标准规定了工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定方法。适用于工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定，也适用于原水、生活用水及粘泥中硫酸盐还原菌的测定。 GB/T 14643.5-2009 工业循环冷却水中菌藻的测定方法 第5部分：硫酸盐还原菌的测定 MPN法 GB/T14643.5-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS71.040.40
中华人民共和国国家标准
GB/T14643.5—2009
代替GB/T14643.51993
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第5部分：硫酸盐还原菌的测定
MPN法
Examination of bacteria and algae in industrial circulating cooling water-Part5:Examination of sulfate-reducing bacteria-MPN test量格
科专用章
2009-05-18发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局敬码贴伪
中国国家标准化管理委员会
2010-02-01实施
GB/T14643工业循环冷却水中菌藻的测定方法》分为以下儿个部分：第I部分：黏液形成菌的测定
平血计数法
第2部分：土壤菌群的测定
第3部分：黏泥真菌的测定
第1部分：土壤真菌的测定
平血计数法
平血计数法
平Ⅲ计数法
第5部分：硫酸盐还原菌的测定MPN法MPN法
第6部分：铁细菌的测定
本部分为GB/T14643的第5部分
GB/T14643.5—2009
本部分代替GB/T14643.51993%工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定MPN法》。本部分与GB/T14643.51993相比，在技术内容上并无变化，只是对文本结构和文字进行了修改。
本部分的附录A、附录B、附录C为规范性附录。本部分由中国石油和化学工业协会提出。本部分由全国化学标准化技术委员会水处理剂分会（SAC/TC63/SC5）归口本部分负责起草单位：中海油天津化工研究设计院、天津正达科技有限责任公司。本部分主要起草人：朱传俊、张全、部宏谦、李琳、白莹本部分于1993年首次发布。
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1范围
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第5部分：硫酸盐还原菌的测定
MPN法
GB/T14643的本部分规定了工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定方法。GB/T14643.5—2009
本部分适用于工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定，也适用于原水，生活用水及粘泥中硫酸盐还原菌的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T14643的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T603
化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备（GB/T6032002，1SO6353-1：1982NEQ)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T66822008，ISO3696：1987，MOD）3方法提要
本法采用多试管发酵技术，在（29士1）℃培养21d，如果试管内产生黑色沉淀并伴有化氢臭味的表明阳性反应，采用MPN技术对被测试样中的硫酸盐还原菌进行计数。试剂和材料
本部分所用试剂，除非另有规定，应使用分析纯试剂和符合GB/TG682中三级水的规定。试验中所需制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T603之规定制备4.1
磷酸氢二铆。
4.2氯化铵。
硫酸钠。
氯化钙。
4.5硫酸镁。
4.6乳酸钠。
酵母汁：生化试剂。
硫酸亚铁铵。
维生素 C。
氯化钠。
氢氧化钠溶液：40g/L
盐酸溶液：1+11.
硫代硫酸钠。
乙醇溶液：75%（体积分数）。
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4.15牛皮纸。
4.16医用脱脂棉。
器、设备
无菌箱（室）或超净工作台。
蒸汽压力灭菌器。
生化培养箱。
电热干燥箱：温度可控制在60℃~280℃电热恒温水浴锅：恒温范围37%100℃。刻度吸管：1mL.
刻度吸管：5mL。
试管：150mm×15
试管架。
刻度三角瓶：500
磨口三角瓶：1
磨口试剂瓶
容量瓶：100
试验前准备
无菌水的制
将水分装在
L磨口三角瓶中每瓶40mL，每个三角瓶塞子和瓶口间插人一小纸片来防止粘
旺用牛皮纸包孔，以的污菜，用蒸汽压为灵南器于121±1)℃天菌5min。连，每个瓶子的瓶
6.2培养基的制备
6.2.1称取下列武剂
磷酸氧二钾
氯化铵
硫酸钠
氯化钙
硫酸镁
乳酸钠
醛母汁
将上述试剂溶解在1000mL水中，用氧氧化钠济液或盐酸溶液调节pH至7.2±0.2.并分装在500mL刻度二角瓶中，每瓶不超过350mL，瓶口塞上棉寒，并用牛皮纸包好，用蒸汽压力灭菌器于（121±1)℃灭菌15ntin
6.2.2硫酸亚铁铵溶液：在培养基使用的当天称取1.2品硫酸亚铁铵，在无菌箱（室）内均匀地摊在离紫外线灯30cm处火菌30min，在无菌操作下，把硫酸亚铁铵溶解于事先准备好的无菌水中，混匀。6.2.3维生素C溶液：在培养基使用的当天称取0.4名维生素C，在无菌箱(室)内均匀地摊在离紫外线灯30.cm处灭菌30min。在无菌操作下，把维生素C溶解于事先准备好的无菌水中，混匀6.2.4在无菌操作下，按每100mL培养基各加人1.0mL硫酸铁铵溶液和1.0mL维生素C溶液。6.3无菌稀释水的制备
6.3.1生理盐水的配制：称取8.5g氧化钠溶解在1000mL水中，混匀。6.3.2将生理盐水分装在100ml.磨口三角瓶中，每瓶45ml每个三角瓶塞子和瓶口间插人一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶于的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器于（121士1）℃灭菌15Inin。2
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6.4刻度吸管的灭菌
GB/T14643.5—2009
6.4.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10mm~15mm，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.4.2每支刻度吸管用1条约40mm~50mm宽的牛皮纸条，以45左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多余纸条折叠打结，不使散开。标上度量，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于（160±2）℃灭菌2h。
6.5试管的灭菌
将洗净并烘干后的试管塞上密封的塞子数支捆，每捆管口用牛皮纸包扎，置电热干煤箱中，于（160士2）灭菌2h
6.6采样瓶的灭菌
将洗净并烘干后的1
mL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热干燥箱中，于NIH
（160±2）℃灭菌2h。
6.7硫代硫酸钠灭菌
30cm处灭菌30min。
将硫代硫酸钠改（酒菌箱（室）内，并均勾地摊在离紫外线灯7测定步骤
7.1水样的采集
7.1.1用无菌#
内要灌满水样
关瓶采集被测样品，在取样过程中，要保护瓶口和颈部，防止这些部分受杂菌污染，瓶S
7.1.2若采集水中有余氧，应在采样前，在无菌操作下于无菌采样瓶中加人硫代硫酸钠，加人量为每升水样约0.
