GB/T 25864-2010
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GB/T 25864-2010 球孢白僵菌粉剂
GB/T25864-2010
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标准内容
1CS65.100
中华人民共和国国家标准
GB/T25864—2010
球孢白僵菌粉剂
Powder of Beauveria bassiana2011-01-10 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2011-06-01实施
本标推的附录A、录B为规范性附录.附录C为资料性附录。本标推由国家林业局提出并归口。GB/T25864--2010
本标准起草单位：国家林业局森林病虫害防治总站、安徽农业大学、中国林业科学院、华中农业大学微生物农药国家工程研究中心。本标主要起草人：郭志红、李增智、陈昌洁、宋玉双，瞻子牛，葵美珍，胡加富、崔水三、苏宏钧、李林,在浩章。
GB/T25864—2010
球孢白僵菌粉剂是一种真菌杀虫剂。白菌经过发藓获得分生孢子，经萌发侵入目标害虫体内，破坏害虫组织并产生毒素·使害虫致死。球孢白菌的名称及基本参数如下：菌种中文通用名：球孢白便菡。菌种拉丁文学名：Beaueriaba5siana（Bals.）Vuill分类地位：球孢白僵菌在分类上属于真菌门（Eumycota)，平知菌亚门（Druteromycotina），丝孢纲(Hyphonycetes），丛梗孢目(Moniliales)，丛梗孢科（Moniliaceae)，白僵菌属（Beauteria）。鉴定特征：在麦芽浸膏培养基上，菌落的菌丝皇白色绒状，后期呈丛卷毛状至粉状，背面初期无色，菌葬产孢后呈黄色至粉红色。分生孢子梗常浓麟生（但有时单生或轮生），呈瓶状，形成“之”字状弯曲产孢轴。分生孢子球形，透明，薄壁。大小为(2μm~3um）×<2 um~2.5μm)。菌种保条件：温度5℃：避光；封装。有效成分主要存在形式：分生孢子。生物活性：主要用于防治鳞翅目害虫。适宜生长条件：麦芽浸粉或PDA培养基、适宜温度25℃~pH6，最适忙存温度：5℃。
1范围
球孢白儒菌粉剂
本标准规定了球孢白僵菌粉测的要求，检验方法及标签、包装、贮运等规则。本标准适用于球孢白僵菌经生物发酵与加工而获得的分生抛子粉剂。本标准不适用于布氏白僵菌或其他种类白僵菌生产的杀虫剂。2规范性引用文件
GB/T25864—2010
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括谢误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1605-2001商品农药采样方法GB3796—2006农药包装通则
GB/T16150—1995农药粉剂，可湿性粉剂细度测定方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
球孢白嗑茜粉剂Beauveriapowderprodct由球孢白僵菌纯菌种经生物发酵生产与加工而获得的分生孢子粉剂。是防治多种害虫的真菌杀虫剂。
球孢白量菌Beauveria bassiana(Bals.Yull一种半知菌类的虫生真菌，分类上属于真菌门（Eumycota），半知菌亚门（Deuteromycntina），丝孢纲（Hyphomycetes），丛梗抱目（Moniliales），必梗孢科（Moniliaceae），白僵菌属（Beawveria）。3.3
分生孢子conidia
一种无性紊殖细胞。着生于分生孢子梗上的瓶状产胞细胞项端，对昆虫具有致病力。球孢白個菌的分生孢子大部分呈球形，
含跑量conidiacontent
每克白慢菌粉剂中所含的分生孢子数。3.5
