标准规定了工业循环冷却水中土壤菌群的测定方法。适用于工业循环冷却水中土壤菌群的测定，也适用于原水、生活用水及其他水中土壤菌群的测定。 GB/T 14643.2-2009 工业循环冷却水中菌藻的测定方法 第2部分：土壤菌群的测定 平皿计数法 GB/T14643.2-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 71.040. 40
中华人民共和国国家标准
CB/T 14643.2-2009
代替GB/T 14643.2—1993www.bzxz.net
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第2部分：土壤菌群的测定
平血计数法
Exarnination of bacteria and algae in industrial circulating cooling water--Part 2: Examination of soil micro-bioti-Standard of plate count
2009-05-18发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2010-02-01实施
GB/T11643《T业循环冷却水中菌藻的测定方法》分为以下几个部分：第1部分：黏液形成菌的测定平Ⅲ计数法-第2部分：上壤菌群的测定平血计数法—第3部分：黏泥真菌的测定平Ⅲ计数法第4部分：七壤真菌的测定平匪计数法一第5部分：硫酸盐还原菌的测定MPN法第6部分：铁细菌的测定MPN法
本部分为 GB/T 14643的第 2部分。GB/T14643.2—2009
本部分代替GB/T11643.2-~1993《工业循环冷却水中土壤渐群的测定平Ⅲ计数法》。本部分与GB/114643.21993相比，在技术内容上并无变化，只是对文本结构和文字进行了修改。
本部分由中国石油和化学工业协会提出。本部分由全国化学标准化技术委员会水处理剂分会(SAC/TC63/SC5)归口I。本部分负责起草单位：中海油天津化工研究设计院、天津正达科技有限责任公司。本部分主要起草人：李琳，张全、白莹，本部分于1993年首次发布。
1范圈
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第2部分：士壤菌群的测定
平血计数法
CB/T14643的本部分规定了工业循环玲却水中土壤菌群的测定方法GB/T14643.2—2009
本部分适用于工业循环冷却水中土壤菌群的测定，也适用于原水、生活用水及其他水中上壤菌群的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T14643的本部分的引用而成为本部分的条款，凡是注F期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用了本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备（G3/TG03-20Q2.ISO6353-1:1982，NEQ)
GI/T6682分析实验室用水规格和试验为法（GJ3/T66822008,ISO3696：1987MOD）3方法提要
本部分采用混合培养基，利用平计数技术，在（29土1)℃培养72h，测定循环冷却水中土壤菌群总数。
4试剂和材料
本部分所用试剂,除非另有规定，应使用分析纯试剂和符合CB/T6682中三级水的规定。试验中所需制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按CB/T603之规定制备4.1牛肉膏：牛物试剂。
4.2蛋白陈：4物试剂。
4. 3琼服:生物试剂，
4.4氯化钠。
4.5硝酸钠。
4.6磷酸氢二钾。
4.7氯化钾。
4.8碗酸镁。
4.9硫酸亚铁。
4.10燕糖。
上壤(果园上,莱园上)。
4.12氢氨化钠溶液：10g/L
4.13乙醇溶液：75%（体积分数）。GB/114643.2—2009
4硫代硫酸钠。
5牛皮纸。
4.16医用脱脂棉。
医用脱脂纱布。
5仪器，设备
5.1无菌箱(室)或超净工作台。
5.2蒸汽压力灭菌器。
5.3生化培养箱，
5.4敲风电热干燥箱：温度司控制在60℃～280℃。5.5铝锅：200mm。
5. 6糖瓷量杯:1 000 mL。
5.7磨口=角瓶：100 mL，
5.8培养血：590mm
5.9 魔口试剂瓶;1 000 ml-。
5.10刻度吸管:1 mL。
刻度吸臂：5mL。
三角瓶:500 ml.c
6试验前的准备
6.1土壤浸出液的制备
称敢约 100 g土壤加人 300 g水中,采用蒸汽压力灭菌器在(121士1)℃火菌15 min,置24 h后第二次灭菌,冉静置24h后进行第次灭菌，瓶中的上层清液为十壤浸出液。6.2培养基的制备
称取下列试剂：
牛肉膏：1.58
蛋白陈；5.0g。
氯化钠：2.5g。
硝酸钠:2.5g
磷酸氢二钾:0. 5 R。
氯化钾：0.2g。
硫酸镁：0.25g。
硫酸亚铁：0.005g。
燕糖，20.0g。
十壤浸出液:5 mLe
琼脂：15.0g.
将「:述试剂加水约950mL.在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤十瓷量杯中，用热水补充至1000mL.用氢氧化钠溶液调节plI至7.0士0.2，并分装在500mL三角瓶巾，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器于（121士1)℃灭晰15min。
6.3无菌释水的制备
6.3.1牛理盐水的配制：称取8,5g氯化钠,溶解在1000 mL水中,混句。2
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6.3.2将生理盐水分装在100mL瓣三角瓶中，每瓶45ml，每个三角瓶塞子和瓶可间插人-小纸片，塞紫瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力火菌器于（121土1）℃火菌15 uin.
