本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮含量的免疫亲和层析净化高效液相色谱测定方法。本标准适用于粮食和粮食制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中玉米赤霉烯酮含量的测定。 GB/T 23504-2009 食品中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 GB/T23504-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

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中华人民共和国国家标准
GB/T 23504—2009
食品中玉米赤霉烯酮的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法Determination of zearalenone in foodHigh perforinanceliquid chromatographic method with immunoaffinity column clean-up2009-04-08 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
中华人民共
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食品中玉米赤霉烯酮的测定
免疫亲和层析净化高效滋相色谱法GR/T 235042009
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21109 午 4 月第一版
2109年4月第一次印刷
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本标雅出全例食品工业标雅化技术委员会(SAC/TC64)提出GB/T 23504—2009
本标准用全国食品1.业标准化技术委员会食品通用检测技术分技术委员会（SAC/TC64/SC8）本标准起草单位：育岛市产品质常监督检验所、中华人民共和国山东出人境检验检接局、中检维康技术有限公司、青岛啤酒股份有限公司，本标推十要起草人：张辉珍、满建军、吕、李宏伟、字惠颖、瞿工型，主雄。1
全品k伴网httn：//wu：foodmatene1范围
食品中玉米赤霉烯酮的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法GR/T 23504—2009
本标雅规定了食品巾玉米赤藓烯酮含基的免疫亲和层析净化高数液相色谱测定厅法本标雅适册工粮食和粮食制品，酒类酱油，醋、酱及酱制品中乎米亦舞轻丽含量的测定本标准的方法检出限：粮食利粮食制品的检出限为201/kg：酒类的检出限为20g/kg，酱油醋、酱及替制品的检山限为50μg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用义件.其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据木标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注期的引用文件，其最新版本适用士本标准。(B/T6682分析实验室用水规格和试验方法（(FB/T6682-20081SO3695:1987.MOL)）3方法提要
用提取液提取试样中的下米亦露烯酮，经免疫亲和柱净化后，用高效液相色谱荧光检测器测定，列标法定量，
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯水为符个(:B/T5682规定的--级水。4.1中醇：色谱纯。
4.2乙腩：色谱纯。
4.3提液:7腈←水(911),
4. 4 P清洗缓冲液.称收 8. 0 岛 氯化钠、I. 2 磷酸氢二钠、0. 2 月磷酸二氢铆,0. 2 氯化钾,用990nL水将上述试剂溶解，然后用浓盐腋调节pII笔7.0,再用水定容至1L，4.5卡米赤惩烯酮标雅品：纯度98%。4.6下米赤爵烯酮标推催备液：滑确称取一定量的工米赤霉烯酮标准品，用甲醇17肺（I11)溶解、配成 0.1 mg/mL的标准催备液，在一20 C保存,可使用3个月。4.7玉米赤得烯酮标谁上作液：根据使用需要，谁确吸收-定最的求米赤烯酮储备液，用流动相稀释，分剂配成相当于10ng/tml..50g/ml、100ng/mL、2001g/1nL、500ng/mL的标推工作液，4C保存,可使用7d。
4.8玉米亦霉烯酮免疫亲和柱。
4.9玻璃纤维滤纸:直径1 rm,孔径1.5 1n,无炎光特性，5仪器和设备
5.1天平：感量C.001多。
5.2高效液相色谱仪：配有荧光检测器。5.3均质器：转速大于-10000r/min。1
GB/T 23504—2009
5.4高速万能粉机：转速10（005）r/min。5.5玻璃注射器，10ml.。
5.6试验筛：1mm孔径。
5.7空气压方泵，
6分析步骤
6.1试样制备与提取
6.1.1粮食和粮食制品：将样品研腾，硕质的粮食等用高速万能粉碎机磨细并通过试验筛（5. 6),不要磨域粉末，称取i0g(精确到0.0)g)磨碎的试样丁10ml.容量瓶中，加人5g氮化钠，用提取（4.3）定容至刻度，混匀，转移至.均质杯中，高速揽拌提取2zrnil：定量滤纸过滤，移取10.0ml.滤液于50ml容量瓶中，加水定容至刻度，混匀,用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,收集滤凝A下十净的容器中，6.1,2酒类：瑕脱气酒类试样（含二氙化碳的酒类使用前先置于4℃冰箱冷藏30 mil1,过滤或超声脱气)或其他不含一截化碳的酒类试样20g（精确到0.01.)于501T.容量瓶巾，用乙腈定容至刻度，摇勾。移取10.0tu.滤液于0tnl.容量瓶巾，加水定容刻度，混勾，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液逛清，收集滤液B于干净的容器中。
6.1.3酱油、醋、酱及酱制品称取25g（糖确到0.01g)混匀的试样，用乙定容至100.0mI,超声提取 2 min,定量滤纸过滤,移取 10. 0 mL滤液于 50 mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀,用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液℃于十净的容器中6.2净化
将免疫亲和柱连接于玻璃注射器(5.5)下,雅确移取6.1中的滤液A或B或 C10.C mL,注人玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节压力，使溶液以约1滴/：的流速通过免疫亲和杜，直空气进入亲和托巾，依次用10 r.PBS清洗缓孙液(1.1)和10 mI.水淋洗免疫亲和柱,流速约为1滴/s·2滴，白至空气逝人亲和柱中，弃去全部流出液，抽干小。6,3洗脱
准确加人1.0ml.\醇洗脱，流速约为1滴/s,收集全部洗脱液于于净的玻璃试管中,用甲醇定容至 1 mL,HPLC测定
6.4高效液相色谱参考条件
a）色谱±:C柱,5 μm:150 mm×4.6 mm或相当名;流动相：乙.情1水1甲醇（46！46}8)；b)
流速：1.0mL/min；
柱温：35
逃样尾:20 μ～100 μ:
D检测波长：激发波长274am，发射波长410nm。6.5定量测定
以卡米赤霖烯酮标推工作溶液浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准工作油线，用标准工作曲线对试样进行定量，标准工作溶液和试样落液中正米赤霉烯酮的响应值均应在仪器检测线性范围内，在上述他谱条件下，玉米亦霉烯酮标准品色谱图参则图A.1。6.6空白试验
除不加试样外,空白试验应与测定平行进行，并采用相固的分析步骤。6.7平行试验
按以「步糜，对同一试样进行平行试验测定。7结果计算
试样巾长采赤需烯酶的含量按式(1)计算：2
戏中：
x(-x1000
m × 1 000
X一一试择中玉米冻霉烯酮的含量，单位为微克每下克（u/kg)：c1试择溶液中下米亦露烯酮的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；Go
空白试样溶液中玉米赤荐烯酮的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml)：--：甲醇洗脱液体积，单位为毫升（nL）m一一试样的质量,单位为克(g);「—一稀释倍数。
检测结果以两次测定值的算术平均值表示。计算结案表示到小数点后【位。8回收率
添加浓度存50/k～200/kg时，回收率在70%~100%之间：9重复性
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在重复性条件下，获得的玉来赤霉烯酮的两欣独测试结果的绝对差值不大丁其算术平均值的10%．
合品伙伴网ht
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4, 0 -
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打即日期：20096月1月
附录A
（资料性附录）
玉米赤霉烯酮标准品的液相色谱图2E0'
图A.1玉米赤需烯酮标准品的液相色谱图http:
发射波长：44nm
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0：1550661-36950
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