germinationrateof conidia
独子萌发率
白僵荫粉剂中所荫发的白僵菌孢子数占孢子总数的百分比，3.6
毒力测定bioassay
用杀虫剂感染目标害虫或指示昆虫使其感病死亡，是检验杀虫剂霉力的过程。1
GB/T25864—2010
毒力wlrulence
对目标害虫的致死能力，以通过活体生物测定得到的致死中时L工表示。3.8
干燥减量 loss in weight
样品在规定条件下，经加热干燥后质量减少的百分数，即样品中水分及少量低挥发物的量。3.9
杂茵率microbial contarninant真菌农药中除有效成分真菌外，其他影响有效成分真菌生长的菌占总菌的百分比。4要求
4.1外观
白色或浅灰白色粉末，不可以有团块。4.2控制项目指标
球孢白菌粉剂应符合表1的要求。表 1球孢白僵菌粉剂控制项目指标项
含抱量
孢子萌发率
毒力LTss
杂菌率
干燥减量
忙存稳定性
检验方法
5.1抽样
高孢粉≥1000亿独于/g
低孢粉100（±10)亿孢子/g
高孢粉≥90%
低孢粉2%
高孢粉 LTs≤5 d
低孢粉 LT≤6 d
高孢粉≤5%
低孢粉≤10%
高孢粉≤10%
低孢粉≤10%
高孢粉全部通过160目筛
低孢粉全部通过35耳筛
在5℃条件下贮存180d，孢子荫发率大于标明值的80%按照 GB/T 1605一2001 中 5.1.3°商品农药采样方法\进行,用随机数表法确定抽样的包装件,最终抽样量不少于100g
5,2鉴别试验
5.2.1葡种鉴别
根据所提供的菌种形态学、生物化学、DNA分子特征或国际公认机构的鉴定特征，用显微镜观察法从生物形态上进行鉴定或采用其他(如生物化学、DNA片段序列)方法进行监定。5.2.2菌种仲裁鉴定
当对鉴别结果有怀疑或争议时，应到有菌种认证资质的单位，与菌种保藏中心保藏的生产菌株进行2
对照，由2名以上的专家确定后，出具菌种鉴定报告，作为仲裁依据。5. 3 含孢量的测定
5.3.1方法捷要
GB/T 25864—-2010
本试验采用显微记数法。将粉剂稀释至适当倍数，在显微镜下用血球记数板计孢子数，然后计算含孢最。
5. 3.2 试剂
吐温80（化学纯）。
5.3.3器及设备
光学显徽镜、精度为干分之一的天平、组织掉碎桃，血球记数板（16×16）、微移液器、玻璃器血等。5. 3.4检验程序
用精度为下分之一的天平准确称取低抱粉1.00或高抱粉0，10，装人组织碎机的盛液杯中，同时加入0. 1mL的吐温80、200 mL清水,以5000 r/min的速度搅拌 2min，加清水定容至500 mL,再以5000 r/min的速度搅拌1min，使之成为均匀的孢子惑浮液。将孢子浓度控制在每中格20~40个，如果不合适可以稀释样品调节成此铱度，取深度为0.1 mm,血球计数板格为 16×16个中格,盖上配套专用盖玻片，用吸管吸取配制好的惑浮滋沿益玻片的边缘滴人，使孢子液恰好充满盖玻片于载玻片之间，以孢子液不入槽为度，多余范子液用滤纸吸去。放在显微镜裁物台上静置1 min-2 min,特浮动的孢子静止后，放大400倍检视计数。5. 3. 5检验结果计算
血球计数板记数格为16个中格，每个中格为16个小格，则计算双线范围内任一斜对角线上的四个中格共64个小格的孢子总数。记数时每中格的四周如有压线的孢子，计上线不计下线，计左线不计右线。按公式(1)计算待测样品的孢子含：S=(5 +$ +s.+S)×4×10 ×T
式中：
S-一含孢最,亿孢子/g
S, ～St——任意 4个中格中孢子的数量tT-稀释倍数
每个样品设3个重复。允许误差率为10%。5.4孢子萌发率的测定
将50mL麦芽没粉培养液（麦芽浸粉2%，用蒸增水配制）注人预先放人20~30个直径5mm玻璃珠的 250 mL三角瓶中,在121 ℃条件下灭菌 20 min后,放人待测低抱粉 0.2 g(或根据含孢量换算成适合镜检的克数，高孢粉亦然），置于120r/min的摇床上，在25℃条件下培养8h～16h视菌种特性而定），取样制片镜检。用血球数板计数，芽管大于孢子半径的孢子计为萌发孢子。按公式（2)计算孢子萌发率：
