标准规定了工业循环冷却水中铁细菌的测定方法。适用于工业循环冷却水中铁细菌的测定，也适用于原水、生活用水及粘泥中铁细菌的测定。 GB/T 14643.6-2009 工业循环冷却水中菌藻的测定方法 第6部分：铁细菌的测定 MPN法 GB/T14643.6-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 71.040. 40
中华人民共和国国家标准
GB/T14643.6—2009
代替GB/T14643.5—1993
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第6部分：铁细菌的测定
MPN法
Examination of bacleria and algae in industrial circulating cooling water-Part 6.Examination of iron bacteria-MPN test2009-05-18发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2010-02-01实施
CB/T14643《工业循环冷却水菌藻的测定方法》分为以下儿个部分：第1部分：黏液形成菌的测定平血计数法第2部分：七壤菌群的测定平且计数法-第3部分：黏泥真菌的测定平皿计数法第4部分：十壤真菌的测定平Ⅲ计数法第5部分：硫酸盐还原菌的测定MPN法-第6部分：铁细菌的测定MPN法
本部分为GI3/T14643的第6部分。GB/T 14643.6—2009
本部分代替GB/T14643.61993《业循环冷却水中铁细菌的测定MPN法》。
本部分与GB/T14643.61993相比，在技术内容上并无变化，只是对文本结构和文字进行了修改。
本部分的附录A、附录B、附录C为规范性附录。本部分由中国行油和化学工业协会提出：本部分全国化学标推化技术委员会水处理剂分会（SAC/TC53/SC5)归口。本部分负责起草单位：中海油天津化上研究设计院，天津正达科技有限责任公司。本部分主要起草人：朱传俊、张全、邵宏谦。本部分于1993年百次发布。
1范围
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第6部分：铁细菌的测定MPN法
GB/T14643的本部分规定了1业循环冷却水中铁细菌的测定法。GB/T14643.6—2009
木部分适用于工业循环冷却水中铁细菌的测定，也适用原水，生活用水及粘泥中铁细菌的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T11643的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版木。凡是不注Ⅱ期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备（G13/T6032002.ISO6353-1:1982，NEQ
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008ISO3696：1987，MQOD)3方法提要
本法采用多试管发酵技术，在（29土1)℃培养14d，如果试管内棕色消失而且形成揭色或色沉淀，表明阳性反应，采用MPN技术，对被测试样中的铁细菌进行诈数。4试剂和材料
本部分所用试剂，除非另有规定，应使用分析纯试剂和符合GI3/T6682中三级水的规定。试验中所需制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按(G13/T603之规定制备。4.1硫酸镁。
4.2硫酸铵。
4.3磷酸氧一钾。
4.4氯化钙。
4.5硝酸钠。
4.6柠檬酸铁铵。
氯化钠。
氢氧化钠溶液：40g/L。
4.9盐酸溶液:1+11。
硫代硫酸钠，
乙醇溶液：75%（体积分数）。
牛皮纸。bzxz.net
4. 13医用脱脂棉。
5仪器、设备
5.1无菌箱(弃)或超净T作台。
5.2蒸汽压力灭菌器。
5.3生化培养箱。
GB/T 14643,6—2009
5.4电热下燥箱：温度可控制在60℃～280℃5.5刻度吸管：l ml。
5. 6刻度吸管.5 mL。
5.7试管：150mmx15mm
5.8试管架。
5.9磨几=角瓶:100 mL：
5.t0磨口试剂瓶:1 0G0 ml.。
5.11 容量瓶:1 000 mL.
