GB/T 25224.2-2010
基本信息
标准号： GB/T 25224.2-2010
中文名称：动植物油脂植物油中豆甾二烯的测定第2部分：高效液相色谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 动植物 油脂 植物油 甾二烯 测定 高效 色谱法
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
GB/T 25224.2-2010 动植物油脂植物油中豆甾二烯的测定第2部分：高效液相色谱法
GB/T25224.2-2010
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标准内容
ICS 67. 200. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T 25224,2—2010/IS0 15788-2:2003动植物油脂
植物油中豆留二烯的测定
第2部分：高效液相色谱法
Animal and vegetable fats and oils-Determination of stigmastadienes in vegetable oils---Part 2 : Method using high-performance liquid chromatography (HPLC)(ISO 15788-2:2003,IDT)
2010-09-26 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2011-03-01实施
中华人民共和国
国家标准
动植物油脂植物油中豆笛二烯的测定第2部分高效液相色谱法
GB/T 25224.2 -201G/ISO 15788-2:2003#
中国标准出版社山版发行
北京复兴门外－里河北街16号
邮政编码：100045
网址 spc. net. cn
电话：6852394668517548
中国标滩出版社案皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
并本 880×12301/16
2010年11月第一版
印张0.75学数15下字
2010年11月第一次印
#：155066-1-46682
定价16.00元
由本社发行中心调换Www.bzxZ.net
如有印装差错
有侵权必究
版权专有
举报电话：(010)68533533
http：//foodmate.net/前言
GB/T 25224.2--2010/IS0 15788-2.2003植物油中立解二烯的测定第2部分：高效液本标准等同采用IS015788-2：2003《动植物油脂相色谱法》（英文版）。
为了便下使用，本标推对ISO1578822003进行了下列编辑性修改：一蒋“本国际标准\改为“本标准”，—删除了国际标雅的前言；
·用小数点“”代替国际标准中作为小数点的逗号“，”；规范性引用文件中用现行国家标准GB/T6682代替ISO3696：1987，GI3/T25223代替IS0 12228:1999;
对公式进行了编号；
对第5章中试剂的排列次序进行了调整。本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家粮食局提山，
本标准由全国粮油标准化技术委员会归。本标准负责起草单位：南京财经人学。本标准参与起草单位：国家粮食局科学研究院。本标淮主要起草人：袁，江海蜂、土立峰、鞠兴荣、薛雅琳。httr
1范围
GB/T25224.2—2010/IS0 15788-2:2003动植物油脂植物油中豆留二烯的测定第2部分：高效液相色谱法
本标准规定了高效液相色谱法定植物油中简醇二烯，淇是豆留二烯的术语、原理、试剂仪器设备、试样制备、操作步骤、结果表示和精密度的要求。留萨二烯是油脂潔白处理和水蒸气洗涤、脱臭过程中由备醇类物质脱水成的。本方法也适用于测定末精炼油如初榨橄概油中是否存在精炼植物油的筛选方法。注：ISO157881是植物油中豆角二烯测定的基准方法，而本方法可作为一种快速筛选方法。其精密度（参见附录A)可用IS15788-1规定的液色谱法进行校验，对-初榨橄榄油样品，接近上国际组织(I00C,EC)规定的限定值。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标推达成协议的备方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（G13/T66822008，1SO3696：1987，MOD）GB/T25223动植物油脂衡醇组成和伤醇总量的测定气相色谐法（GB/T252232010
