本标准规定了保健食品中大豆异黄酮的测定方法。本标准适用于以大豆异黄酮为主要功能性成分的保健食品（片剂、胶囊、口服液、饮料），也可用于保健食品原料中大豆异黄酮含量的测定。 GB/T 23788-2009 保健食品中大豆异黄酮的测定方法 高效液相色谱法 GB/T23788-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T23788—2009
保健食品中大豆异黄酮的测定方法高效液相色谱法
Determination of soyhean isoflavone in health-care food-High -performance liguid chromatography2009-05-18发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-12-01实施
本标的附录 A为资料性附录
本标推由全国特殊膳食标准化技术委员会提出并归口。GB/T 23788—2009
本标准起草单位：北京市朝阳区产品质直监督检验所、红牛维他命饮料有限公司、中国食品发酵工业研究院。
本标准主要起草人：崔岩、邢晓慧、张立刚、钟其顶、张淑玲、郎涛、苏文英、吴镇君、仇凯。http：//foodmate.net1范围
保健食品中大豆异黄酮的测定方法高效液相色谱法
本标准规定了保健食品中大豆导黄酮的测定方法。GB/T 23/88-2009
本标准适用于以大豆异黄为主要功能性成分的保健食品（片剂胶囊，口服液，饮料），也可用于保健食品原料中大豆异黄丽食量的测定本标准的检出限：固件样品大豆苷、大臣黄苷、染料不香大豆素大豆黄素和染料木素组分的检出限均为5Ig/k体羊品的大豆替、大豆黄苷，染料木昔、大就，大黄素和梁料木素组分的签出限均为0.2mg/
2规范性引用文
的条款道过本标准的用用而成为本标准的案献下到文件中
电是生口期的引尾文件，其随后所有的的内容）或
的修改单（不包持
修订版划不适用干本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究相理不注百期的可用文件其最新版本适用十本核准。是否可使用这些
的最新版本
新实验室用水型腾和武验方法（GB）GB/T 6682
术语和定义
下列术语和定义适用于本称准
大豆异黄醇
Olun isofayunt
VENVIS
大夏音、大豆真
甘CHO大豆真
木素：CH.Os
4方法提要
美料木替
2308,IS0 36 6:1987,MOD)免费标准bzxz.net
大道大和染料不常的活称，黄配类物质，分子式如下大豆美科木节：
0.大豆素H大直黄素Ci.HzO.，染料样品制备、提取、过滤后，经高效液相色谱仪分析精柱分离），依赔保留时间定性，用外标法定量5试剂和材料
本标准使用符合GB/T6682规定的--级水。除另有规定仅使用分析纯试剂。5. 乙晴：色谱绝。
5.2 甲醇:优级纯。
5.380%甲醇：用甲醇80mL，加水20ml混匀5.4磷酸。
5.5磷酸水溶液：用磷酸调节 pH至3.0,经0.45pm滤膜过滤5.6
三中基亚研:色谱纯。
5.750%二甲基亚砜溶液：取二中基亚50mL，加水50ml.，混匀。5.8大夏异黄酮标准贮备溶液：称取大豆答（daidzin）、大豆黄苷（glycitie）和染料木甘（genistin）、大豆http://foodmate.netGB/T23788—2009
素（daidzcin），大豆黄素（glycitein）和染料木素（genistein）（纯度均为98.0%以上）各4mg，分别置于10mL容量瓶中，加入二甲基亚砜（5.6)至接近刻度，超声处理30min，再用二甲基业磁（5.6）定容。各标准贮备溶液浓度均为400mg/L（大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆索、大豆黄素和染料木素）。5.9大豆异黄酮混合标准使用溶液：8.0mg/1-混合标准溶液配制：吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素、染料木素六种标准贮备溶液(5.8)各 0.2 mL于10mL容量瓶中,加人等体积水,用50%二甲基业砜溶液(5.7)定容。16.0mg/L混合标准溶液配制：吸取大豆昔，大豆黄井、染料木苷、大豆素、大豆黄素、染料木素六种标准备溶液(5.8)各0.4mL于10mL容量瓶中,加人等体积水，用50%二甲基业砜溶液(5.7)定容。21.0mg/L混合标准溶液配制：吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木昔、大豆素、大豆黄素、染料木素六种标准贮备溶减（5.8)各0.6mL于10mL容量瓶中，加人等体积水，用50%二甲基业研溶液（5.7)定容。32.0Ⅱg/L混合标准溶液配制：吸取大豆苷，大豆黄节、染料木苷、大豆素，大豆黄素、染料木素六种标准贮备溶液(5.8)各 0.8 mL 于 10 tL容量瓶中,加人等体积水,用 50 %二甲基亚砜溶液(5.7)定容。40.01g/L混合标准溶液配制：吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素、染料木素六种标雅贮备溶液(5.8)各1.0ml.于10mL容量瓶中，加人等体积水，用50%二甲基亚砜溶液(5.7)定容。6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪：带紫外检测器（或二极管阵列检测器）。6.2超声波振荡器。
