GB/T 22985-2008
基本信息
标准号： GB/T 22985-2008
中文名称：牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
发布日期：2008-12-31
实施日期：2009-05-01
出版语种：简体中文
下载格式：.rar.pdf
下载大小：611754
标准分类号
标准ICS号：食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
中标分类号：食品>>食品综合>>X04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
页数：12页
标准价格：14.0 元
计划单号：20079611-T-469
出版日期：2009-05-01
相关单位信息
首发日期：2008-12-31
起草人：陈瑞春、吕红英、段文仲、郭春海、艾连峰、邢军、马育松、姚春毅、庞国芳
起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检疫局
归口单位：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
提出单位：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
发布部门：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会
主管部门：国家标准化管理委员会
标准简介
本标准规定了牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量的测定和确证。 GB/T 22985-2008 牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22985-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net
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标准内容
ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22985—2008
牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of enrofloxacin,danofloxacin,ciprofloxacin,sarafloxacin,orbifloxacin,difloxacin and marbofloxacin in milk and milk powder-LC-MS-MSmethod
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22985—2008
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：陈瑞春、吕红英、段文仲、郭春海、艾连峰、邢军、马育松、姚春毅、庞国芳1
1范围
牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、一氟沙星和麻保沙星残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T22985—2008
本标准规定了牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量的测定和确证。
本标准的方法检出限：牛奶中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星均为1ug/kg；奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星均为4μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.12004,ISO5725-1:1994IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-2：1994,IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--2008，ISO3696：1987，MOD）3原理
用乙腈和磷酸盐缓冲溶液提取试样中残留的恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星，OasisHLB固相萃取柱\净化，5%氨水甲醇溶液洗脱，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2乙腈：色谱纯。
4.3磷酸：色谱纯。
4.4甲酸：色谱纯。
1）Oasis HLB固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1
GB/T22985—2008
4.5磷酸氢二钠，NazHPO，·12H,O。4.6磷酸二氢钾，KH,PO。
4.7氨水。
4.8磷酸盐缓冲溶液（0.05mol/L）：称取5.68g磷酸氢二钠（4.5）和1.36g磷酸二氢钾（4.6），放人1000mL烧杯中，加人800mL水溶解，用磷酸（4.3)调至pH=3.0，再用水定容至1000mL。4.95%氨水甲醇溶液：吸取50mL氨水（4.7)与950mL甲醇（4.1)混合。4.10甲酸溶液（pH=3.0）量取500mL水，用甲酸（4.4)调pH值到3.0。4.1125%甲醇溶液：量取250mL甲醇（4.1)用水稀释到1000mL。4.12甲醇-甲酸溶液（15十85）：量取30mL甲醇（4.1）与170mL甲酸溶液（4.10）混合。4.13标准物质：恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星、麻保沙星标准物质，纯度大于等于95%。