ISO 12228;1999,IDT)
3术语与定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
豆笛二烯含量 stigmastadienes content本标准规定条件下，通过相色谱测定的臣留一烯的含量。以毫克舞千克（I1名/g)表示。3.2
留醇二烯含盘steradiencscontent本标准规定条件下，通过液相色谱测定的所有留醇二烯的含量。以毫克每千克（mg/kg)表示。4原理
在硅胶柱中用石油醚将留醇二烯作为非极性脂类纽分从脂类物质中分离出米，石油醚洗脱液经浓缩后，用反相高效液相谱仪紫外检测器在235nm处检测。按样品类别可采用伪标法定量或外标法定录。
5试剂
暂告：应注意危险品操作规则，并遵循技术、组织和个人的安全操作规范。除非另有说明外,均使用分析纯试剂。1
GB/T 25224.2--2010/IS0 15788-2:20035.1水：符合GB/T 6682一级水要求。5,2桂层析用硅胶 60:粒径 0.063 InI～0. 200 mm,或 0.063 mm～0.100 tml),硅胶含水尾2g/100g。硅胶置于瓷盘内，在烘箱中160℃烘干12h，然后在-燥器内冷却至室温，调整硅胶含水扇为2g/100g，称收98g（精确至1g）1燥后的硅胶置于具塞磨锥形瓶中，加2g水（精确允0.01.g），用力振播1min，在密闭容器中过夜。5.3石油酵，沸40℃~60℃。
5.4乙晴:色谱纯。
5.5叔基中基醚：色谱纯，
5.6异辛烷。
5.7△3,5-胆甾二烯2)：纯度≥95%。以5c-备烷作为内标物测定胆衡二烯的纯度，按（FB/T25223气相色谱法测定醇气相色谱条件操作，氨火焰离子化检测器的响应因子为1.0，应考虑到测定留醇一烯时所用的浓度。5.8胆衡烧：纯度≥95%。
5.9△3,5-胆留二烯标准储备溶液和标准应用落液；5.9.1△3,5-朋留二烯储备液：浓度1mg/ml.。称取△3,5-胆留二烯（5.7)50.0mg（精确至0.1mg）于50ml.容量瓶中，用叔基甲基醚（5.5）溶解和稀释,并定容率刻度。
5.9.2A3,5-胆留一烯标准应用溶液（用于液相色谱）：5.9.2.1外标应用溶液：浓度10μg/ml.吸取100μLA3,5-胆陷二烯溶液（5.9.1)于10mL量瓶中，用乙腈-叔/基甲基醚（5.9.4)定容至刻度。每20μI.落液中含有0.20μ，作为高效液相色谱外标标准溶液。标雅溶液的浓度取决于被分析油的种类。当初榜油中豆留一烯含量小丁0.5mg/kg，外标溶液浓度应为0.2μg/ml.5.9.2.2内标应用溶液：浓度2μg/ml.。吸取100μL△3，5-胆衡二烯溶液（5.9.1）于50mL容量瓶中，用石油醚（5.3）稀释至刻度。标准溶液的浓度取决于被分析油的种类。当初榨油中豆简二烯含量小于0.5mg/kg，内标溶液浓度为0.2 μg/ml.。
5.9.35a-胆留烷标推溶液（用于气相色谱）：浓度1mg/mL称取5-胍笛烷3（5.8)50.0mg（精确至0.1mg）于50ml.容量瓶巾，用异辛烷（5.6）稀释至刻度。用该溶液标定A3，5.朋留二烯（5.9.2)纯度时，操作如下：分别移取1nL5α胆留烷标准溶液和1mLA3，5-胆留一.烯储备溶液（5.9.1)于10tL容氧瓶中（分流进样）或于50mL容量瓶巾（柱头进样），并用异辛烷稀释至刻度。
5.9.4乙睛-叔」基甲基醚：V(乙腈）+V(叔」基甲基醚）=1+1。5.9.5色谱流动相：V（乙腈）+V（基甲基醚）=70+30,脱气。6仪器设备
实验究常规仪器，以及下列的设备。）如：No7734ur15101,EMerek公司，64271Tarmstart1，Gcrany，给出这信息是为了方便本标准的使用者，并不示对该产缺的指定认可，2）如：NoC6012，Sigma化学份有限公可，iranwalrlerWeg30，82041eisenhofen.Cermany。给山这一信息是为了方他本标准的使用者，并不表示对该产品的指定认可.3）如：NoC8003，Sigma化学股份有限公可，irinwnlelerWeg30.82041>eisenlbofetCermany，给出这一信息为广方便本标准的使若，并不表示对该产品的指定认可。2
6.1锦花或玻璃棉：棉花需用石油提取脱脂81。GB/T 25224.2-2010/ISO 15788-2:20036.2玻璃层析柱：内径10mm，长150mm配有25ml储液器。6.3锥彤瓶：容量25ml.
