本标准规定了含DNA辐照食品的DNA彗星试验筛选方法。本标准适用于生鲜肉类、原粮、干果、蔬菜以及香辛料是否辐照的筛眩 GB/T 23748-2009 辐照食品的鉴定 DNA彗星试验法 筛选法 GB/T23748-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB/T23748-2009
辐照食品的鉴定
DNA慧星试验法
筛选法
Detection of irradiated fodstuffs-DNAcomelassayScreening meihod
20.09-05-13发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-08-01实施
GB/T23748-2009
本标准参服BSEN13784一2002C食品DNA雪星试验祛整定辅照食品席造祛C英文版）制定本标准的附量A时示B为资科性附录本标际准由中国标准化研究院量出井日口本标准民草单位，国家环保产品质量监督检验中心河北师范大学生命科学学院，中国标准化研究院，湖北出人境检验检疫局检验检疫技术中心本标准主要起草人·张春、李玉国、李择、日品崔海容、周正、王丽童、刘敬洋、郭丽敏、谢乐刘东、闫力，李丛芬、周
1范围
辐照食品的鉴定
DNA慧星试验法
筛选法免费标准bzxz.net
本标准规定了食DNA辅限食品的DNA慧星试婚第选方法车准适用于生鲜肉类，原粮、干果，蔬菜以及香辛料是否辐黑的萌选。2规范性引用文件
GBT23748-2009
别文生中的美款通本际准的用市成为本标准的条款儿是注日用的引用文生其随后质有的修改单不包括助误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协设的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标推GBN6682分T34H004CBT66822008-S03696.1987M03术语和定文
下列术语和定义活用于本标准
#服食品irradiated foodstufls保鲜韩延长保存世为日的经时线成电士惠哪时的代品3.2
DNA星试验DNAcomelassay
单细胞凝胶电球singlecellgelclectrosisisCGE一种将电球，显微成像和光分析等多种技术相结合的，在单组电水平进行DNA链断婴损检测的方法，具有简便灵敏，快捷，重复性好，样品用量小等优点穗理
含有DNA的食品经过辅服处理后这化管品中所携带的DNA分就会发生套化·包插发生DNA单链或者双钱的断裂，特这些细包理在琼脂中·采用裂解试剂胜解细胞膜·然后在一定的电压下进行电沫，DNA片断会技拉长移动，开在电场中按电报的方向形成尾状分布，丽已经发生DNA受现的细就会量惠出驾星光的电球图请未受的妞电的图普接近国彩或者轻尚悦用5试剂
除另有说明，试别均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水5.盐酸
三甲基业钢CDMSO
第化销NacD
氯化钾KCD
#载二销CNaHPO*12HO）
磷成二复钟KHPO
晾脂糖。
GB/T23748-2009
低熔点琼脂耕
Z二胺园Z酸二销CEDTANA）
寰氧化销NaOH
TrisTrisbase
十二烷基磺酸钠（SDS)
吖啶橙。
磺化吡啶，
澳化艺锭。
三氧乙酸
硫酸锌。
碳酸钠
硝酸铵
硝酸银
鹤硅酸。
甲醛。
冰酷酸
收器设备
6.1水平电泳槽
电泳电源0V200V
秒表或计时器。
天平：精确至0.001爸
电加热微力搅择器
微波炉
微孔滤膜：孔径100pm.200gm.500pm显微镜载玻片（76mmX26mm）带磨砂边盖玻片（24mm×60mm）