4.14标准储备浴液：0.1mg/mL。准确称取适量的每种标准物质，用甲醇（4.1）配成0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4℃保存。4.15混合标准中间溶液：1μg/mL。分别吸取1mL标准储备溶液（4.14)放入100mL容量瓶中，用甲醇（4.1)定容至刻度。该溶液在4℃保存。4.16混合标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液配不同浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液在4℃保存。
4.17OasisHLB固相萃取柱或相当者：60mg，3mL。使用前分别用5mL甲醇和5mL水和5mL磷酸盐缓冲溶液（4.8)活化，保持柱体湿润。4.18滤膜：0.2μm。
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3涡旋振荡器。
5.4固相萃取装置。
5.5氮气吹干仪。
5.6真空泵：最大负压80kPa。
pH计：测量精度士0.02pH单位。5.8
贮液器：通过转接头连接于OasisHLB固相萃取柱上。5.9离心机。
5.10旋转蒸发仪。
具刻度离心管：10mL。
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用。6.2试样保存
牛奶置于4℃冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。7测定步骤
7.1提取
7.1.1牛奶
称取2g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，加入10mL乙腈，于涡旋振荡器振2
GB/T22985—2008
荡提取1min，5000r/min离心5min，上清液过滤到鸡心瓶中，在残渣中加人5mL磷酸盐缓冲溶液（4.8），10mL乙睛，重复以上步骤，合并上清液，于50℃旋转蒸发，至乙腈全部蒸出。加人5mL磷酸盐缓冲溶液，混匀。
7.1.2奶粉
称取0.5g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，加入6mL磷酸盐缓冲溶液（4.8），涡旋混匀，再加人10mL乙睛，于涡旋振荡器振荡提取1min，5000r/min离心5min，上清液过滤到鸡心瓶中，在残渣中加人5mL磷酸盐缓冲溶液，10mL乙腈，重复以上步骤，合并上清液，于50℃旋转蒸发，至乙腈全部蒸出。加人5mL磷酸盐缓冲溶液，混匀。7.2净化
将7.1的样液转移到贮液器中，再用5mL磷酸盐缓冲溶液洗鸡心瓶，洗液合并到贮液器，以约1mL/min的流速全部过HLB固相萃取小柱（4.17），待样液完全流出后，先后以4mL水、4mL25%甲醇水溶液淋洗，抽干，用4mL5%氨水甲醇溶液（4.9）洗脱于10mL具刻度离心管中，洗脱液于50℃，氮气吹至约0.2mL时停止浓缩，用甲醇-甲酸溶液（4.12）定容至1mL，5000r/min离心5min，过0.2μm滤膜，供液相色谱串联质谱分析。7.3空白基质溶液的制备
将取牛奶阴性样品2g，奶粉阴性样品0.5g，按7.1和7.2操作。7.4测定条件
7.4.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C，5μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者；b)
色谱柱温度：30℃；
进样量：15μL；
流动相梯度及流速见表1。
表1液相色谱梯度洗脱条件
时间/min
质谱参考条件
质谱参考条件如下：
流速/（μL/min）
离子化模式：电喷雾正离子模式（ESI+）；b)
质谱扫描方式：多反应监测（MRM)；鞘气压力：104kPa
辅助气压力：138kPa；
正离子模式电喷雾电压（IS)：4000V；毛细管温度：320℃；
源内诱导解离电压：10V；
Q1，Q3分辨率：Q1为0.4，Q3为0.7；碰撞气：高纯氩气；
碰撞气压力：0.2Pa；
0.1%乙酸水溶液/%
甲醇/%
GB/T22985-2008
k）其他质谱参数及7种喹诺酮的CAS号、保留时间见表2。表2七种喹诺酮类药物保留时间、CAS号、定性离子对、定量离子对和裂解能量化合物中文名称化合物英文名称恩诺沙星
达氟沙星
环丙沙星
沙拉沙星
奥比沙星
二氟沙星
麻保沙星
enrofloxacin
danofloxacin
ciprofloxacin
sarafloxacin
orbifloxacin
difloxacin
marbofloxacin
保留时间/
7.4.3液相色谱-串联质谱测定
7.4.3.1定性测定
CAS号
93106-60-6
119478-55-6
93107-08-5
98105-99-8
113617-63-3
124858-35-1
115550-35-1
定性离子对
360.10/315.97
360.10/244.86
358.14/339.83
358.14/313.80
332.30/288.14
332.30/244.88
386.11/341.77
386.11/298.83
396.05/352.01
396.05/394.98
400.12/355.71
400.12/298.85
363.15/319.91
363.15/344.95www.bzxz.net