6. 4容量瓶:容量 5 mL.、10 tml50 tnI.6.5烧杯：多种规格
6.6高效液相色谱系统（HPL.C)：包含高压、进样器（20uL利100μL定量环）、紫外检测器（测定波长235nm）及积分系统。
6.7高效液相色谱柱：长250mm，内径4.0mm或1.6mm,装有RPl8型反相固定相，粒径5μtn*）。6.8自动进样小瓶：合适的容量。6.9旋转蒸发器:具水浴装置。
7扦样
实验室收刻的样品应其有真实的代表性，运输和储行过程市不得受揽和变质扦样不是本标准规定的内，推荐采用GB/T5524的方法。8试样制备
8.1实验准备
测试前需去除油脂样品中的水分。如果需要，将约5g样品快速加热到100℃，然后离心去水。层析杜（6.2)底端放置小研棉花或玻璃棉（6.1），然后加入5g硅胶（5.2），并在木板上轻轻敲实。8.2外标法
称取试样约500mg（精确至1tng）于小烧杯中，用2mL石油醚（5.3)溶解后，倒人打开活塞的层柱(8.1)中。每次用2m1.石油醚冲洗烧杯两次，也倒人层析柱。当溶剂液面到达填料的顶部时，立即用20mL石油醚洗脱非极性物质，并收集于罐形瓶（6.3）中。在凝转蒸发器（6.9）上蒸下辫剂，用500μL乙睛叔下基甲基醚(5.9.4)溶解残留物。8.3内标法
使用本方法时，应确保样品中不含△3,5-胆鱼一烯(例如：精炼油）。称取样品约 500 切g(精确至1拍g）于小烧杯巾，加入1.0mI.△3,5-胆留二烯内标应用液（5.9.2.2）。用2mL行油醚（5.3）溶解后倒人打开活塞的层析柱（8.1)市。每次用2mI.石油醛冲洗烧杯两次，也衡人层析柱。当溶剂液面到达填料的顶部时，立即用20 mL行油醚洗脱非极性物质，并收集于锥形瓶（6.3)中。在旋转蒸发器(6.9)上蒸于溶剂,用500μ1.乙睛-叔丁基甲基醚（5.9.4)解残留物。9操作步骤
9.1高效液相色谱(HPLC)
摊荐采用下列色谱条件
固定析:RP-18,5 μm;
色谱柱：长250mtn,内径4.f mm
流动相：乙腈-寂丁基甲基醚(5.9,5)；流速:1 ml./min;
进样量：20μI.100L（逃样量取决于被测浓度的估计值）检测器：紫外检测器.235nm。
4）如Suptrsphere100.R18endcapped,No.1.16858，EMerck，64271Darmstad1.Gertunty，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的指定认可。3
GB/T 25224.2--2010/ISO 15788-2:2003留醇二烯的鉴定
用表1所示的相对保留时间进行色谱峰的鉴别（色谱图参见附录B）。册留二烯作为参比物，其保留时间大约在 20 tin 至25 inin。表1
阐醇衍尘物
胆笛烯
萄葡二烯
莱笛二烯
立笛·烯
留醇衍生物的相对保蜜时间
相对保留时间(RRT)
注：根据被测肪或油脂种类，有时希望进一步分析留醇二烯和留醇三烯的组分。可注人精炼油胎脂样品或白制豆渐二烯标推品进行峰的鉴定。在给定的色游条件下，初榨油（未漂白的）的色谱阁上，留醇一烯出峰位置上不会出现在何峰。
结果表示
10.1外标法
按式(1)通过外标物胆留二烯的量计算出豆留二烯或醇二烯的含量：E
式中：
样品中豆筛二烯或留醇二烯的含量，单位为毫克每-克（mg/kg）；As
3，5-豆角一烯的峰面积或留醇二烯的蜂面积；M—-3，5-胆二烯（外标物）进样质量，单位为微克（μg）（5.9.2.1）；Ac-
-3,5-册留二烯的峰面积（外标物;若它的峰分裂，则以面积总和计算，如附录B所示）；油脂试样的质量，单位为克（g)（8.2)；J稀释因子（对于样品体积500μI.和进样体积20μL，f=25）。所用的胆陷二烯的纯度带检测（见5.9.3），纯度不低于95%时，不需要进行校正。否则，必须校正。胆陷二烯和胆留烷采用相同的响应系数。测试结果保留位小数。
10.2内标法
按式(2)通过内标物含量让算豆留二烯或留醇二烯的含量：er
式中：
-豆笛二烯或留醇二烯的含量，单位为毫克每T克（mg/kg）：—3，5衡二烯的峰面积或留醇二烯的蜂面积；Mr
