本标准规定了蜂王浆中甲硝唑，二甲硝咪唑及其代谢物２-羟甲基-１-甲基-５-硝基咪唑，异丙硝唑及其代谢物２（２-羟异丙基）-１-甲基-５-硝基咪唑，洛硝哒唑残留量的液相色谱?串联质谱的测定方法。上述硝基咪唑类药物中英文名称、结构式、ＣＡＳ号和相对分子质量参见附录Ａ。本标准适用于蜂王浆中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定。 GB/T 23407-2009 蜂王浆中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 GB/T23407-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T23407—2009
蜂王浆中硝基咪唑类药物及其
代谢物残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of residues of nitroimnidazoles andtheir netabolites in royal jelly--IC-MS/MS melhod2009-03-28发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-07-01实施
本标准的附录 A,附录P、附录 C 和附录 D 为资料性附录,本标推由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口，本标雅起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局GB/T23407—2009
本标准主婆起草人：丁游、吴斌、徐锦忠、张晓燕、张靖、杨安南、郭玲、蒋源、宏锯。T
http://foodmate.ne1范围
蜂王浆中硝基咪唑类药物及其
代谢物残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
GB/T 23407—2009bzxZ.net
本标准规定『蜂王浆中中硝（简称MN7，下同)、二甲硝球唑（简称DMZ，下向)及其代谢物2羟印基1-甲基5硝基咪唑（简称HMMNI，下同）.内销唑（简称IPZ，下间)及H代谢物2-（2-羟异内基）-【-半基-!i-销基咪唾（椅称IPZO)H)，路硝哒咔（简称RNZ，下同)残留量的液相色谱-联质谱的测定方法。上述销基咪唑类药物英文名称结构式CAS号和相对分了质量参见附录A。本标准适闭下蜂主浆中销基咪唑类药物及片代谢物线留量的测定。2规范性引用文件
下到文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用交作，其随质所有的修改单（不包括勘误的内存)或修订版乌不适和上本标准，然而，敲励想据本标雅达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。瓦是不注期的引用文件，H般新版不适用了木标游，GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GJ3/T66822008ISO3695：1587，MOD）3方法提要
试样加入相应内标，所氢氧化钠溶液溶解，乙酸乙酯提取硝基咪哗类药物及其代谢物，问离？杜富集净化.利出液相他谱-串联质谱仪测定，梯度洗脱，内标法定量：4试剂和材料
除非另有说明.所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定哟--级水，4.1甲醇:HFI级，
4.2乙腈。
4.3乙酸乙酯。
4.4Z酸铵：HPLC级。
4.5氢氧化钠溶液：0.251nol/.，4.6酸（85%）)。
4.7氨水(28路)，
4.8离了交换柱(PCX)：60 mg,3 mL,4.9甲酸乙睛溶液：量取适量甲峻（4.6）下适最乙睛（4.2)中，浓度为10%（体积分数）4.10氮水甲醇溶：量取适量氨水(4.7)于适量印醇（4.1)中,浓度为5关(体积分数）。4.11同位素内核：DMZ·D，IPZOHD、HMMNI-D.纯度984. 12MNZ,DMZ、HMMNI,IP7,1FZOH 和 RNZ 标准品：纯度8%,4.13MNZ.DMZ.HM.MNI、IPZ、IPZOH和RNZ标准诺备溶液：1Ig/mL准确称圾适的MNZ、DMZ、HMMNI,IPZ,1PZOH和i RNZ标雅品(4.12）,用甲醇(4,1)配成1.0mg/mI.的标备波,倦备被贮存在4℃冰箱巾，保存6个月：4.14DMZ-I,IPZOH-D,和HMMNI-I),内标储备溶液：I0 μg/IIL，称取适片的LMZ-D、IPZOH-D,和GB/T 23407-2009
HMMVI-D内标物（4.11）.用甲醇（4.1)配成1C0μg/mL储备液，储备液贮存在4冰箱中，可保存6个』。
4.15I>M7-D、IP7.OH-D，和HMMNT-ID内标工作落液：！μg/mL。取适量内标储备液（4.14)用中醇(4.I)帮释成1HB/mL工作溶液，内标工作溶液在4℃保存。4.16MNZ,1PZ、IPZOH.I)MZ、HMMNI和RNZ标准T作溶液：用甲酵-水(2+8，体比)分别配成浓度范围为1ng/mL~1ocng/mI.标雅E作溶液：其中内标落波浓度为50 ng/mL.现配。4.17甲醇-水(2十8,体积比)：量取2L甲醇下80 mL水中，混个均勾。5仪器
5.1液相色谱-质谱/质谱仪(串联四极杆)：配有电喷募离子源。5.2分析人平：感量0.01号和0.1rg各一台。5.3旋转蒸发仪或机当者。
5.4涡能混勾器。
5.5真空录：真空度不低于80kPa5.6离心机：转速不低于2500/tnin，5.7移液器：5ml,200l.