定量离子对
360.14/316.08
358.14/340.00
332.30/288.14
386.10/341.77
396.05/352.01
400.12/355.71
363.15/319.91
裂解能量/
每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与混合基质标准校准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度K
允许最大偏差
7.4.3.2定量测定
2010K≤10
在仪器最佳工作条件下，对混合基质标准校准溶液进样，以峰面积为纵坐标，混合基质校准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。标准品多反应监测色谱图参见附录A中图A.1。7.5平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6空白试验
除不称取样品外，均按上述步骤进行。7.7回收率试验
吸取适量混合标准工作溶液，用空白基质溶液（7.3）稀释成所需浓度的标准校准溶液。阴性样品中添加标准溶液，按7.1和7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。样品添加回收率实验数据参见附录B中的表B.1。
8结果计算
试样中每种喹诺酮残留量按式（1)计算：式中：
X=c×100
试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；GB/T22985—2008
·（1)
从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）：样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。i表示第种喹诺酮，计算结果应扣除空白值。精密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（r），牛奶和奶粉中七种喹诺酮的添加浓度范围及重复性方程见表4、表5。表4牛奶中七种喹诺酮的添加浓度范围及重复性和再现性方程化合物名称
恩诺沙星
达氟沙星
环丙沙星
沙拉沙星
奥比沙星
二氟沙星
麻保沙星
化合物名称
恩诺沙星
达氟沙星
环丙沙星
沙拉沙星
奥比沙星
二氟沙星
麻保沙星
添加浓度范围
重复性限r
r=0.1313m-0.0985
r=0.0942m-0.0351
r=0.0737m+0.0168
r=0.0783m-0.0281
r=0.0690m-0.0087
r=0.0905m-0.0343
lgr=1.0992lgm1.0940
单位为微克每千克
再现性限R
R=0.2018m—0.150 0
IgR=1.1637lgm—0.9122
R=0.1221m+0.1099
R=0.1240m+0.0584
IgR=1.0398lgm—0.8377
R=0.1710m-0.0612
IgR=1.0162lgm-0.8046
奶粉中七种喹诺酮的添加浓度范围及重复性和再现性方程添加浓度范围
重复性限r
lgr=0.9319lgm-0.9356
Igr=1.0358lgm-1.0438
lgr=0.7928lgm-0.8237
r=0.0746m+0.1785
r=0.0712m+0.0610
lg r=0. 940 1 lg m0. 908 4
lgr=0.9285lgm-0.8998
单位为微克每千克
再现性限R
lgR-1.0695lgm-0.9456
R=0.1782m-0.0346
lgR=0.9275lgm-0.7228
lgR=0.8883lgm—0.6491
R=0.1109m+0.2602
lgR=0.9051lgm-0.6383
IgR=0.8448lgm—0.5742
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R)牛奶和奶粉中七种喹诺酮的添加浓度范围及再现性方程见表4、表5。15
GB/T22985--2008
附录A
（资料性附录）
标准物质多反应监测（MRM）色谱图七种喹诺酮标准物质多反应监测（MRM)色谱图，见图A.1。RT:4.00-9.00
lepunqv
恩诺沙星
360.10/315.97
恩诺沙星
360.10/244.86
达氟沙星
358.14/339.83
达氟沙星
358.14/313.80
环丙沙星
332.30/288.14
环丙沙星
332.30/244.88
沙拉沙星
386.11/341.77
注：图中前面的为定量色谱图，后面的为定性色谱图。RT:4.009.00
奥比沙星
396.05/352.01
奥比沙星
396.05/394.98
二氟沙星
400.12/355.71
二氯沙星
400.12/298.85
麻保沙星
363.15/319.91
麻保沙星
363.15/344.95
沙拉沙星
386.11/298.83
图A.1七种喹诺酮标准物质多反应监测（MRM)色谱图6
附录B
（资料性附录）
回收率
七种喹诺酮添加浓度及其回收率范围的试验数据，见表B.1。表B.1七种喹诺酮添加浓度及其回收率范围的试验数据化合物名称
麻保沙星
环丙沙星
达氟沙星
恩诺沙星
奥比沙星
沙拉沙星
二氟沙星
添加浓度/（μg/kg）
回收率范围/%
80.8~108.0
86.6~100.6
77.3~95.0
81.2~92.0
76.8~90.1
73.2~92.6
73.8~100.2
79.1~92.3
87.4~109.4
84.0~97.6
77.0~102.1
78.5~92.1
85.9~102.0
80.8~101.1