R=岁×100%
式中：
孢子萌发率，%；
N——萌发子总数
M—检查孢子总数。
每个样品设3个重复。充许误差率为10%。5.5干燥减量的测定
5.5.1仪器及设备Www.bzxZ.net
扁形称盘瓶(50mm）;
GB/T25864—2010
电热恒温于燥箱（土2）。
5.5.2测定步
将扇形称量瓶在 110 ℃于爆箱烘 15 min,取出称量、记录。准确称取 5. 00 它样品放人血内,在（105土2它电热恒温干燥箱中烘1h。取出后将样品和扁形称量瓶一起称重，减去扇形称量瓶的重量。按公式(3)计算干燥减重(含水率)：式中：
W——千干燥减重，%，
W，一烘于后样品重量，g。
W= 5. 00-W
每个样品设3个重复，允许误差率为2%。5.6毒力测定
按附录A、附录B进行。
5.7杂菌率测定(CFU法）
5.7.1采用2%麦芽浸膏,2%营养琼脂配制培养基，121C高压灭菌20 min后凉至45C左右,入增养血制成2mm～4mm的平板。
5.7.2按5.3.4中的操作步骤称样，均敏，稀释（用无菌水）。稀释倍数依具体情况而定，或同时做几个稀释梯度使每个培养血中的菌落保持在10～20个。5.7.3用盈移液器接种1001.菌减到培养基平板上，用曲玻样涂布均勾。做10玖重复。5.7.4在27茶件下培养48h.根据菌萃特征分辩球孢白遥菌或杂菌，分别计数。计算出杂菌占总菌落数的百分比。
5. 8细度的测定
按照GB/T16150一1995中的2.1干筛法（适用于粉剂）执行。高孢粉应全部通过160目筛，低孢粉应全部通过35目筛。
5. 9贮存稳定性的测定
将产品在5℃条件下贮存180d,孢子萌发率应大于标明值的80%。6标志.标签、包装和贮运
6.1标志、标签
球孢白僵菌粉剂的标志及标签应符合GB3796一2006的规定。标签上应注明吡运条件。6.2包装
产品包装要求应符合GB3796一2006的相关规定。6.3运
6. 3.1贮地点
球孢白菌粉剂的贮藏应选择低于20℃、干燥、通风、蔽光的肠所，有条件的应在5七杀件下保存。6.3.2运输
球范白僵菌粉剂在运输中应密封防潮、防晒、防高温、防丽琳。避免与皮肤、眼睛接触,防止由口鼻吸人。
6.4产品特殊要求
产品应来用塑料袋密封包装，以保证干燥碱量在10%以下。6.5保证期
在规定的贮运条件下球孢白菌粉剂的保证期为 6个月。从生产日期算起,至少6个月内孢子剪发率不低于标明值的80%。
A. 1 供试虫种
附录A
（魏范性雕录）
以检毛虫为目标昆虫的毒力测定马尾松毛虫DendrolimuspunetatsWalkerA. 2 试剂和材料
麦芽浸粉(生化试剂）
葡萄糖（医用）；
吐温80（化学纯）；
新洁尔灭（医剧）。
A.3仅器设备
电子秤(于分之·…-精度);
如器（超声波低温加湿器）；
GB/T 25864—2010
养虫笼（由30cm×30cm×50crm的木制框架构成，.F下两面用木板，四个面用窗纱，有-个可以开关的侧门）；
三角瓶(250 mL);
不锈钢子（医用）。
A,4供试幼虫的饲
A,4.1 辅的采集
在林间用带有橡皮头的假子轻轻取下成熟的马尾松毛虫蛹，放人养虫笼内。每笼30只。保持温度在25℃、相对湿度在80%以上（必要时用加湿器），A,4. 2成虫的词养和产即
待辅羽化后，同时放入1只250mL三角瓶水培的新鲜马尾松技，作为成虫产卵的场所。一般戒虫羽化后，当天或次晚交配,历时 7h 以上可以完成受精并产卵,7d～10 d为产卵高峰期。卵约7d开始孵化。
A.4.3幼虫的间辨
在孵化高峰期，每天清除虫粪，用新活尔灭消毒用过的器具，并换上新鲜松枝何养幼虫。幼虫生长7 d~10 d 以 2 龄幼虫为主,10 d~15 d 以 3 龄幼虫为主。应选择虫龄一致,生理状态良好的健康幼虫作为毒力测定的供试幼虫。室内伺养一般不超过4代A.5接种感染
