本标准规定了食品中赭曲霉毒素Ａ 含量的免疫亲和层析净化高效液相色谱测定方法。本标准适用于粮食和粮食制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中赭曲霉毒素Ａ 含量的测定。 GB/T 23502-2009 食品中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 GB/T23502-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

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中华人民H和国国家标准
GB/T 23502-—2009
食品中赭曲霉毒素A的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法Deternination of ochratoxin A in food-Iigh performanceliquid chromatographic method with immunoaffinity column clean-up2009-04-08发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
中华人民共
国家标准
食品中赭曲霉毒素A的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法GB/T 23502—2009
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食品中赭典毒素A的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法GB/T 23502—2009
本标准规定了食品中储曲毒毒素A含量的免疫亲和层折净化高效液相色谱测定方法。本标准适用→粮食和粮食制品、洒类、酱油、醋、酱及酱制品巾赭曲霉毒素A含量的測定。本标准的方法检出限：粮食相粮食制品的检出限为1.0/kg，酒类的检出限为0.1/kg，油、醋、酱及制品的检出限为0.5ug/kg：2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标的条款，凡是注H期的引用文件,其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用下本标雅，然而，鼓励根据本标准达成协议的方研究是否川使用这些义件的最新版。州是不注期的引用文件，其最新版本适用于标滩。G1B/16682分析实验室用水规格和试验方法（GB/166822008.1S03696：1987，MOD)3方法提要
用提取液提取试样中的粘曲幕毒素A，经免疫利柱净化后，用高效液相色谱荧光检测器测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说外所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯，
4.2乙肺，色谱纯。
4.3冰乙酸：色谱纯。
4.4提取1:甲醇：水(8020)。
4.5提取液2:称瑕 150 多氯化钠,20 g碳酸氢钠溶丁约 950 ml. 水中,加水定容至 1 L,4.6冲洗液：称圾25g氯化钠、5g碳酸氢钠溶丁约95Uml.水中，加水定容至1L。4.7真离毒素清洗缓剂液：称取2.0岛氯化钠、.品碳酸氢溶丁水巾，.1m1址温-20，用水稀释牟1L
4.8曲霉每素索A标准品：纯度298%。4.9赭曲霉每素 A 标准储备液:准确称取定量的曲霉毒素 A标准品,用甲碑一乙腈(1十1)溶解，配成0.1/mL.的标推储备液，在一20C保存，可使用3个月4.10赭曲霉导素A标谁工作液：根据便用需要.准硫吸取定量的黏曲霉素A储备液，用流动相稀释.分别配成相当1g/ml、5ng/ml..10g/ml、20 g/ml50ng/inL的标推下作液，4℃保存，叫使用7d.
4.11赫非爵素A免疫亲和机。
4.12玻璃纤维滤纸：直径11 cm.引径1.5m.无茨光特性、5仪器和设备
5.1天平：感量0.001g
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5.2高效液相色谱仪：配有荧光检测器，5.3均质器.转速大了10 000 r/min，5.4高速万能粉碎机：转速1C(00/tnin。5.5玻璃注射器：10mL。
5.6试验筛.1 mm孔径。
5.7空气0力泵。免费标准bzxz.net
5.8超声波发生器：功率大于180W。6分析步骤
6.1试样的制备与提取
