本标准规定了肠衣中甲硝唑（简称ＭＮＺ，下同）及其代谢物１?（２?羟乙基）?２?羟甲基?５?硝基咪唑（简称ＭＮＺＯＨ，下同），二甲硝咪唑（简称ＤＭＺ，下同）及其代谢物２?羟甲基?１?甲基?５?硝基咪唑（简称ＨＭＭＮＩ，下同），异丙硝唑（简称ＩＰＺ，下同）及其代谢物２?（２?羟异丙基）?１?甲基?５?硝基咪唑（简称ＩＰＺＯＨ），洛硝哒唑（简称ＲＮＺ，下同）残留量的液相色谱?质谱／质谱测定方法。上述硝基咪唑类药物中英文名称、结构式、ＣＡＳ号和相对分子质量参见附录Ａ。本标准适用于肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定。 GB/T 23406-2009 肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 GB/T23406-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67. 050
中华人民共和国国家标雅
GB/T23406—2009
肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Delcrminalion of residucs of nitroimidazoles and thcir mctabolites in casing-LC-MS/MS meihod
2009-03-28 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局国国家标准化管理委员会
2009-07-01实施
本标准的附录A,附录B.附录C利附录D为资料性附录本标准山中华人民共和国国家质最监督检验检按总局提出并问口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。GB/F 23406—2009
本标准士要起草人：陈惠兰、丁涛、沈崇缸、张晓燕、杨麦签、张冷、蔡宝癌、将原、陶宏镐1
品伙伴区
1范围
肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法GB/T 23406—2009
本标准规定「肠衣中甲销降（简称MN7，下同)及其代谢物-(2-羟乙基)-2-羟甲站-Ii-硝基咪唑（简称MNZOH,下同)，一印硝咪唑（简称IMZ，下间)及其代谢物2-胫甲基-1-甲基5硝基咪唑（简称HMMN1.下间),异丙谱唑（简称TPZ下向)及其代谢物2-（2-羟异丙基)-{-甲基-5·硝基咪唑（简称IPZ)H)，路硝哒唑（简称RN7.下回)残霸量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。1.深硝基咪咯类药物巾英文名称,结构式，AS号和对分于质量参见附求A。本核雅适用丁肠衣中销基咪唑类药物及其代谢物残留民的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款划本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注口期的引用文件其随活所的修改单（不包括动误的内弃或修订版必不适打本标推，然剂，鼓励根据本标推达成协议的各方证究是可使用这些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本适月引本标谁（/T6682分析实输室用水规格和试验方法（G13/T6682：2608.1S）3696：1987，M01)）3方法提要
试样加人相应内标后用艺酸乙缇取硝基咪唑类药物及其代谢物，蒸下提取济液.利用液相色谱中联质谱仪测定，梯度洗脱.内标祛定量。4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为（GI3/T6682规定的-级水。4.1甲醇:HPIC级，
4.2乙酸乙酯，
4.3艺酸铵：HPLC级。
4.4同位素内标:IMZ-D,,IPZOII),HMMNII，纯度98%，4.5MNZ.MNZ0H.IDMZ、HMMNI,1PZ,IPZOH 和 RN7.标准品;纯度38。4.6MVZ,MNZOH、DMZ、HMMN1,1P7.IFZOH 和 RNZ标准储备溶液：1.0 mg/mI.。雅确称取适鼠的 MNZ,MNZOII.DMZ、IIMM>T,IPZ、IFZOH 和 RNZ 标准品(4. 5).川甲醇(4. 1)配成 1. 0 Ing/mL的标准储备液.储备液贮存在4℃冰箱中,可保存6个月。4.7DMZ-I)、IPZ7OHD，和HMMVI-I内标储备溶液：1COμg/mL。称取适量的DMZ-1:、IPZOHD和IIMMNI-D。内标物（4.4),用用醇(4.1)配成100 μg/mL储备液,储备液贮存在 4℃冰箱中。4.8LM7-D、IPZOH-D利HIMM>I-)，内标工作溶液：1μg/mL，取适鼠内标储备被（4.7)用醇(4. 1)稀释成1μg/mL「作溶被-内标上作溶羧在4 ℃保存，4.9MNZ.MNZOHI,DMZ、HMMNI、IPZ、IFZOH利RNZ标准丁作溶液：用甲醇(4.1)分别配成浓度范国为1ng/nL-~50 ng/mL标推工作溶液，其中内标溶液浓度为50 g/nL,现配，4.10甲醇-水(2十8,体积比)：量取20 ml甲醇(1.1)于80 ml.水中，混合均。1
GB/T 23406—2009
5.1波相色谱质谱/质谱仪（比四极杆）：配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感0.01g和0.1mg各一台。5.3旋转蒸发仪或相当者。
5.4涡旋混匀器。
5.5其空录：真空度不低于80 kPa，5.6离心机:转速不低-1 2 ic t/rmir5.7移液器：ml.,200μl.。
5.8离心管：50ml.，只寒。
5.9滤膜：有机相.c.45μm
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