3，5-胆留二烯（内标物）进样质量，单位微克（μg）（5.9.2.2）A：（-3,5·胆循二烯的峰面积（内标物；若它的峰分裂，则以面积总和计算，如附录13所示）；m——-脂试样的质量，单位为克（g)(8.3)。(2）
所用的胆陷二烯的纯度需检测（见5.9.3），纯度不低于95%时，不需婴近行校正，否则应校正。旧留二烯和胆留烷采用相同的响应系数。4
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测试结果保留两位小数。
11精密度
11.1重复试验
GB/T 25224.22010/IS0 15788-2:2003附录A汇总了本标准方法实验室间测试精密度的结果，对于其他浓度范围和测试物质来说.本实验测试数据也许并不适用。
11.2重复性
在同-实验室，由同…-操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时闻内对同一被测对象获得的两次独立测定结果的绝对差值大于表 A, 1 中给出的重复性限值的情况不超过 5%。11.3再现性
在不同实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被測对象两次独立诞定结果的绝对差值大于表A，1中给出的再现性限R值的情况不超过5%。测试报告
测试报告应详细说明：
标识样品的全部必需信息；
采样方法（如果己知);
一本标准所涉及的测试方法；
一本标推末详细说明的、任选的、偶尔的可能影响测定结果的操作细节；测试结果；
…如进行了重复性检验，则报告最终结果，5
品伙伴网ht
CB/T25224.2--2010/1S015788-2:2003附录A
【资料性附录】
实验室间比对试验结果
1998年由德国纽织了15个实验宰对5种不同样品进行国际实验室闻间比对战验，建文了本方法的精密度。结果按ISO5725-1和ISO5725-2统计分析，结果如表A.1所示。表 A. 1实验室间比对试验结果
参加试验的实验室数
剔除离群值后的实验空数
平均值/（mg/kg）
重复性标准偏差,S./(mg/kg)
重复性变异系数/%
重复性限，r（=S,×2.8)/（mg/kg）再现性标准偏差，Sr/（mg/kg）再现性变异系数/%
再现性限,R(R-Sr X2. &)/(mg/kg)初橄榄油
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在初榨橄油中加人不同蛋精炼做榄D
色谱图示例见图B.1。
峰的整别
峰Ia/1(17.5 min/20.3min）：胆留.-烯;附录B
（资料性附录）
色谱图示例
峰2（21,& min)：芸苔笛烯（主要为 canpestadiene)；峰3（23. 6 Inin):豆留二烯。
注：在有些色谱柱上峰 1a 和峰 1 不分开。色谱图A：特级初榨橄榄油，末检出豆留二烯。色增图IB:含 0.25 mg/kg豆笛： 烯的橄榄油。色谱图C：含0.25mg/kg豆留二烯的部分精炼植物油GB/T 25224.2--2010/IS0 15788-2:200325 mv
图B.1色谱图示例
合品伙伴网httn
GB/T25224.2—2010/IS0 15788-2.2003参考文献
[1G3/T 55242008动植物油脂托样(ISO5555:2001,IDT)[2] IS0 5725-1:1994 Accuracy (irueness and precision) of measurcment mcthodis andresults-Part l:General principles and definitions.[3] IS0 5725-2:l994Accuracy (trueress and precision) of measurcment methads andtesulis-Part 2:Basic method fur the determination of repcatability and reprodurjbilily of e standardmcasurcmcnt nicthod.