7.1.3水样采扇，应立即进行测定，如果在2h内不能进行测定，应把水样放吞冰箱中，于4℃~10℃保存，存放时间不宜超过24h。经冷冻保存后的水样需测定时，从冰箱中取出，于30℃左右活化4h~5h，再进行#了
7.2无茵箱（室
把试验所用的培养基、无菌稀释水、无菌吸管等用品放人无菌箱室），打开紫外线灯灭菌30min.
7.3水样的稀释和接柜
7.3.1水样放人灭过的离箱（室）中，立即用75%乙酵溶液没泡的医用悦脂棉球擦手，点燃无菌箱（室）内的酒精灯。
以下对水样的稀释和接种的操作应在无菌箱（室）内火焰区进行7.3.2选择适宜的稀释度，应使最后一个稀释度接种培养后无硫酸盐还原菌生长，在空白稀释水样瓶上标上稀释度数。
7.3.3用10倍稀释法稀释水样，即用5mL无菌吸管吸取5mL水样注人到45mL空白稀释水中充分摇匀，批时稀释度为10-1
7.3.4另取一支5mL无菌吸管吸取5mL10-1水样注入到第二个稀释水中，充分摇匀，此时稀释度为10-，依次类推，直至需要的稀释度为止7.3.5将水样（包括稀释水样）分别接种于无菌试管中，试管置试管架上，每个稀释度重复接种5管（根据需要也可重复接种3管或4管），每管接种1mL，每接一个稀释度更换一支无菌吸管。7.3.6另取组试管不接水样作为空白7.3.7用事先在水浴上加热至60℃，并迅速冷却到20的无菌培养基灌满试管（7.3.5.7.3.6）盖上密封盖子。
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7.4培养
在生化培养箱中，于(29土1)℃培养21d。8计数与报告
8.1凡产生黑色沉淀并伴有硫化氢臭味的表示有硫酸盐还原菌存在，以“十”（阳性）表示，其余试管以“二”（阴性)表示。
8.2如果空白出现阳性反应，表明测定过程中有污染，本次测定无效。8.3算出10进位稀释管中阳性试管数，以阳性组合指数记录下来。8.4在10进位稀释中多于三个稀释度时，阳性组合的指数只需要用其中依次的三个稀释度，对这三个稀释度的决定是先选出5管全部阳性反应的最大稀释度，然后选出其次相连的两个更高的稀释度，算出阳性组合指数（见表1示例1.2、4）。8.5若按照上条规定的原则选出三个稀释度后，有更高的稀释仍然产生一个阳性试管，就应该将这一个阳性试管并人所选择的最高稀释的阳性结果中（见表1示例3）8.6根据阳性组合的指数，查表（附录A）得出最大可能菌数（MPN）除以阳性组合指数的第一位数字的稀释度数，即为每毫升水样中硫酸盐还原菌的菌数（如果每个稀释度重复接种4管或3管，根据阳性组合的指数查“附录B\表B,1或“附录C”表C,1。表1
精密度
稀释度、生长情况及阳性试管数10-1
阳性组合
9.1由于微生物是不稳定的，精确的试验不能实现，精密度表达仅能按MPN程序。报告方式
个/mL
5.0/10-1-50
25/1025
14/10%=14
3.5/103.5x10m
9.2在样品中细菌的分布是不规则的，有时细菌成倍地吸附到小颗粒上，MPN正确度随着平行管的增加而增加，当使用5个平行管时，每管加1mL样品时测定结果的置信度为95%。HYKAONiKAca-
附录A
（规范性附录）
五个平行管最大可能的菌数
五个平行管最大可能的菌数见表A.1。表A.1此内容来自标准下载网
个/mL
个/mL
个/ml
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个/mL
GB/T14643.5-2009
附录B
（规范性附录）
四个平行管时最大可能菌数
四个平行管时最大可能菌数见表B.1。表B.1
个/mL
个/mL
YKAONiKAca
个/ml
个/ml
附录C
（规范性附录）
三个平行管最大可能的菌数
三个平行管最大可能的菌数见表C.1。表c.1
个/mL
GB/T14643.5—2009
个/ml
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打印日期：2009年8月6日
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中华人民共和国
国家标准
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第5部分：硫酸盐还原菌的测定
MPN法
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开本880×12301/16
2009年7月第版
印张0.75
字数16千字
2009年7月第-次印刷
书号：155066-1-38016
定价16.00元
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