本标准规定了牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的液相色谱?串联质谱测定方法。本标准适用于液态奶(包括原料奶、纯牛奶、脱脂牛奶)和奶粉(包括纯奶粉、脱脂奶粉和婴幼儿配方奶粉)中拉沙洛菌素、莫能菌素、尼日利亚菌素、盐霉素、甲基盐霉素、马杜霉素铵残留量的测定。 GB/T 22983-2008 牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22983-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22983--2008
牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of six polyether antibiotics residuesin milk and milk powder-LC-MS-MS method2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准附录A、附录B为资料性附录。前言
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22983—2008
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国青海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：薄海波，曹彦忠、锥丽丽、贾光群、星玉秀、李连通、庞国芳H
http://foodmate.net1范围
牛奶和奶粉中六种聚酵类抗生素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T 22983—2008
本标准规定了牛奶和奶粉中六种聚醛类抗生素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于液态奶（包括原料奶、纯牛奶、脱脂牛奶）和奶粉（包括纯奶粉、脱脂奶粉和婴幼儿配方奶粉）中拉沙洛菌素（lasalocid），能菌索（monensin）、尼日利亚菌素（nigericin）、盐素（salinomycin）甲基盐爵素（narasin）、马杜霉素铵（madubamycinammonium）残留最的测定。本标准的方法检出限：牛奶中拉沙洛菌素、莫能菌素、尼日利亚菌素、盐霉索、甲基盐霉素、马杜霉索铵检出限均为0.2/L；奶粉中拉沙菌素、莫能菌素、尼日利亚菌囊、盐霉素、甲基盐霉素、马杜藓素铵检出限均为1.6μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2:1994，IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（CB/T6682—2008，SO3696：1987,MOD）3原理
试样中聚醛类抗生素，用乙腊提取，固相萃取柱净化，商效液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯。4.1水:GB/T 6682,—级。
4.2乙膜：色谱纯。
4.3甲醇：色谱纯。
4.4正己烷：色谱纯。
4.5乙腊饱和的正已烷：取少量乙睛（4.2）加入正已烷（4.4）中，充分混勾。静止分层后，取[层正己烷，
4.6甲酸：优级纯。
4.7乙酸铵优级纯。
4.8无水硫酸钠：用前在650℃灼烧4h，置于干燥器中冷却后备用。4.9水系流动相：1mL甲酸与0.385g乙酸铵溶于1000mL水，混匀，当天配制。4.10甲醇溶液(1+1):100 mL 甲醇与100 mL水混合均勺。1
金量伙伴欧
GB/T 22983—2008
4.11拉沙洛菌索（CAS25999-20-6）、莫能菌素（CAS22373-78-0）、尼日利亚菌素（CAS28643-80-3)、盐霉素（CAS55721-31-8）、甲基盐霉素（CAS55134-13-9）、马杜霉素铵（CAS84878-61-G）标雅品：纯度大于等于95%。
4.12标准储备溶液：准确称取适量的每种标推物质（4.11)，分别用甲醇（4.3）配制成浓度为1mg/ml标储备溶液。储备液贮存在一18℃冰柜中。4.13标推工作溶液：吸取1.00mL标推储备溶液（4,12），移人100mI.棕色容量瓶，用甲醇定容，该溶液浓度为10μg/mI，贮存在α℃～4℃冰箱中。4.14OasisHLB固相萃取小柱或相当者：3ml，60mg。使用前依次用3mL中醇和5mL水活化小柱，保持柱体湿润。
4.15滤膜：0.2um。
5仪器和设备
5.1液相色谱-申联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。5. 2分析天平:感量 0, 1 mg和 0. 01 名。5.3
旋涡混勾器。
5.4振荡器。
离心机：最大转速不低于5000t/min。5.5
移液器：1mL
自动浓缩仪或相当者。
浓缩瓶：50mL。
5.9固相萃取装置。
5.10氮气吹干仪。
6试样制备与保存
试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分混勾，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封后作为试样，标明标记，在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2试样的保存
将试样于4℃保存。
7定方法
7.1提取
7. 1、1牛奶样品
称取10.0混匀的试样于50mL聚丙烯离心管中，加无水硫酸钠（4.8）约10g和乙腈（4.2）2×20mL，祸旋混勾1min，振落10min，以30001/min离心3nin。合并上清液，加10mL乙睛饱和的正已烷（4.5），涡旋1min，弃去正已烷，减压浓缩至近于。用4tmL甲醇溶液（4.10）解残渣，待净化。
7.1.2奶粉样品
称取12.5奶粉于烧杯中，加适量35℃～50℃水将其溶解，待冷却至室温后，用水定容至100ml.,充分混匀。最取10.0g样品溶液于50mL聚丙烯离心管中，按7.1.1步提取。7.2净化
将7.1所得的样品溶液加载到固相苯取柱中，并用2mL甲醇溶液（4.10)淋洗浓缩瓶，并人固相萃取柱，依次用5ml.水和3mL甲醇溶液（4.10)淋洗柱体，4mL甲醇（4.3）洗脱，用氮气吹干仪将洗脱液吹于,用1. 0 mL 甲醇溶解,过 0. 2 μm 滤膜,供液相色谱-串联质谱测定。2
7.3基质标准工作溶液的制备
GB/T 22983—2008
称取6份阴性样品各10.0g，置于50mL具塞的骤丙烯管中，分别加人不同体积的六种聚醚类抗生素的标准工作溶液（4.13），按6.1和6、2步骤操作。制备成浓度为1.0ng/mL、5.0ng/ml.、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL.、lo0.0ng/mL的基质标准工作溶液。7.4测定条件
7.4.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下；
色谱柱：BEHClg,1.？μr，50 mm×2.1mm(内径)或相当者：a)
柱温：40℃；
进样量；5.0μL；
流动相：流动相A：甲酶（4.3)，流动相B：水系流动相(4.9)。洗脱程序及流速见表1。表1流动相梯度程序及流速
时间/min
串联质谱参考条件
串联质谱参考条件如下：
流速/μL/min)
离了源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
检测方式:多反应监测；
毛细管电压:2.8kV;