1.4 : SCHULTE E, Determination of edible fat refining hy HPI.C of 3, 5-sletadienes. Fat ScilTechnol,,96,1994,24-128.
[5- ILINBUR< R. G. and COX R. H. Stigmasta-3,5,22 triene and di-stigmastcryl ether. Can. J.Chem. , 35,1957,1237-1238.
版权专有侵权必究
书号：155066140682
GB/T 25224.2-2010
打印/1期：2010年12月15HF047
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中华人民共和国国家标准
GB/T 25224,2—2010/IS0 15788-2:2003动植物油脂
植物油中豆留二烯的测定
第2部分：高效液相色谱法
Animal and vegetable fats and oils-Determination of stigmastadienes in vegetable oils---Part 2 : Method using high-performance liquid chromatography (HPLC)(ISO 15788-2:2003,IDT)
2010-09-26 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2011-03-01实施
中华人民共和国
国家标准
动植物油脂植物油中豆笛二烯的测定第2部分高效液相色谱法
GB/T 25224.2 -201G/ISO 15788-2:2003#
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北京复兴门外－里河北街16号
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电话：6852394668517548
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2010年11月第一版
印张0.75学数15下字
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GB/T 25224.2--2010/IS0 15788-2.2003植物油中立解二烯的测定第2部分：高效液本标准等同采用IS015788-2：2003《动植物油脂相色谱法》（英文版）。
为了便下使用，本标推对ISO1578822003进行了下列编辑性修改：一蒋“本国际标准\改为“本标准”，—删除了国际标雅的前言；
·用小数点“”代替国际标准中作为小数点的逗号“，”；规范性引用文件中用现行国家标准GB/T6682代替ISO3696：1987，GI3/T25223代替IS0 12228:1999;
对公式进行了编号；
对第5章中试剂的排列次序进行了调整。本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家粮食局提山，
本标准由全国粮油标准化技术委员会归。本标准负责起草单位：南京财经人学。本标准参与起草单位：国家粮食局科学研究院。本标淮主要起草人：袁，江海蜂、土立峰、鞠兴荣、薛雅琳。httr
1范围
GB/T25224.2—2010/IS0 15788-2:2003动植物油脂植物油中豆留二烯的测定第2部分：高效液相色谱法
本标准规定了高效液相色谱法定植物油中简醇二烯，淇是豆留二烯的术语、原理、试剂仪器设备、试样制备、操作步骤、结果表示和精密度的要求。留萨二烯是油脂潔白处理和水蒸气洗涤、脱臭过程中由备醇类物质脱水成的。本方法也适用于测定末精炼油如初榨橄概油中是否存在精炼植物油的筛选方法。注：ISO157881是植物油中豆角二烯测定的基准方法，而本方法可作为一种快速筛选方法。其精密度（参见附录A)可用IS15788-1规定的液色谱法进行校验，对-初榨橄榄油样品，接近上国际组织(I00C,EC)规定的限定值。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标推达成协议的备方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（G13/T66822008，1SO3696：1987，MOD）GB/T25223动植物油脂衡醇组成和伤醇总量的测定气相色谐法（GB/T252232010
