本标准规定了蜂王浆中四环素、土霉素、金霉素、强力霉素残留量的液相色谱?质谱／质谱测定方法。本标准适用于蜂王浆中四环素、土霉素、金霉素、强力霉素残留量的测定。 GB/T 23409-2009 蜂王浆中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 GB/T23409-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T 23409—2009
蜂王浆中土霉素、四环素、
金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determinalion of residues of oxylelracycline, tetracyclinechlortetracycline, and doxycyeline in royal jelly-LC-MS/MS method
2009-03-28发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-07-01实施
本标准的附录 A、附录 B和附录 C为资料性附录，言
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。GB/T23409—2009
本标准主要起草人：徐锦患、丁寿、张晓燕、魏云计、章宇、刘艳、李丽花、吴斌、蒋原、陶宏锦。T
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1范围
蜂王浆中土霉素，哲环素、
金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
GB/T 23409-2009
本标准规定了蜂于浆中四环素、土露素、金舞素强力霉素残留量的液相色谱-质谱/质谐测定方法。本标准适用于蜂王浆中四环素、土霉素、金惩索、强力霉素残留量的测定，2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标难达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987,MOD）3方法提要
试样用提取液提取后，调节溶液的pH值，用固相萃取柱苯取，洗脱液浓缩后用甲醇水溶液定容，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一-级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2甲酸：色谱纯.
4. 3 三氯乙酸。
4.4氢氧化钠.
4.5甲醇-水：(2+8，体积比)：量取20mL甲醇（4.1)与80mL.水混合。4.6甲醇-水：(3+7,体积比）)：量取30mL甲醇（4.1)与70mL水混合.4.71%三氯乙酸水溶液：称取10g三氧乙酸于200mL水中，溶解后，加水至1L4.81.0mal/L磷酸氢一钠水液：称取358g磷酸氢二钠（NaHPO,12H.O)丁600mL水中，溶解后,加水至 1 L。
4.9四环（Tetracycline，CAS号，64-75-5）十素（Oxytetracyeline，CAS号：2058-46-0），金莓素（Chlortetracycline，CAS号：57-62-5）、强力露素（Doxycyclinc，CAS号：24390-14-5）标准物：纯度295%。
4. 10四环素,土赛素、金需素、强力霉素药物标准储备游液：1. 0 mg/mL-。准确称取适量的四环素、土露素、金衔素、强力毒索药物标准物质，用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液。储备液贮存在一18C冰柜中，可使用6个月。
4.11空白样品提取液：用不含四环素类药物残留的样品，按照7.1制备空白样品溶液。4.12四环素、土霉紊、金素、强力舞索药物标准工作浴液：用空白样品提取液（4.11)分别配成四环素、上毒索.金需素、强力霉素药物浓度为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL标准工作溶液，标准工作溶液在4亡保存，现用现配。1
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GB/T23409—2009
聚苯乙烯吡略烷酮填料固相萃取柱或相当者：60mg，3ml。使用前分别用5mL甲醇和5mL水预处理，保持柱体湿润。
4.14滤膜：0.45um，水相
5仪器与设备
液相色谱-质谱仪（串联四极杆）：配有电喷雾离子源。5.2
分析天平：感量分别为0.1ng和0.01g。5.3
自动浓缩仪或相当者。
液体混匀器
真空泵：真空度大于或等子
移液器：10mL。
离心管：50mL具
刻度离心管：10
离心机：8000
试样的制备与保
试样的制备
将实验室样品
密封，并做上标记
6.2试样的保存
贮存在—18
7测定步骤
7.1提取
自然解冻至室温搅拌均，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，制样的操作过程中应防止样品污中。
精价到0.001置子
称取2g试样
于液体混匀器上快速甩合
调节PH值为6.0~
5mL水洗离心管并过证
生成留物含量的变化，
具塞商老管中旭大
560n离心
将溶液璃
二红Z酸溶液（4.7），
清液，用moyLNa,HPO（4,8）
相苯取在，待落液完全流出后，用古的流连通最固社
再用5mL甲醇-水
）洗柱，弃去全部淋出液。
在65kPa的负压下，减
m个障（4.1)洗脱，收集洗脱液于10mL刻度离心管.8)中，于50℃用氮气压抽干10min，最后用5
吹干仪吹干，用甲醇-水（4.）定客1.0mL，过0.45um的滤膜（4.14）到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。
7.2测定
7.2.1液相色谱条件
色谱柱：高纯硅胶C.柱，5μm，150mm×mm（内径）或相当者：
流动相：0.1%甲酸水溶液+甲醇，梯度参见附录A：流速：0.25mL/min；
d）柱温：室温；
进样量：25L。
7.2.2质谱条件
参见附录B。免费标准bzxz.net
7.2.3液相色谱-质谱测定
四环素、土霉素、金赛素、强力霉素药物标准工作溶液（4.12）在液相色谱-质谱设定条件下分别进样，以样品峰面积为纵坐标，工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中四环素、土霉素、金霉素、强力霉素药物的响应值均应在仪器测定的线性范2
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围内。在上述色谱条件下，药物参考保留时间分别为四环素5.82min+土霉素6.05min，金霉素6.96min，强力霉素7.75min。谱图参见附录C7.2.4阳性样品的确证
按照上述（7.2.1～7.2.3）条件测定样品和标准工作液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准工作液一致，允许偏差小于土2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表1的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表1定性测定时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
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7.3空白试验
除不称取试样外，
结果计算
结果按式（1)
式中：
20%~50%
（.1~7.2）步骤进行
>10%~20%
试机C测组分残量，单位为掌克每于克（m/kg）由标D线而得的样液中药物的含最，单位为纳克每毫升（ng/mL)：由由线而得的空自试验中药物的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）C质定容体积，单位为毫升（mL），样
所代表试样的质量，单位为克（）样
测定低限和回收率
测定低限
量力每素与为0.005mg/kg
本标准测定低四环素、工等素、金器素强9.2回收率
回收率见表2
药物名称
土霉素
四环素
金霉素
强力霉素
添加浓度/（mg/kg）
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+（1)
回收率范围/%
85.2-114.4
93.6~120.2
88.6~120.8
92.2-115.4
76.4~103.0
73.5~100.1
107.0-~123.6
86.6~102.6
71.3~89.8
80.8~115.2
65.8~76.9
71.8~100.6
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时间/min
附录A
（资料性附录）
液相色谱-质谱/质谱法梯度洗脱条件表A.1
液相色谱梯度洗脱程序
流速/（mL/min）
甲醇/%
httn：//foodmate.net0.1%甲酸/%
电离方式
毛细普电压
源温度
气帘气
辅助气流
扫时间
碰撞气
监測模式
药物名称
土毒衰
四环素
金融家
强力露素
附录B
（资料性附录）
质谱条件及选择反应监测条件
表 B. 1 质谱条件
350℃
氧气,.060MPa
氮气,5. 0 L/h
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氢气， 0. 2 Pa(1, 50 mTor)
选择反应监测(SRM)
表 B, 2 选择反应监测条件
定性离子对(m/z)
461/126
461/443
461/337
445/410
145/427
479/444
179/462
445/428
445/410
https
定量离子对(m/z)
461/426
445/427
479/462
445/428
碰控气能盘/V
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附录C
（资料性附录）
标准物质色谱图
保留时间：5.B2
保审时间，6. 05
四环声
土霉囊
保留时间：6. 96
金氨案
保留时间：7.75
力每素
四环素、土霉素，金霉囊、强力霉素药物标准物质分离子流图图1
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