6.3分析天平：感量0.01m名。
6.4酸度计：精度0.02pH。
6.5离心机：转速不低于8000r/min。6.6滤膜：孔径为0.45μm。
6.7容量瓶：10mL。
7分析步骤
7.1样品处理
7.1.1固体样品、半固体样品：固休样品粉碎、磨细（过80目筛）、混匀，半固体样品混匀，称取样品0.05g~0.5g精确至0.1 mg),用80%甲醇溶液(5.3)溶解并转移至50 ml.容量瓶中,加人80%甲醇溶液至接近刻度。
7.1.2液体样品：吸取混匀的液体样品0.5mL~5.0mL于50mL容量瓶中，加人80%甲醇溶液至接近刻度。
7.1.3 将上述样品溶液(7. 1. 1 或 7. 1. 2)用超声波振荡器振荡 20 min,用 80%甲醇定容,摇勾。取样品溶液置于离心管中，离心机离心15tmin转速大于80001/min）。取上清液用滤膜（6.6)过滤，收集滤液备用。
7.2色谱条件
7.2.1色谱柱
Cis，4.6mm×250mm，粒度5μm不锈钢色谱柱；也可使用分离效果相当的其他不锈钢柱。7.2.2流动相
流动相A;乙睛(5.1)。
流动相B:磷酸水溶液(pH=3. 0)(5. 5)。7.2.3梯度洗脱条件
见表1。
时间/min
流动相A/%
流动相 B/%
流速:1.0 mL/min。
波长：260nm。
7.2.6进样量：10μL。
7. 2.7 柱温:30 ℃。
7.3测定
7. 3. 1 定性
GB/T 23788—2009
分别将大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素、染料木素的标准贮备溶液（5.8)稀释10倍后，按色谱条件（7.2）进行测定，依据单一标准样品的保留时间，对样品液中的组分进行定性，定性他谱图参见附录 A。
7,3.2定量
将大豆异黄酮混合标准使用溶液（5.9)在色谱条件（7.2)下进行测定，绘制以蜂面积为纵坐标、混合标准使用溶液浓度为横坐标的标推曲线。将7.1.3制备的样品溶液注入高效液相色谱仪中，保证样品溶液中大豆皆，大豆黄苷、染料木皆、大豆素、大豆黄素和染料木素的响应值均在工作曲线的线性范围内，由标准曲线查得样品溶液中大豆井、大豆黄节、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素的浓度。8结果计算
8.1样品中大豆异黄酮各组分［大豆苷（X,）、大豆黄皆（X2）、染料木皆（X）、大豆素（X）、大豆黄素(X。)和染料木素(X。)的含量分别按式(1)计算：Vx1000
X, - x
式中：
样品中大豆异黄酮单一组分的含量，单位为毫克每千克(nig/kg)或毫克每升(g/L)：-1
根据标准曲线得出的大豆苷（或大豆黄昔、染料木苷、大豆素、大豆黄素、染料木素)的浓度，单位为毫克每升(mg/L)：
样品稀释液总体积的数值，单位为毫升（mL）冏体、半固体样品质量的数值，单位为克（g)；液体样品体积的数值，单位为毫升（mL）。8.2样品中大豆异黄酮总含量，按式(2)计算：X=X+X+Xx+x+X
式中：
样品中大豆异黄酮总含量，单位为毫克每千克（mg/k名毫克每升（mg/）样品中大豆苷的含量，单位为毫克每于克（mg/kg)或毫克升(tg/L）；样品中大豆黄苷的含量，单位为毫克每千克(rng/kg)或毫克每升（mg/L);样品中染料木苷的含盘，单位为毫克每千克(mg/kg)或毫克每升（mg/L）;样品中大豆素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）；样品中大豆黄素的含盘，单位为毫克每千克(mg/kg)或毫克每升(mg/L);样品中染料木素的含量，单位为毫克每干克(mg/kg)或毫克每升(mg/L）。计算结果应表示到小数点后一位。9精密度
在重复性条件下，两次独立测定结果之差不得超过算术平均值的10%，-(2)
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毫吸光单位
大豆苷(daidzin)，
大豆黄甘（glycitin)
染料术苷(genistin):
大豆素（daidzein)；
大豆黄素（glycitein)，
染料本素（gcnistein）。
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附录A
（资料性附录）
标准样品色谱图
图 A。1 大豆异黄酮标准品的 HPLC 色谱图秋伴网httn·
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书号：1550661-37906
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