附录A
（资料性附录）
标准物质的多反应监测（MRM色谱图醋酸美仑孕酮标准物质的多反应监测（MRM)色谱图，见图A.1。+MRM（397.3/337.2）
123456789
图A.1醋酸美仑孕酮标准物质的多反应监测（MRM）色谱图醋酸氧地孕酮标准物质的多反应监测（MRM)色谱图，见图A2。+MRM(405.3/309.3)
123456789
图A.2醋酸氧地孕酮标准物质的多反应监测（MRM）色谱图醋酸甲地孕酮标准物质的多反应监测（MRM)色谱图，见图A.3。+MRM(385.3/325.3)
123456789
图A.3醋酸甲地孕酮标准物质的多反应监测（MRM）色谱图Faoemotor
附录B
（资料性附录）
回收率
GB/T22973—2008
本方法中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B.1。
表B.1醋酸美仑孕酮、醋酸氨地孕酮和醋酸甲地孕酮添加浓度及其平均回收率的试验数据样品基质
化合物名称
添加浓度/(μg/kg）
平均回收率/%
醋酸美仑孕酮
醋酸氧地孕酮
醋酸甲地孕酮
醋酸美仑孕酮
醋酸氨地孕酮
醋酸甲地孕酮
GB/T22973-2008
中华人民共和国
国家标准
牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮、
醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮
残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T22973-2008
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社泰皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
印张0.75字数15千字
开本880×12301/16
2009年4月第一版
2009年4月第一次印刷
书号：155066·1-36819定价14.00元如有印装差错
由本社发行中心调换
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