610美光显尚镜荧光染色用.100倍400倍蓝色微发波长460nm~485m用于可停染色观察.绿色激发波长$15m~56omm用于磺化吡啶或澳化乙锭染色观察.6.11显微镜：银染用，100倍~400倍。7实验步
7.1样品制备
7.1.1动物组织
7111骨髓
切开骨头取出约50m低骨随置试营中，加人3mL冰地冷的PBS用玻瑞件特细胞量起：用100m的微孔滤膜过滤细胞悬液，将感液置于冰上，取上清液作进一步分析，（细跑悬液可置于冰上，时间下超过10min在下面加人5%～10%DMS0作为防冻剂后组跑可置于一20C保存24h27112肌肉组织
刮取肌肉组织不能有可见脂防）或者用解副刀特肌肉组织切成片取工尽叠于小烧杯中加人5mL冰预冷的PBS.将该小烧杯置于另一个较大装有碎冰的烧杯中预冷，500r/min搅拌5min+依次2
用500m和200m的微孔滤膜过滤，冰上放置5min取上清没提取细胞7.1.2植物组织
7.1.2.1原粮，坚果和调味料
GB/T237482009
取样品0.25，用研体展降（如除去外壳，可在研磨前泡水）置于小烧杯中，加人3mL体预冷的PBS，将该小烧杯置于另一个较大装有碎冰的烧杯中预冷500z/min搅择5min，依用5o0μm和200um的微孔滤膜.冰上效置15min~60min.取上请液作进一步分析7.12.2草莓
采摘草莓瘦果，或用水冲下草荐睡果的混合物.称取025g费巢.实龄步最同7.12.171.2.3菜不包食用
将蓝蔬菜的可食组织用解剖刀切成薄片，取4置于小烧杯中，加人5mL冰预冷的PBS，实验步骤同7121
7.2预涂载玻片
徐市前载玻片应用甲醇没泡过夜以除去表面的油脂，风干，预途载玻片一定保证干净无生滴滴约50涂层琼脂情波于程玻片上，立即取务一个载玻片盖在滴有琼脂情的载玻片上，便琼脂机洛没放开取下上层载玻片·风干0也可直接将视玻片设人到聪脂航格液中·然后用纸中德掉面筑脂，，预途载玻片可置于干净无生环墙中保存工周7.3包理最胶
取100L细胞恶液与1mL包埋凝胶潜液混匀，取100L该混合液用枪头轻轻地涂布在预涂载店片上文盖上盖玻片注食防止气泡产生然后将载玻片置于冰上5m用辉部刀尖将盖成片租开，慢慢地从琼脂情上刺落下来，晾脂情在胶中的细跑应分布均匀，不能重叠，如果细跑数量太少，应增加组织量反之亦然
7.4落解细胞
特载玻片故进型红，光全没人裂解级冲波中（至少30m，使组跑济解整个过程不要跳到琼脂精。
7.5回湿
特细胞包溶解的载玻片没人电泳缓冲波mn7.60电泳
将载玻片开排放人水平电泳精朝余的空间和磨砂边缘朝向月服，电泳中加人电泳暖冲美，直至没设过载玻片2mm~4mm间不要移开量玻片室漫下，调节电压至2Vcm，电泳20min关掉电源后将载玻片从电减量中取出放人水中5mn·取出风于室温约1h7.7菜色
7.7.1荧光染色
77.11吖啶橙
特片漫人可啶橙华色液3min~5min.然后漫人水中清洗o.5min~1min.蒙光量微镜观察的，擦干载玻片下多余的水分，荧光弟料易痒灭·观寨前染色应迅建，察要迅进，因为我玻片干燥后会优品组电的心容视好色活具有一定的市生实结后康对康活计行净化处理再行配色污策环境和危害人体健康）
7.712磁化吡晚
将裁玻片没人磺化吡啶染色液5min~10min，后续步骤间7.71.17.7.13澳化乙锭
步同磺化吐，
7.7.2硝酸银染色
将载片漫人混合波A10min.然后水洗1min40C~50C烘箱干爆燥1h或室温风干（可过3
GB/T23748-2009
夜.然后特载玻片浸人准合液D10min~20min重复该步星1次一2次，朵色时间5min~10min直至线玻片星现色，水洗1min用停止没E没泡5mn停止菜色反应再用水洗工mn然后把载玻片室温放置，自然风干，染色后的载片不会遇色，可长期保存用于观察7.8观察鉴别
