本标准规定了牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量液相色谱-紫外检测测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。 GB/T 22990-2008 牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 GB/T22990-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22990—2008
牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定
液相色谱-紫外检测法
Determination of oxytetracycline,tetracycline,chlortetracyclinedoxycycline residues in milk and milk powderHPLC-UVmethod
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
品秋秤
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录本标准出中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T22990—2008
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：郭春海、窦彩云、陈瑞春、马育松、艾连峰、吕红英、贾海涛、姚春毅、庞国芳。http：//foodm
1范围
牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定
液相色谱-紫外检测法
GB/T22990—2008
本标准规定了牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量液相色谱-紫外检测测定方法。
本标准适用于牛奶和奶粉中土素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。本标准的方法检出限：牛奶中土霉素、四环素为5μg/kg、金霉素、强力霉素为10μg/kg。奶粉中土霉素、四环素为25ug/kg、金霉素、强力霉素为50μg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准，GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义（GB/T6379.12004,ISO5725-1:1991,IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.22004，ISO5725-2：1994，IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T66822008，ISO3696：1987，MOD）3原理
用O.1mol/LNazEDTA-Mcllvainc缓冲溶液提取试样中四环素族抗生素残留，OasisHLB或相当的固相萃取柱和羧酸型阳离子交换柱净化，液相色谱仪测定，外标法定量。4
试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2乙睛：色谱纯。
磷酸氢二钠(NaHPO·12H,O)。
4.4柠檬酸(CHgO,·Hz0)
4.5乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2H,O)。4.6草酸CH,O2H.O),
4.70.2mol/L磷酸氢二钠溶液：称取71.63g磷酸氢二钠（4.3)，用水溶解，定容至1000mL。4.80.1mol/L柠檬酸溶液：称取21.04g柠檬酸（4.4），用水溶解，定容至1000mL4.9Mcllvaine缓冲溶液：将625mL0.2mol/L.磷酸氢二钠溶液（4.7）与1000mL0.1mol/l.柠檬酸溶液（4.8)混合，必要时用NaOH或HCI调pH=4.0士0.05。4.100.1mol/l.NazEDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取60.50g乙二胺四乙酸二钠（4.5）放入1625mLMcllvaine缓冲溶液（4.9）中，使其溶解摇钢GB/T22990—2008
4.110.C11ol/L草酸溶液：称取1.26g草酸（4.6），用水溶解，定容至1000mL，4.12甲醇-水（1+19）：量取5mL甲醇（4.1)与95mL水混勺。4.130.01mol/L草酸-乙睛溶液（1+1)：量取50ml.草酸溶液（4.11）与50mL乙睛（4.2）混。4.14土霉素（oxytetracycline，CAS：2058-46-0）、四环素（tetracycline，CAS：64-755）金需素（chlortetracycline，CAS：64-72-2），强力需素（doxycycline，CAS：24390-14-5）标准物质：纯度人于等于96%。4.150.1mg/mL土霉素、四环素、金素、强力霉素标准储备溶液：准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质（4.14），分别用中醇配成0.1mg/mL的标准储备液。储备液于一20℃保存。
4.16土幕素、四环素、金霉素、强力案素混合标准工作溶液：根据需要用流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备液(4.15)确释成所需浓度的混合标准工作溶液，储存于冰箱中，每周配制。4.17OasisHI.B固相苯取材
或相当者：500mg，6ml.。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理，保持杜体湿润。
4.18羧酸型阳离子交
5仪器
5.1液相色谱仪：酒
5.2分析天平：感
涡旋振荡器
5.4冷冻离心机
5.5固相萃取装
5.6真空泵。
mg6mL。使用前用5ml.甲醇预处理，保持柱体湿润。六禁外检测器
桂大于5000寸
氮气吹干仪
5.8pH计：测量精度
刻度样品管！10
试样的制备与保
6.1试样的制备
L精度为ol
将牛奶从冰箱中最
6.2试样保存
置至室温，摇匀，备用
牛奶置于0℃~4℃冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存，7测定步骤
7.1提取
牛奶试样称取10g（精确到0.0lg），置于50mL具塞塑料离心管中。奶粉试样称取2g（精确到0.0lg），置于50mL具塞塑料离心管中。向试样中加人20mL0.1ol/LNaFDTA-Mcllvaine缓冲溶液（4.10），于涡旋振荡器上混合2min，于10℃，5000/min离心10min，E清液过滤至另一离心管中。残渣中再加人20mL缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液，7.2净化
将上清液（7.1)通过处理好的OasisHLB柱（4.17），待上清液完全流出后，用5mL甲醇-水（4.12）淋洗，弃去全部流出液。减压抽干5min，最后用5mL甲醇（4.1）洗脱，收集洗脱液于10mL样品管中。1）OasisHI.B固相举取杜是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他产品其有相同的效果，则可使用这些等效产品。GB/T 22990—2008
将收集的洗脱液通过羧酸型阳离子交换柱（4.18），待洗脱液全部流出后，用5mL甲醇（4.1)洗柱，减压抽干，用4mL0.01mo1/L草酸-乙睛溶液（4.13）洗脱，收集洗脱液于10ml.样品管中，45℃氮气吹至1.5ml左右，流动相定容至2mL，供液相色谱-紫外检测器测定。7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Kromasil100-5Cia，5μm，150mm×4.6mm(内径）或相当者：流动相：0.01mo1/L草酸溶液-乙晴-甲醇（77+18+5)；流速：1.0mL/min;
柱温：40℃；
检测波长：350
进样量：60Ml
液相色谱测定
维活液4.16）分别进样，以浓片将混合标准工作
准工作曲线对样品排行定量，样晶溶液中十霉素线性范围内。在
谱条件下
3.73 min.8.27
min利
中的图A.1。
7.4平行试验
按以上步与
7.5空白试验
-试样进行
为横坐标，峰面积为纵坐标，会制标准工作曲线，用标四环素，金露素、强力霉素的响应值均应在仪器测定的金德素，强力案的参考保留时间分别为3.09min、土霉素四环素
四环素、金霉素、强力霍素标准物质液相色谱图参见附录A土霉素
试验测
外，按以上步骤同时完成空百试验。除不称取试
7.6回收率试验
向阴性试样中加标准溶液，均按上述步骤操作，测是后计算试式样中添加的回收率。添加浓度及回收率范围参见附的表B.