5.8 离心管:50 mL,具基
5.9滤膜：右机析，0.451
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
将王奖栏品缆拌均勾，分出C.kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中,密划，并做［标记。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留含星变化。6.2试样的保存
将试样于冷冻下保存。
7测定步骤
7.1提取
准确称取 5 g(精确到 0.01 g)试样,置子 5C mL具寒离心管中,排确加人 3种内标混合溶波(1.14)50 p1,川入氢氧化钠溶薇（4.5)10 ml.混个15,游解样品。加人10 tnl.乙酸乙酯（1.3）,混合 30 s2 500 I/min离心3 min,取l层乙酸乙到50 ml玻璃试管中,再加人 10 ml.7.酸乙酯(4.3),重复上述提取步，合诈提取液40℃水浴旋转蒸发干,5mL中酸乙晴溶液(4.9)溶解。3mL印醇、3IL水活化固相萃取柱，上栏,3 mI.水洗,抽至近下,3 rmL氨水甲醇溶液（1. 10)洗脱,45 水浴旋转蒸发下：用甲醇水(4.17)1. 0 IuL.定容,过滤到进样瓶中,供液相色谱质谱/质谱仪测定,7.2测定
7.2.1液相色谱条件
色谱柱：C封端），3 μr，150nx2.0 mm（内径)或相当者：a
h）流动相：甲醇十5minul/I.乙酸铵溶液；流速:0.20 mL/inin;
梯度洗脱程序：参见附录B：
柱温：室温；
i）进样量：25I。
7.2.2串联质谱条件
鑫见附录C
7.3液相色谱-质谱测定
7.3.1定性测定
GB/T 23407—-2009
逊行样品测定时，如累检出的质景色谱峰保留时间与标准样品致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性肉的杆对十疫与浓疫接近的同样条件下得到的标准落液谱图相比，最人允许相对偏差不超过表1中规定的范调，则可判断样晶中存在对应的被浏物。表 1定性确证时相对离子丰度的最大充许相对偏差相对离了废
充许的准对偏差
7.3.2定量测定
≥20% ～ 50%
±25号
≥[03 ～20%
上39%
标准1作溶液(4，16)在液相免谱-中联质谱设定条作下分别逊择，以标摊与内标物蜂面积比值为纵坐标：1.作辫波浓度（nx/l)为横坐标，绘制6点标推工作曲线（1g/ml~10ng/ml)，用标推1作瓶绿对样品逊行定量,样品落液中标推的响应值均在仪器测定的线性范围内。其中 1)M7-I作为 MNZ和 J)M%.内标使用;HMMNI-I),作为 HMMNI 和 RNZ内标使用,IPZ(OH-I)，作为 IPZ 和 IPZOII 内标用。在上述色谱条件下，具其相应的标谁物质和内标离子流色谱图参见附录D，7.4平行试验
按以E(7.1--7.3)步檗，对间·-试样进行乎行试验测定。7.5空白试验
除不称取试样外，均按上述(7.1～7.3)步骤进行。8结果计算
结果用负谱数据处机惑按式（1)计算：C
武中：
样品中硝基咪唑及其代谢物的浓度，单位为微克每下克(μg/kg)：样品中硝基咪唑及其代谢物的蜂面积与相应内标峰面积比值，硝基咪唑及其代谢物标雅的质是，单为纳克（I）；A：--标准品中硝基咪唑及其代谢物的峰面积与相应问标峰面积比值；m-样品质员，单位为克(g)。
注：计算结集新托除空白值。
9检测低限、回收率范围和精密度(
本标准中 MNZ、T)MZ、RNZ 和 1PZ 测定低限为 2. 0 μg/kg,HMMNI 和 1PZOH 测定低限s.0 g/kg.
