本标准规定了食品中T-2毒素含量的免疫亲和层析净化高效液相色谱测定方法。本标准适用于粮食和粮食制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中T-2毒素含量的测定。 GB/T 23501-2009 食品中T-2毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 GB/T23501-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T 235012009
食品中T-2毒素的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法Determination of T-2 toxin in food-High performanceliguid chronatographic mcthod with immunoaffinity column clean-up2009-04-08 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
中华人民共科国
国家标雅
食品中 T-7 毒素的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法CB/T 23501-2009
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本标准由全国食品T业标准化技术委员会食品通用检测技术分技术委员会（SAC/TC61/SC8）归，
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食品中 T-2 毒素的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法GB/T 23501—2009
本标准舰定了食品中工2毒素含量的免疫亲和层析净化高效液相色谱测定片法：本标准适用于粮食利粮食制品酒类、酱泄、酷、酱改酱制品中T-2毒索含载的测定，本标准的方法检出限：粮食和粮食制品的检出限为10 g/kg，类的检出限为51g/kg：酱油、群、酱及将制品的检出限为5g/kg，
？规范性引用文件
下列文件中的条款通过标准的引用而成为小标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内窄)载修订版均不适用于本标准，然叫，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不准口期的引用文件，其最新版本适用下本标准GB/T6582分析实验室用水规格利试验方祛（GB/T6682-2008.IS03695：1987,M0D）3方法提要
所提取液提收试样中的[-2毒素，经免疫亲和柱净化、1-葱睛衍生化后，用高效液相色落炭光检测器测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外所用试剂均为分析纯，水为符合GI3/1'5682现定的-级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.？乙：色谱纯。
4.3提瑕液：甲醇「水（8020）
4.44-二甲基氢基吡啶(I)MAP)：0.325g/L°称收0.0325g4-二甲基氨基吡啶，用甲苯游解并定客至100mL
4.51-葱睛（1-an1hroylmi1rile:,1-AN):0.3 g/I.。称取[.030 g1-点睛,用甲苯溶解并定荠至100 m].。4.612带素标品：纯度98%。
4.7T-2 屯素标准储备液:滑确称取定量的 T-2 毒素标准品,用乙睛溶解,配成 0. 1 mg/mL的标准谢备液，在·20℃避光保存，可使用3个月。4,8T-2毒素标准1.作液:根据侦用带要，难确吸取定量的 T-2 毒素标准储备液，用乙稀释,分别配成相当于5 g/inL，10 ng/nl.、50 ng/m、1c0 ng/mL、200ng/ml.的标准作液，4\C保存，川使用7d.
4.9T2毒案免疫亲和钳。
4.10玻璃纤维滤纸：直径！1tu,孔轻1.5μm,无荧光特性，5仪器和设备
5.1天平：感量c.001 g。
5.2高效液相他谱仪：瓶有荧光检测器。GB/T 23501—2009
5.3高速万能粉碎机：转速10000r/min。5.4均质器：转速大于【0000r/min5.5涡旋混介器。
5. 6玻璃注射器:10 ml.s
5.7氮气吹干仪，
5.8试验筛：1mm孔径，
5.9空气压力泵。bzxZ.net
5.10超声波发生器：功率人于180W6分析步骤
6.1试样的制备与提取
6.1，1粮食和粮食制品：将样品研磨，硬质的粮食等用高速能粉碎机磨细并通过诚验筛（5.8），不要魔成粉来。称取25g（精确到0.01g）磨碎的试样于容量瓶中.用提取液（4.3)定容至1(20.01ml.，混匀，转移至均质杯中，高速质2tnin。定量滤纸过滤，移取10.0nL滤液于50 mL穿量瓶中.水定容至刻度，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清：收集滤液A于十净的容器中。6.1.2酒类：玻脱气酒类试样（含二氧化碳的酒类样品使用前先置于4C冰箱冷藏30min，过滤或超声脱气)或其他不含二氧化磁的酒类试样20g精确到0.0l)于50ml.容量瓶巾，用中醇定穿至刻度，混匀，定量滤纸过滤，移取10.Cml滤液了50ml.容量瓶巾，加水定容至刻度，混匀，用玻璃纤维滤过滤滤液澄清，收集感液B于净的穿器巾。6. 1. 3酱油,醋,酱及酱制品:称取 25 g(精确到0. 01 g)混勾的试样,甲醇定容至 50.() mI.,超声提取10nin，定量滤纸过滤，移取10.n滤液于50ml.量瓶中.加水定容至刻度，混勺，用玻璃纤维滤纸过滤全滤液澄清，收集滤液（于F净的容器中，6.2净化
将免疫亲和柱迮接于玻璃注射器（5.6）下，准确移取6.1中的滤液A或B或10.0ml.,注入玻璃注射器中。将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节压力，使溶液以约「滴/s的流速通过免疫亲和柱，直至空气进人亲和科中，再用10mL水淋洗免疫亲和柱，流速约为1滴/s-~2满/s，直至空气进人亲利柱中，弃去全部流山，抽小柱。6.3洗脱
准确加人1.0mI中洗聪，流速约为1滴/s，收集全部洗脱液I）于干净的坡璃试管中。6.4衍生
6.4.1T-2毒素标准工作液的衔牛：取不同浓度的T2毒素标准工作液各1mL，作50℃用氮气吹干，加人50 μ1.1-—甲基氨吡啶(IMAP)落液(4.4)和50μ1.1-点腈(i-AN)溶液(4.5),在涡旋混合器1混勺1min，5cC反应15nin，在冰水中冷却10min后取出，50氮气吹卡，用1.0ml流动相(6.5>溶解,IIPLC 测定
6.4.2样品的衍：将洗脱澈D在50%下用氮气吹干，按6.4.1步骤进行，6.5高效液相色谱参考条件
）色谱柱：C，m46或租当者
流动相：乙腈水（75-125）；
流速：l.0mL/min
d)柱温:35 C;
）逃样鼠：20 l；
检测被长：激发波长38lnm，发别波长470)nmF
6.6定量测定
GB/T23501--2009
以T-2毒育标准作溶液度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对试样进行定量，标准工作溶液和试样液中T-2毒素的响应值均应在仪器检测线性范围内。在上述色谱条件下，T2毒素标雄品色谱图参见图A.1，6.7空白试验
除不加试样外，空白试验应与测定平行逃行,并采用相同的分析步骤。6.8平行试验
按以上步骤，对同--战样进行平行试验测定结果计算
试样中 T-2毒素的含量按式(1)计算：X:(G. -X1000 ×J
m × 1 000
式中·
试样中[-2毒素的含量，单位为微克征下克（ug/kg）；试样溶液中T-2 革素的浓度,单位为纳克年亳升(ng/mT.);空白试样溶液巾T-2毒素的浓度，单位为纳克何毫升（ng/inL)；Ce
衍生化后甲酵定容体积，单位为毫升（mL）；试样的质量，单位为克（)：
蒂释倍数
检测结果以两次测定值的算术平均值表示，计算结果表示到小数点后1位。8回收率
添加浓度在10ug/kg~100μg/kg时问收率在80%~-110%之间，9重复性
作重复性条件下，获得的“I-2毒索的两次独立测试结果的绝对差值不人于其算术平均值的10%：GB/T 23501—2009
GB/T 23501-2009
期：2009年
附录A
（资料性附录）
T-2声素标准品的液相色谱图
图 A.1T-2毒素标准品的液相色谱图合品伙伴网httn
发射波长：470 mrm
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书号:155056 ·136928
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