GB/T 24800.1-2009 化妆品中九种四环素类抗生素的测定 高效液相色谱法 GB/T24800.1-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 71. 100. 70
中华人民北和国国家标准
GB/T24800.1--2009
化妆品中九种四环素类抗生素的测定高效液相色谱法
Determination of 9 tetracyclines in cosmetics byhigh performance liquid chromatography method2009-11-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2010-05-01实施
本标的附录A为资料性附录。
本标摊内中国轻亡业联合会提出。前言
本标雅由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。GB/T24800.1—2009
本标准负资起草单位：中国检验检疫科学研究院，上海市日用化学工业研究所、上游香料研究所。本标雅土婴起草人：武婷、土超、马强、张庆、席广城、肖海清、李琼、崔俭杰。http：//foodmate.netGB/T 24800.1—2009
本标准中的被测物质足我国化妆品卫生规范规定的禁用物质，不得作为化妆品牛产原料即细分添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时，则化妆品成品应符合《化妆品.卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的可预见的使用条件下，不得对人体健康产牛危害。月前我国尚未规定这些物质的限值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法，CHINA
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】范围
化妆品中九种四环素类抗生素的测定高效液相色谱法
本标准规定了化妆品中九种四环素类抗生素的高效液相色谱测定方法。本标准适用于皮肤护理类化妆品中儿种四环素抗生素的测定。CB/T24800.12009
本标准二甲胺四环素的检出限为25mg/kg，土得素、四环素，去甲基金霉素的检出限为10mg/kg，金舞素、美他坏素、多西环的检出限为 5 ing/kg,差向脱水四坏素和脱水四环素的检出限为2. 5 mg/kg.
一甲胶四环素的定量限为50mg/kg，土霉素，四环素，去甲基金需素的定量限为25mg/kg，金霜素、美他环索、多西环素的定量限为10mg/k名，差同脱水四环素和脱水四环素的定量限为5mR/kg。2原理
以甲醇为落剂，超声提取、离心，0.（DAD)的液相色智议检测，外标法定量S
3试剂和材料
外，式剂均为分析纯。
除另有规
3.1甲醇：色纯。
3.2Z.腈：色谱纯
5μm的有机滤膜过滤，溶液注人配有极管阵列检测器纯度不小于97.0%，土得素，纯度不小于97.9%，金霉素，纯度不小于99.0%，多四3.3九种四环素
环素，纯度不小于
环素，纯度不小于
5%；美他环素，纯度不小于99.6%，去甲基金霉素，纯度不小于99.0%，二甲胺四，脱水四环素，纯度不小于90.0%，差向脱水四环素，纯度不小于90.0%。3.4九种四环素类抗生真标准储备液：催确称取各类四环素（33）0.1精确到0.0001g，分别置于50mL烧杯中，加适量甲落解，溶液定量移入100mL容量瓶中，用用醇稀释至刻度，混勾，即得浓度为1000g门.的标准储备液
九种四环素类抗生素混合乐准储备液：分别移取上述标准储备液（3A)各10m1.至100《nl.容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得浓度为100mg/L的标准混合储备液3.5九种四环素类抗生素标准工作溶液：用甲醇将上述混合标准储备液（3.5)分别配成一系列浓度为1mg/L、2mg/L，5mg/1..10mg/L、20mg/L50mg/L的标准工作咨液，冰箱冷避保存，可使一周，3. 60. 01 mol/1.草酸溶液:称瑕草酸(C,H,0.：2H,O)1. 26 g,精确至0. 001 g,于 50 mL烧杯中,加水溶解后,移人 1 000 mL容量瓶,用水定容至刻度,混匀,即得 D.01 mol/L 的草酸溶液。4仪器
4. 1液相色谱仪,配有一极管阵列检测器。4.2微量进样器,10 μL。
4.3超声波清洗器