ISO 12228;1999,IDT)
3术语与定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
豆笛二烯含量 stigmastadienes content本标准规定条件下，通过相色谱测定的臣留一烯的含量。以毫克舞千克（I1名/g)表示。3.2
留醇二烯含盘steradiencscontent本标准规定条件下，通过液相色谱测定的所有留醇二烯的含量。以毫克每千克（mg/kg)表示。4原理
在硅胶柱中用石油醚将留醇二烯作为非极性脂类纽分从脂类物质中分离出米，石油醚洗脱液经浓缩后，用反相高效液相谱仪紫外检测器在235nm处检测。按样品类别可采用伪标法定量或外标法定录。
5试剂
暂告：应注意危险品操作规则，并遵循技术、组织和个人的安全操作规范。除非另有说明外,均使用分析纯试剂。1
GB/T 25224.2--2010/IS0 15788-2:20035.1水：符合GB/T 6682一级水要求。5,2桂层析用硅胶 60:粒径 0.063 InI～0. 200 mm,或 0.063 mm～0.100 tml),硅胶含水尾2g/100g。硅胶置于瓷盘内，在烘箱中160℃烘干12h，然后在-燥器内冷却至室温，调整硅胶含水扇为2g/100g，称收98g（精确至1g）1燥后的硅胶置于具塞磨锥形瓶中，加2g水（精确允0.01.g），用力振播1min，在密闭容器中过夜。5.3石油酵，沸40℃~60℃。
5.4乙晴:色谱纯。
5.5叔基中基醚：色谱纯，
5.6异辛烷。
5.7△3,5-胆甾二烯2)：纯度≥95%。以5c-备烷作为内标物测定胆衡二烯的纯度，按（FB/T25223气相色谱法测定醇气相色谱条件操作，氨火焰离子化检测器的响应因子为1.0，应考虑到测定留醇一烯时所用的浓度。5.8胆衡烧：纯度≥95%。
5.9△3,5-胆留二烯标准储备溶液和标准应用落液；5.9.1△3,5-朋留二烯储备液：浓度1mg/ml.。称取△3,5-胆留二烯（5.7)50.0mg（精确至0.1mg）于50ml.容量瓶中，用叔基甲基醚（5.5）溶解和稀释,并定容率刻度。
5.9.2A3,5-胆留一烯标准应用溶液（用于液相色谱）：5.9.2.1外标应用溶液：浓度10μg/ml.吸取100μLA3,5-胆陷二烯溶液（5.9.1)于10mL量瓶中，用乙腈-叔/基甲基醚（5.9.4)定容至刻度。每20μI.落液中含有0.20μ，作为高效液相色谱外标标准溶液。标雅溶液的浓度取决于被分析油的种类。当初榜油中豆留一烯含量小丁0.5mg/kg，外标溶液浓度应为0.2μg/ml.5.9.2.2内标应用溶液：浓度2μg/ml.。吸取100μL△3，5-胆衡二烯溶液（5.9.1）于50mL容量瓶中，用石油醚（5.3）稀释至刻度。标准溶液的浓度取决于被分析油的种类。当初榨油中豆简二烯含量小于0.5mg/kg，内标溶液浓度为0.2 μg/ml.。
5.9.35a-胆留烷标推溶液（用于气相色谱）：浓度1mg/mL称取5-胍笛烷3（5.8)50.0mg（精确至0.1mg）于50ml.容量瓶巾，用异辛烷（5.6）稀释至刻度。用该溶液标定A3，5.朋留二烯（5.9.2)纯度时，操作如下：分别移取1nL5α胆留烷标准溶液和1mLA3，5-胆留一.烯储备溶液（5.9.1)于10tL容氧瓶中（分流进样）或于50mL容量瓶巾（柱头进样），并用异辛烷稀释至刻度。
5.9.4乙睛-叔」基甲基醚：V(乙腈）+V(叔」基甲基醚）=1+1。5.9.5色谱流动相：V（乙腈）+V（基甲基醚）=70+30,脱气。6仪器设备
实验究常规仪器，以及下列的设备。）如：No7734ur15101,EMerek公司，64271Tarmstart1，Gcrany，给出这信息是为了方便本标准的使用者，并不示对该产缺的指定认可，2）如：NoC6012，Sigma化学份有限公可，iranwalrlerWeg30，82041eisenhofen.Cermany。给山这一信息是为了方他本标准的使用者，并不表示对该产品的指定认可.3）如：NoC8003，Sigma化学股份有限公可，irinwnlelerWeg30.82041>eisenlbofetCermany，给出这一信息为广方便本标准的使若，并不表示对该产品的指定认可。2
6.1锦花或玻璃棉：棉花需用石油提取脱脂81。GB/T 25224.2-2010/ISO 15788-2:20036.2玻璃层析柱：内径10mm，长150mm配有25ml储液器。6.3锥彤瓶：容量25ml.