蜂工浆中硝基殊唑及其代谢物添加浓度及回收率范围（内标校正)的试验数据（1一[0)：添加水平为2.0 #g/kg,MNZ、DMZ、RN7. 和 IPZ -均回收率范用为 98%~-100%;添加水平为5.0g/kg，M.NZ、DM7.、RNZ、UPZ、HMMNI利IP/0H平均回收率范围为97%101%：添加水平为1C μg/kg,MNZ,DMZ,RNZ、IIZ,HMMNI和IPZOH 平均回收率范为97~[01%：添加水平为2Cμg/kg，HMMNI和IPZOH均回收率范围为9697%在 2. 0 μg/kg,5. 0 μg/kg、10 μg/kg和 2C p/kg 添加水平-上: 相对标准偏差(RSD)为 3. 2% ~7.2%.
GB/T 23407—2009
附录A
（资料性附录）
硝基咪唑类药物及其代谢物中英文名称,化学结构式、CAS号和相对分子质量表 A,1硝基咪唑类药物及其代谢物中英文名称、化学结构式,CAS号和相对分子质量市文名款/英这名称及简称
甲硝唑
(Merronide2nle, MN7)
二基降
inr:t:id:ule,D
二甲硝咪唑代谢物
(Iytroxyd::rilzole, HMiMNl:
涤碳唑
(Ranid:2ale,RNZ)
野内俏唑
(Iprunidazole:+IPZ)
异内硝唑代谢物
JprenidaxoleO.IFzo)
化学结构戏
http:
相对分了质
-143 48 1
±51 92·8
935 c: 0
7681 76 7
14885 29 1
35175-14-5
时间nin
. (0:)
附录B
（资料性附录）
流动相梯度洗脱程序
流动相梯度洗脱程序
甲醇/%
http：/
ryfoodmate.ne
GB/T 23407-—2009
31Lo!/.Z.酸铵济被/%
GB/T 234072009
（资料性附录）
质谱/质谱条件及选择离子参数设定表离了源：电喷雾离子化电离源(ESI)，止离了临测;扫描方式：选择离子检测(SRM)；雾化气、鞘气为高纯氮气.碰撞气为高纯氨气：喷雾电压：4200V;
加热毛细管温度：350℃。
测定物质
IIMMNI
I>MZ-ID).
HMMAI I.,
母离子
(rm?2)
选择离子参数设定表
性离子
邵检电压/
定整离了
附录1)
(资料性附录）
硝基咪唑及其代谢物选择离子疏色谱图5, 1
N214296
1N [D: 146>5]
RN 211>:40
+M1MNF 13H[40
[[MMN[-[: 16] -14
Mz 172:-12N
GB/:23407—2009
2 (7124
EPZUII TH(SN
[011-1, [89>:
/rrsin
硝基咪唑及其代谢物选择离子流色谱图全品使伴网t
GB/T23407-2009
打印H：2009年7月21H
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蚜王浆中硝基咪唑类药物及其
代谢物残留意的测定
液相色谱-质谱/质谱法
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