79.4~92.2
83.9105.0
77.2~98.2
79.7~93.6
72.1~97.1
78.2~95.5
84.6103.7
84.5~93.8
88.9108.1
85.9~101.3
84.4~94.6
GB/T22985—2008
添加浓度/(μg/kg）
回收率范围/%
76.0~101.2
86.9~101.5
78.8~96.0
83.8~93.4
89.0~100.3
75.2~95.3
76.0~98.6
82.5~94.6
70.4~101.3
81.6~90.7
74.6~93.9
81.8~94.0
75.2~93.8
77.1~100.1
78.6~101.5
81.8~92.7
80.9~101.7
82.4~100.5
77.2~100.2
79.2~90.4
78.6~100.9
81.1~94.8
77.1~97.8
80.5~94.0
82.3~96.0
84.1~96.1
81.3~108.0
80.9~92.2
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中华人民共和国国家标准
GB/T22985—2008
牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of enrofloxacin,danofloxacin,ciprofloxacin,sarafloxacin,orbifloxacin,difloxacin and marbofloxacin in milk and milk powder-LC-MS-MSmethod
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22985—2008
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：陈瑞春、吕红英、段文仲、郭春海、艾连峰、邢军、马育松、姚春毅、庞国芳1
1范围
牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、一氟沙星和麻保沙星残留量的测定液相色谱-串联质谱法
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本标准规定了牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留量的测定和确证。
本标准的方法检出限：牛奶中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星均为1ug/kg；奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星均为4μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.12004,ISO5725-1:1994IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-2：1994,IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--2008，ISO3696：1987，MOD）3原理
用乙腈和磷酸盐缓冲溶液提取试样中残留的恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星，OasisHLB固相萃取柱\净化，5%氨水甲醇溶液洗脱，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2乙腈：色谱纯。
4.3磷酸：色谱纯。
4.4甲酸：色谱纯。
1）Oasis HLB固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1
GB/T22985—2008
4.5磷酸氢二钠，NazHPO，·12H,O。4.6磷酸二氢钾，KH,PO。
4.7氨水。
4.8磷酸盐缓冲溶液（0.05mol/L）：称取5.68g磷酸氢二钠（4.5）和1.36g磷酸二氢钾（4.6），放人1000mL烧杯中，加人800mL水溶解，用磷酸（4.3)调至pH=3.0，再用水定容至1000mL。4.95%氨水甲醇溶液：吸取50mL氨水（4.7)与950mL甲醇（4.1)混合。4.10甲酸溶液（pH=3.0）量取500mL水，用甲酸（4.4)调pH值到3.0。4.1125%甲醇溶液：量取250mL甲醇（4.1)用水稀释到1000mL。4.12甲醇-甲酸溶液（15十85）：量取30mL甲醇（4.1）与170mL甲酸溶液（4.10）混合。4.13标准物质：恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星、麻保沙星标准物质，纯度大于等于95%。
4.14标准储备浴液：0.1mg/mL。准确称取适量的每种标准物质，用甲醇（4.1）配成0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4℃保存。4.15混合标准中间溶液：1μg/mL。分别吸取1mL标准储备溶液（4.14)放入100mL容量瓶中，用甲醇（4.1)定容至刻度。该溶液在4℃保存。4.16混合标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液配不同浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液在4℃保存。
4.17OasisHLB固相萃取柱或相当者：60mg，3mL。使用前分别用5mL甲醇和5mL水和5mL磷酸盐缓冲溶液（4.8)活化，保持柱体湿润。4.18滤膜：0.2μm。