7.8.1荧光染色
吖啶橙染色后的载玻片须用蒙光显微镜460nm~485nm蓝光发）观察·染色DNAC双链）发出绿色荧光，而背景和碎片呈现桔黄色磺化吡啶或澳化乙锭染色后的载玻片须用荧光显微镜（515mm~560nm，续光激发）配合590nm洗光片使用观察栗色DNAC双链）发出红色荧光7.8.2硝酸银染色
银架的截玻片可使用普适显微镜观察。7.8.3显微镜观察
轻照能引起DNA断裂·固此辐照过的食品可看到大量的DNA醇片·辐照样品儿乎没有完整细跑，全都是星图傻见图B1，国B2，未受贝的细胞有完擎的细胞核，不脱尾或者轻微脱尾见图B3）售星图像和我玻片上细跑的款布情况可在低倍镜下（100借）看到全貌，高倍镜下可以看到细节8桔果报告
通过是微锋观察，组胞未出现普星现象者，结果报告为阴性细胞出现普星现象的结果为用性结果阳性结果应依据相关标准进行确证A1盐酸1l/L)
附录A
（资料性附录）
试剂配制
量取90mL盐酸.加适量水稀释到1ooomLA.2PBS缓冲液(PH7.4）
GB/T23748-2009
件取8.0氯化销NaCD.0.2氧化钟CKC1）.2.94码酸复二销CNaHPO12HO）O.24酸二氢钟CKHPO容于900mL水中.泥合均包·用共酸(A.1调PH=74.然后定容到1000mL高压灭菌后备用
A.3涂层琼脂糖溶液（0.5%）
10mL蒙增水中加人50m助脂精：加热或微波者·45水浴待用包理凝胶溶液（0.8%）
10mLPBSA2中加人80mg低熔点琼脂糖·加热或微波者沸45C水浴待用A5
氧氧化钠溶液（40%）
称取40氢氧化钠.溶于60mL水中
A6EDTA吧存液O.5moVL)
除取93.05gEDTANa：乙二胺四乙酸二销）落于300mL蒸榴水中.混合均勺·月氧氧化钠液(A5）调pH=8.0.然后稀释至500mL.高压灭菌后备用A7TBE存液
标取54gTris(Tris.base）和27.5客铺酸落于20mLEDTA忙存液A.6).用菜增水希释至1O0OmL该TBE世存液置于玻璃瓶中室温保存，使用时者有抗淀，应重新配制A.8
电泳缓冲液
准确量取10mLTBE此存液(A7）和90mL水，调pH=8.4.混后备用）裂解缓冲液
称取25g十二境基磺酸钠(SDS）用电泳缓冲液容解稀释定容至1O00mL混匀后备用A10莫光染色试剂
A10.1吖啶橙贮存液
称取100mg吖啶橙落于100mL水中，4C~6C避光保存A10.2吖啶橙染色液
量取0.5mL印啶橙忙存液A10.1).用PBS缓冲液GB/T237482009
A.10.3磺化吡啶贴存液
称取100mg磺化啶溶手100mL水中，4C~5避光保存A10.4磺化吡啶染色液
量取1mL一5mL碱化吐啶此存液A10.3用PBS级冲流稀释至100mL，准匀后备用A10.5溴化乙锭贴存液
取1化乙锋溶于100m水中转移至禁色瓶或铝箱包惠容器中室睡光保存A06漫化乙锭染色液
量取2mL漠化乙锭忙存液（A105），用水稀释至100mL混勺后备用A11银染试剂
A11.1泥合液A
准确称取150g三氯乙酸，50g硫酸锌，50g甘油用水溶解并稀释到1000mL，混匀后备用A112染色液B
准确称取12.5倍碳酸销用水容解并稀释至250mL混匀后备用A11.3染色液C
准确皮100m销酸·100m销酸银.500mg鸭硅牌于水加人250L甲醛c37%用水桥释至500mL+混匀后备用
A11.4染色液D
准确量取68m染色减C加人到32mL染色液B中，加液同时要不断用力抱拌泥合没，染色液D应现用现配
A.115停止波E
准确量取10mL冰酷酸·加水稀释至1000mL
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