8结果计算
被测物残留量的
式（D算：
式中：
X, -G: X
试样中被测维分残留量，单位为微克每于克（ug/kg）；从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ig/mL）)；样品溶液定容休积，单位为毫升（mL）样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g)。计算结果应扒除空白值。
9精密度
9.1一般规定
（1）
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，牛奶和奶粉中十需素、3
http:
GB/T22990—2008
四环素、金霉素、强力霉素添加浓度范围及重复性方程见表1和表2。表1牛奶中四环素族抗生素添加浓度范围及重复性和再现性方程化合物名称
土霉素
四环素
金霉素
强力霉素
添加浓度范围
10~-100
10~100
注：㎡为两次测定结果的算术平均值重复性限？
lg r=0.881 lg m-0.812
Ig r-1. 06 lg m-1. 00
g r=1. 08 lg m1. 15
1g r0. 963 lg m0. 903
表2奶粉中四环素族抗生素添加浓度范围及重复性和再现性方程化合物名称
土霉素
四环素
金霉素
强力霉素
添加浓度范围
25~250
50~~500
注：m为两次测定结果的算术平均值重复性限T
lgr=0.872lgm-0.791
lg r0. 996 lg m-1. 07
lg r=0. 997 lg m-1. 12
lg r=0. 817 lg m-0. 738
单位为微克每干克
再现性限R
IgR-0.89slgm-0.574
lgR=1.00lgm-0.612
Ig R-C. 819 lg m-0. 430
lg R-0. 838 lg m0. 465
单位为微克每千克
再现性限R
Ig R=0. 834 lg m0. 500
lgR=0.877lgm-0.542
Ig R=1. 12 lg m-1. 04
Ig R=0. 860 Ig m-0. 464
如果差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定9.3再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的添加浓度范围及再现性方程见表1和表2。品秋伴网+n
附录A
（资料性附录）
标准物质液相色谱图
土霉素、四环素、金霉素、强力带素标准物质液相色谱图，见图Λ.1。351
四环素
土莓素
金搏素bZxz.net
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强力霉素
图A.1土需素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图http：/
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附录B
（资料性附录）
回收率
本方法中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素添加浓度及其回收率范国试验数据，见表B.1。表B.1土霉素、四环素、金霉素、强力霉素添加浓度及其回收率范围试验数据化合物名称
土霉素
四环素
金霉素
强力霉素
添加浓度/（μg/kg）
品业伴区httr
回收率范围/%
71.3~-87.6
81.2-~94.6
77.0~98.4
80.1~-93.8
63.7--74.3
71.3~84.6
70.2~80.3
70.0~~86.3
71.7~85.7
70.6~88.3
72.5~89.9
80.3~90.9
71.1~85.7
70.8~~90.5
74.0~~88.5
82.1~94.8
添加浓度/(μg/kg)
回收率/%
71.9~98.7
76.5--90.0
80.5~95.1
81.4~99.2
71,9~84.8
70.3~89.5
80.2~93.6
81.8~92.9
71,5--84.3
81.4-~90.8
80.5~92.9
82.8--90.7
72.6-~93.6
80.2~89.1
82.8~94.5
81.4-~90.7
GB/T 22990-2008
打口期：2009车6月24日
合品纯伴网htn：
中华人民共和国
国家标准
牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定
液相色谱-紫外检测法
GB/T 229902008
中国标准出版社出版发行
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开本880X×12301/16印张0.75学数13千字2009年4月第一版2009年4月第一次印刷*
书号：155066·1-36836定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
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