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3涡旋振荡器。
5.4固相萃取装置。
5.5氮气吹干仪。
5.6真空泵：最大负压80kPa。
pH计：测量精度士0.02pH单位。5.8
贮液器：通过转接头连接于OasisHLB固相萃取柱上。5.9离心机。
5.10旋转蒸发仪。
具刻度离心管：10mL。
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用。6.2试样保存
牛奶置于4℃冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。7测定步骤
7.1提取
7.1.1牛奶
称取2g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，加入10mL乙腈，于涡旋振荡器振2
GB/T22985—2008
荡提取1min，5000r/min离心5min，上清液过滤到鸡心瓶中，在残渣中加人5mL磷酸盐缓冲溶液（4.8），10mL乙睛，重复以上步骤，合并上清液，于50℃旋转蒸发，至乙腈全部蒸出。加人5mL磷酸盐缓冲溶液，混匀。
7.1.2奶粉
称取0.5g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，加入6mL磷酸盐缓冲溶液（4.8），涡旋混匀，再加人10mL乙睛，于涡旋振荡器振荡提取1min，5000r/min离心5min，上清液过滤到鸡心瓶中，在残渣中加人5mL磷酸盐缓冲溶液，10mL乙腈，重复以上步骤，合并上清液，于50℃旋转蒸发，至乙腈全部蒸出。加人5mL磷酸盐缓冲溶液，混匀。7.2净化
将7.1的样液转移到贮液器中，再用5mL磷酸盐缓冲溶液洗鸡心瓶，洗液合并到贮液器，以约1mL/min的流速全部过HLB固相萃取小柱（4.17），待样液完全流出后，先后以4mL水、4mL25%甲醇水溶液淋洗，抽干，用4mL5%氨水甲醇溶液（4.9）洗脱于10mL具刻度离心管中，洗脱液于50℃，氮气吹至约0.2mL时停止浓缩，用甲醇-甲酸溶液（4.12）定容至1mL，5000r/min离心5min，过0.2μm滤膜，供液相色谱串联质谱分析。7.3空白基质溶液的制备
将取牛奶阴性样品2g，奶粉阴性样品0.5g，按7.1和7.2操作。7.4测定条件
7.4.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C，5μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者；b)
色谱柱温度：30℃；
进样量：15μL；
流动相梯度及流速见表1。
表1液相色谱梯度洗脱条件
时间/min
质谱参考条件
质谱参考条件如下：
流速/（μL/min）
离子化模式：电喷雾正离子模式（ESI+）；b)
质谱扫描方式：多反应监测（MRM)；鞘气压力：104kPa
辅助气压力：138kPa；
正离子模式电喷雾电压（IS)：4000V；毛细管温度：320℃；
源内诱导解离电压：10V；
Q1，Q3分辨率：Q1为0.4，Q3为0.7；碰撞气：高纯氩气；
碰撞气压力：0.2Pa；
0.1%乙酸水溶液/%
甲醇/%
GB/T22985-2008
k）其他质谱参数及7种喹诺酮的CAS号、保留时间见表2。表2七种喹诺酮类药物保留时间、CAS号、定性离子对、定量离子对和裂解能量化合物中文名称化合物英文名称恩诺沙星
达氟沙星
环丙沙星
沙拉沙星
奥比沙星
二氟沙星
麻保沙星
enrofloxacin
danofloxacin
ciprofloxacin
sarafloxacin
orbifloxacin
difloxacin
marbofloxacin
保留时间/
7.4.3液相色谱-串联质谱测定
7.4.3.1定性测定
CAS号
93106-60-6
119478-55-6
93107-08-5
98105-99-8
113617-63-3
124858-35-1
115550-35-1
定性离子对
360.10/315.97
360.10/244.86
358.14/339.83
358.14/313.80
332.30/288.14
332.30/244.88
386.11/341.77
386.11/298.83
396.05/352.01
396.05/394.98
400.12/355.71
400.12/298.85
363.15/319.91
363.15/344.95www.bzxz.net
定量离子对
360.14/316.08
358.14/340.00
332.30/288.14
386.10/341.77
396.05/352.01
400.12/355.71
363.15/319.91
裂解能量/
每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与混合基质标准校准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度K
允许最大偏差
7.4.3.2定量测定
20
在仪器最佳工作条件下，对混合基质标准校准溶液进样，以峰面积为纵坐标，混合基质校准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。标准品多反应监测色谱图参见附录A中图A.1。7.5平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6空白试验
除不称取样品外，均按上述步骤进行。7.7回收率试验