将实验室样品均质粉碎哟匀，分出0.5k名作为试样。制备好的试样鼠了样品袋巾，密封，并做［标记：在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留含最变化。6.？试样的保荐
将试样于冷冻状态下保存
7测定步骤
7.1提取
准确称取:0 多(精确到 0. 01 g)试样,置于50 tuL具塞离心管中,准确加人 3种内标混合溶液(1. 8)s) μl.而l人10 rmL乙酸乙酯(4.2),混合30×,2500r/tuim离心3min取1层乙酸乙酷到50mL玻璃试管中，再加人10mL乙酸乙酯（4.2），重复上述提取步骤，合并提取液，40水举施转蒸发1，醇水(1.10)1.0 ml.定容，过滤到逊样瓶中，供液相色谱-质谱/质谱仪测定7.2测定
7.2.1参考液相色谱条件
a）色谱杜（封端）,3 μm，150 mm×2.0 mm内径)或相当者；b）流动相：甲醇「Z樱敏溶液(5 mmol/L)；）流速:0.2℃ tnL./tnin;
）梯度洗脱程序：参见附录B;
c）柱温:宰温；
[进样量:25 μL。
7.2.2串联质谱条件
参见附录，
7.3液相色谱-串联质谱测定
7.3. 1 定性测定
进行样品测定时，如果检山的质量色谱峰保留时间与标推样品：致，片且在除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对十度与涨度接近的同样条作下得到的标准落液谱图相比，最大允许相对偏差不超过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差准对离子于度
允许的相对偏差
2c%-~ 50%
合品伙伴网
>15%~20%
7.3.2定量测定
GB/T 23406—2009
标准作溶液(4.9)在液和色谱-书联质谱设定条件下分别进样,以标准与内标物峰面积比值为纵坐标，工作辫液浓度（ng/ml.)为横坐标，绘制标准1.作线（1ng/ml.--50ng/ml.），用标准1作曲线对样品进行定，样品溶液中标准的响应值均在仪器测定的线性范固内。其DMZ-T),作：为MNZ,L)M7和MNZOH内标使用；IIMMNIID，作为IIMMNI和RNZ内标使用IPZOII-L，作为IPZ和IPZOH内标使用。在上述色谱条件下，其和应的标准物质和内标离子流色谱图参见附录D，7.4平行试验
按以,[:(7. 1~7.3)步骤,对同一试样进行平行试验测定。7.5空白试验
除不称取试样外,均按1述(7.1·~7.3)步骤进行。8结果计算
结果按式(1)汁算：
式中：
c，-样品中销基咪唑及共代谢物的浓度.单位为微克每于克(/kg)；A.
样品巾硝基咪及其代谢物的面积与相应内标峰蜂面积比值；硝基账哗及其代谢物标准的质量，单位为纳克（ng)；--标准硝基味唑及其代谢物的峰面积与相应内标峰面积比；m-样品质量，单位为克()。
注：让算结果需扣除空白件。
检测低限、回收率范围和精密魔本标雅中 MNZ、DMZ、RNZ、IPZ,HMMN1IPZOH 和 MNZOH测定低限为 1,C Pg/k-肠衣中硝咪唑及其代谢物添加浓度及回收率范围（内标校正)的试验数据（孔一[0)：(1)
添加水乎为1. 0 μg/kMN7.,DMZ、RNZ、IPZ、MNZOH,HMMNI 利 IPZOH 国收率范为 80-113%；
添加水平为2.0\g/kg.MNZ、DMZ、RNz.IPZ、MNZ(HI.IIMMN1和IPZOH同收率范围为79～19%
添水为. 0 /k,MNZ、DMZ、RNZ、IPZ、MN7OH、HMMNI和 IP/OH 间收率范围为 88头103/
在1.0μg/kg、2.0μg/kg和5/kg添加水平l.，相对标准偏差(RSD)为3.7%~7.4%，3
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附录A
（资料性附录）
硝基咪唑类药物及其代谢物中文名称,英文名称,化学结构式,CAS 号和相对分子质量表 A. 1
硝基咪唑类药物及其代谢物中文名称，英文名称、化学结构式.CAS号和相对分子质量中文名称/笼文名称/筛称
甲硝唑
Metnid:ol.
十硝代谢物
Metrenitazole 0H
(MNZOH)
甲码迷
Dm-ridezo..
二甲消基账唑代谢物
Hydraxyectridaxole
路硝哒唑
Ruritlezate
外丙矿唑
Iprosidezole
异内硝唑代谢物
Iptunilezol-OH
(IPZOH)
化学结构式
I'I.cthnh.
相对分「质基
443 481
1812-4:-2
551-93-5
1336 0:0
768.-79 7
-4885-29-1
35175 14 5
时间/min
附录B
(资料性附录）
流动相梯度洗脱程序
流动相梯度洗脱程序
表 Ｒ.1
甲移/%
http:/
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5T:moi/L 7.,酸读溶波/%
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附录C
（资料性附录）
质谱/质谱条件及选择离子参数设定表离源：电喷雾离化电离源(ESI)，止离广监测：扫描力式：选择离了检测（SRM)；雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氢气；喷雾电F：4200V;
加热毛细管温度：350℃免费标准下载网bzxz
表C.1选择离子参数设定表
测定物质
EIMMNI
HMMNI )
母离了
定性离于
(r/2）
控中压
附录D
（资料性附录）
硝基咪唑及其代谢物和内标离子流色谱图n. l
1M7.112-56
DM2. D. 145.> 99
RNZ 20:140
40 HMMN-D3,1612143
1n7. 172.> [28
40 NN20H11AR≥>12:
IP2 170124
J7011186168
[72011-14, 189 [7]
硝基咪唑及其代谢物和内标离子流色谱图图.1
http:
GB/T23406—2009
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