本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定。 GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法 GB/T23495-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T23495—2009
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法
Determination of benzoic acid,sorbic acid and saccharin sodium in foods-High performance liquid chromatography method2009-04-27发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
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本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位：重庆市计量质量检测研究院、山西省食品质量监督检验中心。GB/T23495—2009
本标准主要起草人：陈世奇，巩强、赵博、冯晓斌、李根容，吴锐、何军、袭迎昆、弓耀忠、屠大伟。httn://w
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食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法
本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的高效液相色谱测定方法。GB/T23495—2009
本标准适用于食品中苯甲酸山梨酸和糖精钠含量的测定。本标准的检出限：对于固态食品，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的检出限分别为1.8mg/kg、1.2mg/kg、3.0mg/kg。
规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用成为本标准的条文。凡是注明期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括功稳的内容）或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究的最新版本
是否可使用这些
GB/T6682
凡是不注口期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分杆实验室用水规格和试验方法（GB/T6682SS
2008SO3696:1987MOD)
不同样品经提最店
后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积R
定量。
4试剂和材料
用试剂均为分析纯，实验用水符合GI/工6682要求。除另有说明多
甲醇：色谱丝
乙酸铵溶液：取54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经微孔滤膜（4.10）过滤。亚铁氰化钾溶液称灰106
亚铁鼠化钾K
HO加水至1000mL。
FerCNe
乙酸锌溶液：称取220乙酸锌[Zn(CHgCOO)·2H.O]溶于少量水中，加人30mL冰乙酸，加水4.4
稀释至1000mL。
氮水（1+1)：氨水与水等体积混合。4.5
4.6正已烷。
4.7pH4.4乙酸盐缓冲溶液：
乙酸钠溶液：称取6.80g乙酸钠（CH.COONa3112O)，用水溶解后定容至1000mL。a)
b）乙酸溶液：取4.3mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。将上述两种溶液按体积比37：63混合，即得pH4.4乙酸盐缓冲溶液。4.8pH7.2磷酸盐缓冲溶液：
称取23.88g磷酸氧二钠（Na2HPO，·12H.O)，用水溶解后定容至1000mL。a
b）称取9.07g磷酸二氢钾（KH,PO,），用水溶解后定容至1000mL。将上述两种磷酸盐溶液按体积比7：3混合，即得pH7.2磷酸盐缓冲溶液。4.9标准溶液的配制：
a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.2360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1.00mg。
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b）山梨酸标准储备液：准确称取0.2680g山梨酸钾，加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含山梨酸1.00mg.
糖精钠标准储备液：准确称取0.1702g糖精钠（C.HCONNaSO）（120℃烘干4h）)，加水浴解并定容至200mL。此溶液中糖精钠的含量为1.00mg/mL。混合标准使用液：分别准确吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液，将其稀释成苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量分别为0.000mg/mL、0.020mg/mL、0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.160mg/mL.0.320mg/mL的混合标准使用液。4.10微孔滤膜：0.45um，水相。5仪器与设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器。离心机：转速不低于4000r/min。5.3
超声波水浴振荡器。
食品粉碎机。
旋涡混合器。
5.6pH计。
天平：分度值为0.01g和0.1mg。6
分析步骤
6.1样品处理
6.1.1液体样品
6.1.1.1碳酸饮料、果酒、葡萄酒等液体样品：称取10g样品（精确至0.001g）（如含有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积）于25mL容量瓶中，用氨水（1十1)（4.5）调节pH至近中性，用水定容至刻度，混匀，经微孔滤膜（4.10）过滤，滤液待上机分析。6.1.1.2乳饮料、植物蛋白饮料等含蛋白质较多的样品：称取10g样品（精确至0.001g）于25mL容量瓶中，加入2mL亚铁氧化钾溶液（4.3），摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液（4.4）摇匀，以沉淀蛋白质，加水定容至刻度，4000I/min离心10min，取上清液，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。6.1.2半固体样品
6.1.2.1含有胶基的果冻样品：称取0.5g~1g样品（精确至0.001g），加水适量，转移至25mL容量瓶中，再加水至约20mL，置60℃～70℃水浴中加热片刻，加塞，剧烈振摇使其分散均匀后，加氨水1+1)（4.5)调节pH至近中性，加塞，剧烈振摇，使样品在水中分散均匀，置60℃～70℃水浴锅中加热30min，取出后热超声5min，冷却后用水定容至刻度，用微孔滤膜（4.10）过滤，滤液待上机分析。6.1.2.2油脂、奶油类样品：称取2g～3g样品（精确至0.001g）于50mL具塞离心管中，加入10mL正已烷（4.6），用旋涡混合器使其充分溶解，4000r/min离心3min，吸出正已烷提取液转移至250mL分液漏斗中，再向50mL具塞离心管中加人10mL正已烷重复上述步骤，合并正已烷提取液于250mL分液漏斗中。于分液漏斗中加人20mLpH4.4乙酸盐缓冲溶液（4.7）加塞后剧烈振摇分液漏斗约30s，静置分层后，将水层转移至50mL容量瓶中，再加入20mLpH4.4乙酸盐缓冲溶液，重复上述步骤，合并水层并用乙酸盐缓冲溶液定容至刻度，经微孔滤膜（4.10）过滤，滤液待上机分析。6.1.3固体样品
6.1.3.1肉制品、饼干、糕点：称取粉碎均匀样品2g~3g（精确至0.001g）于小烧杯中，用20mL水分数次清洗小烧杯将样品移入25mL容量瓶中，超声振荡提取5min，取出后加2mL亚铁氰化钾溶液（4.3），摇匀，再加人2mL乙酸锌溶液（4.4），摇勾，用水定容至刻度。移人离心管中，4000r/min离心5tmin，吸出上清液，用微孔滤膜（4.10）过滤，滤液待上机分析。2
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6.1.3.2油脂含量高的火锅底料、调料等样品：称取样品2g~3g（精确至0.001g）于50mL具塞离心管中，加人10mL磷酸盐缓冲液（4.8），用旋涡混合器充分混合，然后于4000r/min离心5min，小心吸出水层转移到25mL容量瓶中，再加人10mL磷酸盐缓冲液于具塞离心管中，重复上述步骤，合并两次水层液，用磷酸盐缓冲液定容至刻度，混匀，用微孔滤膜（4.10)过滤，滤液待上机分析。6.1.3.3凝胶糖果、胶基糖果：按半固体样品6.1.2.1含有胶基的果冻样品处理。6.2色谱条件
a）色谱柱：Cis柱，250mm×4.6mm，5μm或性能相当者；b）流动相：甲醇（4.1)+乙酸铵溶液（4.2)(5+95)；流速：1mL/min；
检测波长：230nm；
e）进样量：10uL。
6.3测定
取处理液和混合标准使用液各10μL注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性，以其峰面积求出样液中被测物质含量，供计算（苯甲酸、山梨酸和糖精钠同时测定的谱图参见附录A)。
结果计算
样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量按式(1)计算：X=c×Vx1000
mx1000
式中：
-样品中待测组分含量，单位为克每千克（g/kg)；由标准曲线得出的样液中待测物的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；样品定容体积，单位为毫升（mL）；样品质量，单位为克g）。
计算结果保留两位有效数字。
8精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。bttp:
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（1）)
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500DeteclorA:230mm
附录A
（资料性附录）
苯甲酸、山梨酸和糖精钠的高效液相色谱图5.0
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苯甲酸、山裂酸和糖精钠的高效液相色谱图http://foodmate.net22.5
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书号：155066·1-37624
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