4.4离心机，人十5000r/min
4.5溶剂过滤器和0.45μm有机过滤膜。http
nodmatnn
GB/T 24800.1—-2009
4.6具塞比色管,10 mL，
5测定步骤
5. 1样品处理
称取化妆品试样约0.2g，精确均0.001g，于10mL具塞比色管中，加人约8ml.甲尊，在超声波清洗器中超声振荡30min，冷却至室温后，加甲醇定容至刻度。取部分溶液放入离心管中，在离心机上」5000r/min离心20min，离心后的上清液经0.45μm有机滤膜过滤，滤液供测定用。5. 2测定
5.？.1色谱条件
5.2.1.1色谱柱:Krorasil C：柱(250 nm×4.6 mm(内径),5 μm,或相当者）。5.2.1.2流动相：A甲醇与乙的混合溶液(1+3,V/V),B:0.01mo/I.的草酸溶液（3.7),梯度洗脱条件见表1。
表 1方法的梯度洗脱条件
时间/mii
5.2. 1. 3 流速:1.0 mL/ min。A/%
5. 2. 1. 4 检测波长:程序可变波长:0~~4. 00 min 为 350 nm,4, 01 min~~12. 00 min 为 270 rm。 5.2. 1. 5 杜温25 C 。
5. 2. 1. 6进样量:10 μL。
5.2.2标准工作曲线绘制
分别移取-系列浓度为1.0mg/1.、2.0mg/L、5.0g/L、10mg/L.20mg/L，50mg/L的标准工作溶液，按色谱条件（5.2.1)进行测定，记录色谱峰面积，以色谱峰的峰函积为纵坐标，对应的辫淤浓度为横坐标作图，绘制标准上作曲线。九种四环素的标雅液相色谱图参见附录A的图A，1：5.7.3试样测定
用微量注射器吸取试样溶液(5.1)注人液相色谱仪，按色谱条件(5.2.1)进行测定，记录色谱峰的保留时阅和蜂面积，出色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的浓度。样品溶液中的被测物响应值均应在仪器测定的线性范围之内。含量高的试样可取适量试样溶液用流动相稀释后进行测定。5.2.4定性确认
糍相色谱仪对样品进行定性测定，进行样品测定时，如果检出四环素类抗生素的色谱峰的保留时血与标准品相致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱相一致，则可初步确认样品中存在被测四环素类抗生素。必要时，阳性样品需用其他方法进行确认试验。
5.3平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行诚验测定。5. 4空白试验
除不称取试样外，均按上述长骤进行。6结果计算
结果按式（)计算（让算结果应扣除究白俏）2
ht
式中：
X，样品中被测四环素的质量浓度,单位为毫克每于克（mg/kg);Ci
一标推曲线查得被测四环素的浓度，单位为毫克每升（rmg/I.)：V一样品稀释后的总体积，单位为案升（mL)；r-
样品质量，单位为克（g）。
7“方法检出限与定限
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二印胺四环素的检出限为25 mg/kg,土素、匹环素，去甲基金霉素的检出限为10 mg/k+金霉素、美他环素、多西环素的检出限为5mg/kg，差向脱水四环索和脱水四环素的检出限为2.5mg/kg。二中胺四环素的定量限为50mg/kg，土霉素、四环素.去甲基金素的定量限为25tmg/kg，金霉素、美他环素老西环素的定量限为101g/kg，差向脱水四环素和脱水四环索的定量限为5.mg/kg，8回收率与精密度
在添加浓度5mg/kg～500mg/kg浓度范围内，同收率在85%~110%之间，相对标准偏差小于10%.
9充许差wwW.bzxz.Net
在重复性条件下获得的网次独立测定结果的绝对差值不应超过算术半均值的10%。GB/T 24800.1-—2009
一甲胺四环素(3. 189 min);
土需素(5. 450 anin);
四环素（5.805min);
云甲基金释素(6.340 min):
金露索(7.017 min);
炎他环索（7.2.90min）：
多西环案（7,712min)；
差向脱水叫环素(7.945 min);
脱水四环素(9.159 min)。
附录A
（资料性时录）
标准物质的液相色谱图
图A,1九种四环素的标准液相色谱图GB/T 24800. 1-2009
打印日期：2010个年2月2HF007
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