6试验前准备
6.1培养基的制备
称取下列试剂：
硫酸铵
磷酸氢二钾
氮化钙
硝酸钠
柠檬酸铁铵
将.述试剂落解在1000mL水中，用氧氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH至6.8士0.2,并分装在试管中，每管5mL，塞上棉塞，数支，每捆管口用牛皮纸包扎，用蒸汽压力灭菌器丁<121上1）℃灭菌15 min。
6.2无菌稀释水的制备
6.2.1生理盐水的配制:称取8.5 g氧化钠溶解在1000 mL水中,混匀。6.2.2将牛单盐水分装在100mL磨口三角瓶中，每瓶45ml。每个三角瓶塞子和瓶口间拥入一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器于（121土1)℃灭菌15nin。6.3刻度吸管的灭菌
6.3.1将洗净并烘干后的刻度吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度人约10um~15mm，花不穴露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6. 3.2每支刻度吸管用一条约 40 m-~50 mm 宽的4皮纸条,以 45°左右角度螺旋形卷起米,吸管的尖端在头部，粗端用多余的纸条斯叠打结，不使散开，标上度量，若「支扎成一束，置出热干燥箱中，于（160三2)℃灭菌2h。
6.4采样瓶的灭菌
将洗净并烘十后的1000mL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热干燥箱中，于(160±2)℃灭菌2h。
6.5硫代硫酸钠灭菌
将硫代蔬酸钠放人无菌箱（室)内，并均纠地摊在离紫外线灯30cm处，灭菌30min。7浏定步
7.1水样的采集
7.1.1用无来样瓶采集被测样品，在采样过程中，要保护瓶口和颈部，防止这些部分受杂菌污染，瓶内要留下足够的空间，以备测定之前摇。7.1.2若采集的水中有余氯，应在采样前，在无菌操作下，于无菌采样瓶中加人火过菌的硫代硫酸钠，加人的量为每升水样约0.1g，
7.1.3水样采集后应立即进行测定,如果在2h内不能进行测定,应把水样放在冰箱中于4～10℃2
GB/T 14643.6—2D09
保存，存放时间不宜超过24h。经冷冻保存后的水样需测定时，从冰籍中取出，于30℃左右活化4h~~5 h,再进行测定。
7.2无菌箱(室)灭茵
把试验所用的无菌培养基、无菌稀释水、无菌吸管等用品放人无菌箱（室）内，打开紫外线灯灭菌30 min.
7.3水样的稀释和接种
7.3.1水样放人灭过菌的光菌箱（室)中，立即用75%乙醇溶液浸泡的医用脱脂球擦手，点燃无菌箱(室)内的酒精灯。
对水样的稀释和接种的操作应在尤菌箱（牢)内的火焰这进行。7.3.2选择适宜的稀释度，应使最后---个稀释度接种培养后无铁细菌生长，在空白稀释水样瓶上标上稀释度数。
7.3.3用10倍稀释法稀释水样，即用5mL无菌吸管吸圾5mL水样注人到45mL空白稀释水中充分揉勾，此时稀释度为101。
7.3.4另取一支5mL无菌吸管吸取5mL稀释度为10水样注人到第二个稀释水中，充分摇勾此时稀释度为102，依次类推，直至需要的稀释度为止。7.3.5将水样（包括稀释水样）分别接种于装有培养基的试管中，试管置试管架上，每个稀释度重复接种5管（根据要也可重复接种3臂或4管），每管接种1ml，每接一个稀释度史换·支无菌吸管。7.3.6另取--组试管培养基不接水样，作为空白。7.4培养
在牛化培养箱中了-(29士1)℃培养 14 d。8计数与报告
8.1凡产生褐色或熙色沉淀月原培养基中棕色消失变为透明状者，表明有铁细菌存在，以“+”（阳性）表示，其余试管以“二”(阴性)表示。8.2如果空白出现阳性反应，表明测定过程中有污染，本次测定无效。8.3：算出10进位稀释筐中阻性试筹数，以阻性组合指数记录下来。8.4在10进位稀释中多于三个稀释度时，阳性组合的指数只需要用其中依次的三个稀释度，对这三个稀释度的决定是先选出5算全部阿性反应的最大稀释度，然后选出其次相连的两个更高的稀释度，算出阳性组合指数(见表1示例1.2,4)。8.5荐按照8.1 所规定的原则选出三个释度后,有更高的稀释仍然产生一个阳性试管,就应该将这-个阳性试管并人所选择的最高稀释的阳性结果中（见表1示例3)。8.6根据阳性组合的指数，查表A.1得出最大可能的菌数(MFN)除以阳性组合指数的第：-位数字的稀释度数，即为每毫升水样中铁细菌的菌数（如果每个稀释度重复接种4管或3管，根据阳性组合的指数查“附录 B”表 B. 1 或“附录 C\表 C, 1)。表1
稀释度、生长情况及阳性试管数10-
阳性组合
报告方式
5. 0/10-1-50
25/10°—25
14/10c-14
3. 5/10-8 3. 5× 108
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9精密度
9.1由于微生物是不稳定的，精确的试验不能实现，精密度的表达仅能按MPN程序，2在样品中细菌的分布是不规则的，有时细菌成倍地吸附到小颗粒上，MPN正确度随着半行管的9.2
增而增加，当使用5个平行管，每管加1mL.样品时，测定结果的置信度为95%，.u·
附录A
（规范性附录）
五个平行管最大可能的菌数
五个平行管最大可能的菌数见表A.1。表A.1
....-.
个/mL
GB/T 14643.6--2009
个/mL
GB/T14643.6—2009
附录B
（规范性附录）
四个苹行管时最大可能菌数
四个平行管时最大可能菌数见表B.1。表B.1
个/mL
个/mL
.... .
附录℃
(规范性附录）
三个平行管最大可能的菌数
三个行管最人可能的菌数见表C.1。表c.1
个/ml
个/nL
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