离子源温度:110 ℃;
去溶剂气温度：380℃
去溶剂气（气）流量：600L/h；锥孔气(氮气)流量：50L/h；
碰撞气流量:0. 1 L/h;
锥孔电压、碰撞能景和驻留时间等质谱参数及母离子和子离子详见表2。表2六种聚醚类抗生素的质谱参数和保留时间保留时间/
化合物名称
拉沙踏菌素
莫能菌素
尼日利亚
母商子
子离子
（定母）
(m/→)
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子离子
(定性)wwW.bzxz.Net
碰撤能量/
驻留时间/
链孔电压/
GB/T22983—2008
保留时间/
化合物名称
盐葡素
甲基盐霉素
马杜霉索铵
7.5测定
7.5. 1定性测定
母离子
表2（续）
子离了
(定量）
子离子
(定性）
撞能量/
驻阐时间/
锦孔电压/
样品溶液按照液相色谱·串接质谱分析条件进行测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与基质标准溶液中对应物质的保留时问一致.并在扣除背景后的样品质谱图中，子离子的相对丰度与浓度接近的、相条件下所得到的基质标准溶液谱图相比，误差不超过表3规定的范围，则可以判断样品中存在对应的被测物质。
表3定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对高于丰度 K
充许的相对偏差
7.5.2定整测定
根据样品中被测物质的含量情况，选取峰面积相近的标准工作溶液一起进行液相色谱-串接质谱分析。标准工作溶液和待测样液中聚避类抗生素的响应值均应在检测的线性范围内。对标准工作溶液和待测样液等体积参插进样测定。在上述液相色谱串接质谱分析条件下，6种被测物质的保留时间见表2。其标准品的多反应离子监测色谱图参见附录A中图A，1至图A.6。本方法六种聚醛类抗生素在牛奶和奶粉中添加浓度及其平均同收率的试验数据参见附录B中的表 B. 1 和表 B, 2 。
7.6平行试验
按以上步骤对同…试样进行平行试验测定。7.7空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行测定，8结果计算
聚醛类抗生素残留量的测定按式(1)计算X=rx
式中：
V1 000
试样中被测组分残留量，液态奶样品：单位为微克每升（u名/L），奶粉样品：单位为微克舞干x
克(g/kg);
从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；一样品溶液定容体积，单位为毫升（mL)；-样品溶液所代表试样的体积或质量，液态奶样品：单位为升（mL），奶粉样品：单位为克（g）。计算结果应扣除空白值。
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9精密度
9.1—般规定
GB/T 22983—2008
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，试样中六种聚醚类抗生素添加浓度范围及重复性方程见表4，表4六种聚醚类抗生素添加浓度及重复性限和再现性限方程单位为微克每干克化合物名称
拉沙洛菌素
莫能素
尼甘利亚菌素
甲基盐霉素
马杜霉素铵
样品基质
添加浓度范围
1, 6 -32
1. 6 ~ 32
注：m为两次测定结果的算术平均低：重复性限
再现性限R
Ig ×=1. 011 8 g m-0. 523 0 / ig R=0. 958 4 lg mm0. 585 81g r1.190 3 lg m- c. 596 1 ig R=1. 340 8 Ig m—0. 590 2igr-0.95071gm-0.52011gR=0.8905lgm0.57281gr=0. 967lg m-0.5258gR0.9683lg m0. 952 7Ig r=1, 089 9 1g m-0. 578 2 / Ig R=1. 025 4 Ig n-0. 614 0Ig r=1.086 o lg m-0. 647 4lg R=1. 052 3 lg m-0.676 5如果两次测定值的差值超过重复性限一，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.3再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，试样中六种聚醚类抗生素添加浓度范围及再现性方程见表4。全品伙伴网h
GB/T 22983—2008
附录A
（资料性附录）
标准物质的多反应监测(MRM)色谱图六种聚醚类抗生素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图,见图 A,1～图 A.6。100%
693.5/675. 66
603.5/479.32
奠能菌素标准物质反应监测(MRM)色谱图1, 3B
TTTTTT
939. 6/877. 36
939. 6/895. 5
马杜梦素铵标准品物质的多反应监测(MRM)色谱图1.50
613.5/377.14
100%—
拉沙洛菌案标准物质的多反应监测(MRM)色谱图图A3
合品伙伴网ht
atenet
613.5/595.35
100/%-
773.6/431.1
G. Lrtrttrr'trrrt
100/%—
盐霉素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图图A.4
742.7/657.6
GB/T 22983—2008
773.6/531.5
尼日利亚菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图1.85
787.6/431.47
742.7/461.44
1.85787.6/531.31
甲基盐需素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图图A6
合品伙伴网针
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附录B
(资料性附录）
回收率
六种聚醚类抗生素在牛奶中添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B.1；六种聚醚类抗生素在奶粉中添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B.2。表B.1六种醚类抗生素在牛奶中添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称
拉沙洛菌素
莫能菌囊
尼日利亚谢索
盐荐素
手基盐索
马杜霉案铵
金其伴
添加浓度/(μg/kg)
平均回收率/%
GB/T22983—2008
表B.2六种聚醚类抗生素在奶粉中添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称
拉沙落菌素
莫能菌索
尼日利亚菌帝
盐辑素
甲基盐霉察
马杜霉紊铵
添加浓度/(ug/kg)
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平均回收率/%
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打印口期：2009年5月20日
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中华人民共和国
国家标准
牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
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