6. 4容量瓶:容量 5 mL.、10 tml50 tnI.6.5烧杯：多种规格
6.6高效液相色谱系统（HPL.C)：包含高压、进样器（20uL利100μL定量环）、紫外检测器（测定波长235nm）及积分系统。
6.7高效液相色谱柱：长250mm，内径4.0mm或1.6mm,装有RPl8型反相固定相，粒径5μtn*）。6.8自动进样小瓶：合适的容量。6.9旋转蒸发器:具水浴装置。
7扦样
实验室收刻的样品应其有真实的代表性，运输和储行过程市不得受揽和变质扦样不是本标准规定的内，推荐采用GB/T5524的方法。8试样制备
8.1实验准备
测试前需去除油脂样品中的水分。如果需要，将约5g样品快速加热到100℃，然后离心去水。层析杜（6.2)底端放置小研棉花或玻璃棉（6.1），然后加入5g硅胶（5.2），并在木板上轻轻敲实。8.2外标法
称取试样约500mg（精确至1tng）于小烧杯中，用2mL石油醚（5.3)溶解后，倒人打开活塞的层柱(8.1)中。每次用2m1.石油醚冲洗烧杯两次，也倒人层析柱。当溶剂液面到达填料的顶部时，立即用20mL石油醚洗脱非极性物质，并收集于罐形瓶（6.3）中。在凝转蒸发器（6.9）上蒸下辫剂，用500μL乙睛叔下基甲基醚(5.9.4)溶解残留物。8.3内标法
使用本方法时，应确保样品中不含△3,5-胆鱼一烯(例如：精炼油）。称取样品约 500 切g(精确至1拍g）于小烧杯巾，加入1.0mI.△3,5-胆留二烯内标应用液（5.9.2.2）。用2mL行油醚（5.3）溶解后倒人打开活塞的层析柱（8.1)市。每次用2mI.石油醛冲洗烧杯两次，也衡人层析柱。当溶剂液面到达填料的顶部时，立即用20 mL行油醚洗脱非极性物质，并收集于锥形瓶（6.3)中。在旋转蒸发器(6.9)上蒸于溶剂,用500μ1.乙睛-叔丁基甲基醚（5.9.4)解残留物。9操作步骤
9.1高效液相色谱(HPLC)
摊荐采用下列色谱条件
固定析:RP-18,5 μm;
色谱柱：长250mtn,内径4.f mm
流动相：乙腈-寂丁基甲基醚(5.9,5)；流速:1 ml./min;
进样量：20μI.100L（逃样量取决于被测浓度的估计值）检测器：紫外检测器.235nm。
4）如Suptrsphere100.R18endcapped,No.1.16858，EMerck，64271Darmstad1.Gertunty，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的指定认可。3
GB/T 25224.2--2010/ISO 15788-2:2003留醇二烯的鉴定
用表1所示的相对保留时间进行色谱峰的鉴别（色谱图参见附录B）。册留二烯作为参比物，其保留时间大约在 20 tin 至25 inin。表1
阐醇衍尘物
胆笛烯
萄葡二烯
莱笛二烯
立笛·烯
留醇衍生物的相对保蜜时间
相对保留时间(RRT)
注：根据被测肪或油脂种类，有时希望进一步分析留醇二烯和留醇三烯的组分。可注人精炼油胎脂样品或白制豆渐二烯标推品进行峰的鉴定。在给定的色游条件下，初榨油（未漂白的）的色谱阁上，留醇一烯出峰位置上不会出现在何峰。
结果表示
10.1外标法
按式(1)通过外标物胆留二烯的量计算出豆留二烯或醇二烯的含量：E
式中：
样品中豆筛二烯或留醇二烯的含量，单位为毫克每-克（mg/kg）；As
3，5-豆角一烯的峰面积或留醇二烯的蜂面积；M—-3，5-胆二烯（外标物）进样质量，单位为微克（μg）（5.9.2.1）；Ac-
-3,5-册留二烯的峰面积（外标物;若它的峰分裂，则以面积总和计算，如附录B所示）；油脂试样的质量，单位为克（g)（8.2)；J稀释因子（对于样品体积500μI.和进样体积20μL，f=25）。所用的胆陷二烯的纯度带检测（见5.9.3），纯度不低于95%时，不需要进行校正。否则，必须校正。胆陷二烯和胆留烷采用相同的响应系数。测试结果保留位小数。
10.2内标法
按式(2)通过内标物含量让算豆留二烯或留醇二烯的含量：er
式中：
-豆笛二烯或留醇二烯的含量，单位为毫克每T克（mg/kg）：—3，5衡二烯的峰面积或留醇二烯的蜂面积；Mr
3，5-胆留二烯（内标物）进样质量，单位微克（μg）（5.9.2.2）A：（-3,5·胆循二烯的峰面积（内标物；若它的峰分裂，则以面积总和计算，如附录13所示）；m——-脂试样的质量，单位为克（g)(8.3)。(2）
所用的胆陷二烯的纯度需检测（见5.9.3），纯度不低于95%时，不需婴近行校正，否则应校正。旧留二烯和胆留烷采用相同的响应系数。4
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测试结果保留两位小数。