准确称取2.00g低孢粉或0.20g高拖粉，加入0.1mL吐温80，置于高速搅拌器的盛液杯中，加入1%的麦芽浸粉液200 mL。以5 000 r/min速度搅择2min,配制成1亿孢子/ml.的待测样品悬浮液。每个养虫笼放人 1 只 250 mL三角瓶，装人水,插人新鲜松枝。挑选健康马尾松毛虫 3龄幼虫30头，浸人待测样品悬浮液中2 s,用滤纸吸掉余液放人已在三角瓶中插好鲜松技的养虫笼中。每个样品3次重复。以含有同样浓度吐温80的麦芽浸粉液做对照,3次重复。置于温度在25℃、相对湿度在品%均上（必要时用加湿器）的环境中培养观蔡。每天换一软新鲜裕接。5
GB/T 25864—2010
处理的浓度剂量应不少于5个。每个处理30头试虫，至少重复3次。A. 6观察记录
接种 48 h 后开始检查死亡率,每 24 h 记录一次。用镶子轻触虫体,无反应者计为死亡数。对照要故在另外的房间中，并用单独的缓子。对照的死亡率应小于10%，如果大于10%应重新测定。A,7测定结果
据对照与处理的数据.采用Abbott表或按式（A，1)计算校正死亡率Y（%）：Y--) × 100%
式中：
校正死亡率，%；
Y药剂处理样本的死亡率，%
Y—对照样本的死亡率，%。
-+( A. I )
然后，将处理浓度换算成对数值，校正死亡率转换成死亡儿率值，用最小二乘法求出样品致死中时LTso：
A. 8允许误垫
每次平行测定结果之差，应不大于20%。样品各剂引起的死亡率应在10%～90%之间。测LTs时，在50%死亡率上下应至少设置2个时间。B. 1
供试昆虫
附录B
（规范性附录）
以玉米螺为目标昆虫的毒力两定亚洲玉米螺 Ostrinia furnztalis (Guenee)2试剂和材料
吡温80《化学纯）；
酵母粉（化学纯）：
维生素C(化学纯>;
玉米粉(饲料用玉米,80 ℃ 烘干,过8 目筛);大豆粉(食用大豆,80 \℃洪干,过80 目筛)3葡萄糖（食用），
氢氧化钾（分析纯）；
氯化钠（分析纯）：
磷酸氢二钾（分析纯），
磷酸二氢钾（分析纯)，
琼脂条（凝胶强度大于300 g/cm，食品用)红舜素(医疗注射粉剂)：
山梨酸（分析纯）
山梨酸钾（分析纯）：
10%甲醛溶液(分析纯，甲醛溶于蒸馏水)：95%乙醇溶液（分析纯）；
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磷酸缓冲液（氧化钠8.5g磷氢二钾6.0g，磷酸二氢钾3.0g+吐激802mL，蒸水1000mL)；微量移液器(200 mL 微量移液器,对应的灭菌微量移液管);糖瓷盘（25cm×40cm）;
组织板(24孔板组织板）。
B.3仪器设备
光学显微镜：
血球计数板
水浴锅；
医用手术力；
磨口三角瓶（250mL，具塞）：
振萄器(100 r/min～600 r/min);养虫管（9cmX2.5cm）
烧杯(50 mL,500 mL,1 000 mL);试管（18mm×180mm），
玻璃珠（直径5m）
移液管(1 mL,10 mL)
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带塞磨口试管（10mL）
玻璃培养血(9 cm);
不锈钢锻子（医用），
B.4玉米螺的铜养
B, 4, 1饲料的配制
饲料配方：玉米粉60g、酵母粉36g、黄豆粉60g、维生素C4.0g，山梨酸4.0g.10%甲醚1.6mL、琼脂 20 g、蒸馏永 750 tnl. 。将蔗糖、琼脂粉加入600mL的蒸增水中调句，搅拌煮沸，使琼脂完全溶化。玉米粉、黄豆粉，酵母粉用剩余的150mL水润湿浸泡。维生素C、山梨酸钾用少量水溶解。冷却至80C加人黄豆粉、玉米粉等的润湿物，搅勾。稍等再将维生索C和山染酸钾的混合液加人，搅匀。以微粒不下沉为标准，最后加入溶化的红霉素和甲醛溶液搅勾，置65℃水浴中，每个养虫管加人5mL何料。凝固后保存于4℃条件下待用。