6.1.1粮食和粮食制品：将样品研磨，质的粮食等用高速万能粉碎机磨细并通过试验筛（5.6），不要磨成粉术。称取20 g(精确到 0. C1 g)磨碎的试样于100 ml.容鼠瓶中,加人5 g氯化钠,用提取液 1(4.4定容至刻度，混.转移至哟质杯中，高速搅拌提取2min。是量撼纸过滤，移取10,0 mI.滤下50 mL容量瓶中水定容至刻度，混匀，用坡离纤维滤纸过滤至滤液湾清，收集滤滋A于「净的容器中。
6.1.2酒类：取脱气酒类试样（含一氙化碳的酒类样品使用前光置了4冰箱冷藏30min，过滤或超卢悦气)或其他不含二氧化碳的湾类试样20品（精确到0.01），置于25m容量瓶中，加提敢滋24.5）定容全刻度，混勾.用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液B于干净的容器巾，6.1.3酱油、醋、酱及酱制品：称取25g（精确到0.01g）混勺的试样、用提取液1(4.4)定容至50.0mL，超声提取5 rmin定量滤纸过滤：移取 1C,( mL 滤液下50 ml.容尿瓶中,加水定容至刻度,混勾,用玻璃纤维滤纸过滤至滤澈澄消，收集滤液（下净的容器中。6.？净化
6.2.1粮和粮食制品:将免疫亲和柱连接于玻璃射器(5.5)下,雅确移取 6. 1 中滤液 A 10.0 mL,注人玻璃注射器中。将空气乐,力泵与玻璃活射器和连接，调节压力·使溶液以约1滴/：的流速通过免疫系和杜，直至学气进入亲和柱中，依饮10 mL真菌葬系清洗缀冲液（4.7）、10 II.水凝洗免疫亲利柱：流速约为1漓/s-~2滴/s,弃去金部流出液，抽干小柱、6.2.2酒类：将免疫亲和托连接上玻璃注射器(5.5)下，推确移取 6、1中滤被 B10.0 ml.,注人玻璃注射器中。将空气压力泵与坡璃注射器相连接，谢节压力，使落液以约「滴/s的流速通过免疫亲和柱，直益空气进人亲和柱f1，依次用[0ml.冲洗液（4.6）、10 ml.水淋洗免疫亲和柱，流速约为1滴/~2滴/s,奔去全部流出液，拙于小柱。6. 2.3酱油,醋、酱及酱制品:将免疫亲和杆连接于玻璃注射器(5,5)下，准确移取 6,1 中滤液 C10.0mL注人玻璃注射器巾，将牢气力录与玻璃注射器树连接，谢节压力-使液以约1滴/s的流速道过免疫亲和柱，直率空气进人亲和栏中，依次而10位L真菌毒素清洗缀种液（4.7），10加L水淋洗免疫亲和杜.流速约为1滴/s~2滴/s，弃去全部流山液,抽下小柱。6.3洗脱
准确加人【.IIL甲醇洗脱，流速约为「滴/s,收集全部洗脱液于下净的玻璃试管中，用甲醇定容至1ml，供HPLC测定，
6.4高效液相色谱参考条件
a）色谱柱:C柱.5 m,150 nri×4.6 mm或当者;b）流动相：乙脂+水+冰乙酸(99—99+2)；c）流递：0.9ml/min;
d）柱温:35 ℃；
进样片：10μ~10cl
）检测波长：激发波长333nm，发射波长177nm6.5定虽测定
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以猪山需毒素A标准工作溶液浓度为横坐标，以峰而积积分值为纵尘标，绘制标雅工作删线，用标准1作收线对试样进行定量，标准工作溶液和试样溶液中薪霉毒素A的响应值均应在仪器检测线性范包内，在「述色谱条件下，黏曲露素A标摊品色谱图参见图A.1.6.6空白试验
除不加试样外，空户试验应与测定平行进行，并采用相同的分析步骤。6.7平行试验
按以1步骤，对间一试样进行平行试验测定。」结果计算
试样中猪曲霉毒素A的含鼠按式（1)计算：x - (cxyxl00 x f
m X 1 000
试样中楷仙猎萨素A的含最，单位为微克每「克（ug/k）：c—试样溶波中赭曲霉毒素 的浓度，单位为纳克斑毫升(g/mL);tc--空白试样溶液中帕霉毒素A的浓度，单位为纳克短毫升(ng/ml)；V
甲醇洗脱液体积.单位为毫升(mL)；m一试群的质量，单位为克（g)；}稀释倍数。
检测结果以两次测定值的算术平均值表示。计算结果表示到小数点后「位。8回收率
添加浓度在1. 0 μg/kg~10.0 μg/kg时，回收率在70%~-100%之间9重复性
在重复性条件下，获得的曲霉毒系人的两次独立测试结果的绝对差值不大丁其算术乎均值的10%，
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师期：200946月
附录A
(资料性附录）
藉曲霉毒素A标准品的液相色谱图2.50
图A、1
赭曲弯毒素 A标准品液相色谱图http：
zuny:foodm
发鼓长：477n
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书孚:155366：1-36949
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