吸取适量混合标准工作溶液，用空白基质溶液（7.3）稀释成所需浓度的标准校准溶液。阴性样品中添加标准溶液，按7.1和7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。样品添加回收率实验数据参见附录B中的表B.1。
8结果计算
试样中每种喹诺酮残留量按式（1)计算：式中：
X=c×100
试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；GB/T22985—2008
·（1)
从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）：样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。i表示第种喹诺酮，计算结果应扣除空白值。精密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（r），牛奶和奶粉中七种喹诺酮的添加浓度范围及重复性方程见表4、表5。表4牛奶中七种喹诺酮的添加浓度范围及重复性和再现性方程化合物名称
恩诺沙星
达氟沙星
环丙沙星
沙拉沙星
奥比沙星
二氟沙星
麻保沙星
化合物名称
恩诺沙星
达氟沙星
环丙沙星
沙拉沙星
奥比沙星
二氟沙星
麻保沙星
添加浓度范围
重复性限r
r=0.1313m-0.0985
r=0.0942m-0.0351
r=0.0737m+0.0168
r=0.0783m-0.0281
r=0.0690m-0.0087
r=0.0905m-0.0343
lgr=1.0992lgm1.0940
单位为微克每千克
再现性限R
R=0.2018m—0.150 0
IgR=1.1637lgm—0.9122
R=0.1221m+0.1099
R=0.1240m+0.0584
IgR=1.0398lgm—0.8377
R=0.1710m-0.0612
IgR=1.0162lgm-0.8046
奶粉中七种喹诺酮的添加浓度范围及重复性和再现性方程添加浓度范围
重复性限r
lgr=0.9319lgm-0.9356
Igr=1.0358lgm-1.0438
lgr=0.7928lgm-0.8237
r=0.0746m+0.1785
r=0.0712m+0.0610
lg r=0. 940 1 lg m0. 908 4
lgr=0.9285lgm-0.8998
单位为微克每千克
再现性限R
lgR-1.0695lgm-0.9456
R=0.1782m-0.0346
lgR=0.9275lgm-0.7228
lgR=0.8883lgm—0.6491
R=0.1109m+0.2602
lgR=0.9051lgm-0.6383
IgR=0.8448lgm—0.5742
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R)牛奶和奶粉中七种喹诺酮的添加浓度范围及再现性方程见表4、表5。15
GB/T22985--2008
附录A
（资料性附录）
标准物质多反应监测（MRM）色谱图七种喹诺酮标准物质多反应监测（MRM)色谱图，见图A.1。RT:4.00-9.00
lepunqv
恩诺沙星
360.10/315.97
恩诺沙星
360.10/244.86
达氟沙星
358.14/339.83
达氟沙星
358.14/313.80
环丙沙星
332.30/288.14
环丙沙星
332.30/244.88
沙拉沙星
386.11/341.77
注：图中前面的为定量色谱图，后面的为定性色谱图。RT:4.009.00
奥比沙星
396.05/352.01
奥比沙星
396.05/394.98
二氟沙星
400.12/355.71
二氯沙星
400.12/298.85
麻保沙星
363.15/319.91
麻保沙星
363.15/344.95
沙拉沙星
386.11/298.83
图A.1七种喹诺酮标准物质多反应监测（MRM)色谱图6
附录B
（资料性附录）
回收率
七种喹诺酮添加浓度及其回收率范围的试验数据，见表B.1。表B.1七种喹诺酮添加浓度及其回收率范围的试验数据化合物名称
麻保沙星
环丙沙星
达氟沙星
恩诺沙星
奥比沙星
沙拉沙星
二氟沙星
添加浓度/（μg/kg）
回收率范围/%
80.8~108.0
86.6~100.6
77.3~95.0
81.2~92.0
76.8~90.1
73.2~92.6
73.8~100.2
79.1~92.3
87.4~109.4
84.0~97.6
77.0~102.1
78.5~92.1
85.9~102.0
80.8~101.1
79.4~92.2
83.9105.0
77.2~98.2
79.7~93.6
72.1~97.1
78.2~95.5
84.6103.7
84.5~93.8
88.9108.1
85.9~101.3
84.4~94.6
GB/T22985—2008
添加浓度/(μg/kg）
回收率范围/%
76.0~101.2
86.9~101.5
78.8~96.0
83.8~93.4
89.0~100.3
75.2~95.3
76.0~98.6
82.5~94.6
70.4~101.3
81.6~90.7
74.6~93.9
81.8~94.0
75.2~93.8
77.1~100.1
78.6~101.5
81.8~92.7
80.9~101.7
82.4~100.5
77.2~100.2
79.2~90.4
78.6~100.9
81.1~94.8
77.1~97.8
80.5~94.0
82.3~96.0
84.1~96.1
81.3~108.0
80.9~92.2
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