6.4刻度吸管的灭菌
6.4.1将洗净并烘1后的吸管粗端寒上医用脱胎棉，棉花最要适宜，长度大约10mm~15mm，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.4.2每支刻度吸管用1条约40um～50mm宽的4皮纸条，以45左右角度操旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多余的纸条折叠打结，不使散开，标上景度，若1支扎成一束，置电热十爆箱中，于(160+2)℃灭菌2h
6.5培养Ⅲ的灭菌
将洗净并烘干后的培养血10个左右登在一起，用皮纸卷成…筒，置电热燥箱中于（160土2）℃灭菌２h。
6.6采样瓶的灭菌
将洗净并烘干后的000mL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好.扎紧，置电热下燥箱于（160±2）℃灭菌2h
6.7硫代硫酸钠灭菌
将硫代硫酸钠放人无菌箱（室）内，并均匀地摊在离紫外线灯30cm处，灭菌30min。7测定步骤
7.1水样的采集
7.1.1用无菌采样瓶采集被测样品，在采样过程中，要保护瓶口和瓶颈.防止这些部分受杂菌污染。瓶内要留下足够的空间，以备测定之前摇晃。7.1.2若采集的水中有余氯，应于采样前在无菌操作下于无菌采样瓶中加人灭过菌的硫代硫酸钢.加人量为每升水样约0.1g。
7.1.3水样采架届应立即进行测定，如果2h内不能进行测定，应把水样放在冰箱中，于4℃～10℃保存，保存时叫不宜超过24h。经冷冻保存后的水样箭谢定时，从冰箱中取出于30℃左右活化4h～5 h,再进行测定。
7.2无菌箱(室)灭菌
7.2.1把实验所用的无菌稀释水、无菌培养皿、无菌吸管等用品放人无菌箱（室）内，打开紫外线灯灭菌30min
7.3水样的稀释和接种
7.3.1关掉紫外线灯，打开荧光灯，将测水样放入尤菌箱（室）中，立即用75%的乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱(室)内的酒精灯以下对水样的稀释和接种条的操作应在无菌箱（室)内的火熔区逃行，7.3.2选择适宜的稀度,应使最后---个稀释度接种后培养血中生长的菌落数小于300个，在空白稀释水样瓶十标上稀释度数。
7.3.3用10倍稀释法稀释水样,即用5mL无菌吸管吸取5mL水样注人到45ml.空白稀释水中充分摇勾，此时稀释度为101
7. 3.4另取一支 5 ml无菌吸管吸取 5 mL 10-1水样移人到第-.个稀释水中,充分操匀,此稀释度为10-2，依次类推,直至需要的稀释度为止.。7.3.5将不同稀释度的水样分别接种到无菌培养血中,每个稀释度重复接种 3~5个Ⅲ,每血接种1mL,接种时左于掌托往培养Ⅲ，人拇指和食指轻轻将培养皿提起，吸管与培养血底战415°角相接。移开吸管时吸管不宜碰到培养Ⅲ。接种时间不宜超过45。每接种个稀释度更换支无菌吸管。7.3.6另取一组培养血不接水样，作为空白。同时操作。3
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7.3.7将火过菌的培养基冷至(45士1)℃.按7.3.5的方法掀开培养血盖，将培养基灌人培养血内，每川应灌15mL～20mI.。灌血时不要使培养基直接灌在水样上后要将融化的培养基和血中水样彻底混合，小心勿使混合液溅到培养的边缘，测定一个水样从接种到灌皿不得超过20min，7.4培养
待培养血巾培养基(7.3.7)固化后,倒置平Ⅲ,在生化培养箱中(29士1)℃培养 72 h。8计数与报告
8.1培养之后，取出培养血；若空白培养皿出现菌落，表明测定过程中有污染，本次测定无效，8.2选择平均菌落数作30~300之州的稀释度，立即进行计数，求得平均菌落数，并修约成二位有效数学(见表 1 示例1)。
8.3若有二个稀释度，其生长菌落数均在30～300之间，则规：者之比值来决定，若其比值小于2，应报告其平均数；若人于2则报告其中较小的数字（见表1示例2及示例3)。8.4若所有稀释度的平均菌落数均大子300,则应选择稀释度最高的培养血计数（见表【示例4)。8.5若所有稀释度的平均菌落数均小于30.则应选择稀释度最低的培养阻计数（见表1示例5)。8.6若所有稀度均无菌落生长，则以“小于1乘以最低稀释倍数\报告之(见表1示例6)。8.7若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中-部分人于300而另部分小下30时，则选摔最接近30或 300的培养而计数(见表 1例7)。8.8上壤菌群的总数以p表示，单位为个每毫升（个/mL).按式（1)计算：X
式中：
-计数得出的培养Ⅲ中长出的平均菌落数，个；F.—-计数红的样品稀释度数。
稀释度及菌落数
2>6 500
两稀释度
菌落数之比
十堰曲群总数
个/mL
16 400
3130c0
报告方式
个/mnL
2.7X×1c2
9精密度
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9.1出于微生物能以单独个体，双双成对、链状、成簇或--团团等形式存在.而且没有单独--种培养基能满足·个水样中所有细菌的生埋要求。所以，由此法所得的菌落数可能要低于其止常存在的活细胞的数日。
9.2标准平血计数的正确度随着平行样皿的增加前增加，当使用5个行，每邮加1mL样品时测定结果的置度为95头。
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