11精密度
11.1重复试验
GB/T 25224.22010/IS0 15788-2:2003附录A汇总了本标准方法实验室间测试精密度的结果，对于其他浓度范围和测试物质来说.本实验测试数据也许并不适用。
11.2重复性
在同-实验室，由同…-操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时闻内对同一被测对象获得的两次独立测定结果的绝对差值大于表 A, 1 中给出的重复性限值的情况不超过 5%。11.3再现性
在不同实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被測对象两次独立诞定结果的绝对差值大于表A，1中给出的再现性限R值的情况不超过5%。测试报告
测试报告应详细说明：
标识样品的全部必需信息；
采样方法（如果己知);
一本标准所涉及的测试方法；
一本标推末详细说明的、任选的、偶尔的可能影响测定结果的操作细节；测试结果；
…如进行了重复性检验，则报告最终结果，5
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CB/T25224.2--2010/1S015788-2:2003附录A
【资料性附录】
实验室间比对试验结果
1998年由德国纽织了15个实验宰对5种不同样品进行国际实验室闻间比对战验，建文了本方法的精密度。结果按ISO5725-1和ISO5725-2统计分析，结果如表A.1所示。表 A. 1实验室间比对试验结果
参加试验的实验室数
剔除离群值后的实验空数
平均值/（mg/kg）
重复性标准偏差,S./(mg/kg)
重复性变异系数/%
重复性限，r（=S,×2.8)/（mg/kg）再现性标准偏差，Sr/（mg/kg）再现性变异系数/%
再现性限,R(R-Sr X2. &)/(mg/kg)初橄榄油
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在初榨橄油中加人不同蛋精炼做榄D
色谱图示例见图B.1。
峰的整别
峰Ia/1(17.5 min/20.3min）：胆留.-烯;附录B
（资料性附录）
色谱图示例
峰2（21,& min)：芸苔笛烯（主要为 canpestadiene)；峰3（23. 6 Inin):豆留二烯。
注：在有些色谱柱上峰 1a 和峰 1 不分开。色谱图A：特级初榨橄榄油，末检出豆留二烯。色增图IB:含 0.25 mg/kg豆笛： 烯的橄榄油。色谱图C：含0.25mg/kg豆留二烯的部分精炼植物油GB/T 25224.2--2010/IS0 15788-2:200325 mv
图B.1色谱图示例
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GB/T25224.2—2010/IS0 15788-2.2003参考文献
[1G3/T 55242008动植物油脂托样(ISO5555:2001,IDT)[2] IS0 5725-1:1994 Accuracy (irueness and precision) of measurcment mcthodis andresults-Part l:General principles and definitions.[3] IS0 5725-2:l994Accuracy (trueress and precision) of measurcment methads andtesulis-Part 2:Basic method fur the determination of repcatability and reprodurjbilily of e standardmcasurcmcnt nicthod.
1.4 : SCHULTE E, Determination of edible fat refining hy HPI.C of 3, 5-sletadienes. Fat ScilTechnol,,96,1994,24-128.
[5- ILINBUR< R. G. and COX R. H. Stigmasta-3,5,22 triene and di-stigmastcryl ether. Can. J.Chem. , 35,1957,1237-1238.
版权专有侵权必究
书号：155066140682
GB/T 25224.2-2010
打印/1期：2010年12月15HF047
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