B. 4. 2饲帮
取玉米娱的卵放人养虫盒中,保持温度在27℃士1 ℃，保持湿度在 100%,约 3d时间孵化山初孵幼虫。再将初孵幼虫转人已加人伺料的养虫管中，放置在27℃土1C，湿度在75%～100%的环境中培养。
B.4. 3供试昆虫的挑选
培养5d后挑选供试幼虫，选择健康、活跃、个体大小一致的幼虫供试验用。B.5待测样品悬浮液的制备
准确称取2.心0g低孢粉或0.2g商拖粉，加人0.1mL吐温80，置于商速搅拌器的盛藏杯中，加人200mL1%的麦芽漫粉液。以5000r/min速度揽拌2min，配制成1亿孢子/ml的溶液。B, 6 接虫感染
将选好的幼虫10头一组，效人待测样品悬浮薇的中这2吕，迅速敢出+用懿纸吸掉多余水满。效人已放置料的养虫管中，每处理做5管，塞,上棉塞，写好标签。可朝下倾斜故置，27℃土1亡，保持湿度在75%~100%，感染饲养120h。
B.7药效检查
接种24h后开始检查死亡率，每天检查一次。用镊子轻触虫体，无反应者计为死亡数。每天检查一次。记录死亡虫数。应注意先检查对照，并使用单独的镊子。对照的死亡率应小于10%，如果大于10%应重新测定。
B, 8测定结果
根据对照与处理的数据，采用Abbott表或按公式(A.1)计算校正死亡率Y(%）。然后，将处理浓度换算成对数值，校正死亡率转换成死亡几率值，用最小二乘法求出样品致死中时LTso。B, 9 允许误差
每次平行定结果之差，应不大于20%。样品各剂量引起的死亡率应在10%～90%之间。测LTs时，在50%死亡率上下应至少设置2个时间。8
C.1球孢白通茜产品分类
C. 1. 1球独白僵菌高孢粉
附录C
(资料性附录》
白優菌产品分类
GB/T 25864--2010
分生孢子含量为1000亿孢子/以上、细度是全部通过160目筛的白僵菌荫粉，主要用于防治鳞翅目害虫。适用于对喷酒物细度要求较高的空喷酒、静电喷酒等。C. 1.2球微白僵萄低疱粉
孢子含为80亿孢子/、细度是全部通过35目烯的白僵菌菌粉。主要用于防治鲜翅目害虫。适用于一般喷粉器。
C. 1. 3球白僵菌粉炮
通过点燃引捻抛向或发射到空中后点爆扩散的白遥菌粉剂。适用于高山地区和树木较高的林区，C、1.4球戒白僵蓝油悬浮剂
以油类为介质的白菌液体制剂。适用于飞机喷酒。C.1.5球孢白僵菌挂条
以无纺布或不同质地的纺织品为载体制成的杀虫产品。主要用于防治鞘翅目害虫：C.2布氏白僵菌粉剂
以布氏白菌（Beaueriabrongniartii）为生产菌株，经过发醛和加工制成的，分生孢子含量为50～100亿拖子/、细度为全部通过35目筛的粉剂。主要用于防治地下害虫。
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本标推的附录A、录B为规范性附录.附录C为资料性附录。本标推由国家林业局提出并归口。GB/T25864--2010
本标准起草单位：国家林业局森林病虫害防治总站、安徽农业大学、中国林业科学院、华中农业大学微生物农药国家工程研究中心。本标主要起草人：郭志红、李增智、陈昌洁、宋玉双，瞻子牛，葵美珍，胡加富、崔水三、苏宏钧、李林,在浩章。
GB/T25864—2010
球孢白僵菌粉剂是一种真菌杀虫剂。白菌经过发藓获得分生孢子，经萌发侵入目标害虫体内，破坏害虫组织并产生毒素·使害虫致死。球孢白菌的名称及基本参数如下：菌种中文通用名：球孢白便菡。菌种拉丁文学名：Beaueriaba5siana（Bals.）Vuill分类地位：球孢白僵菌在分类上属于真菌门（Eumycota)，平知菌亚门（Druteromycotina），丝孢纲(Hyphonycetes），丛梗孢目(Moniliales)，丛梗孢科（Moniliaceae)，白僵菌属（Beauteria）。鉴定特征：在麦芽浸膏培养基上，菌落的菌丝皇白色绒状，后期呈丛卷毛状至粉状，背面初期无色，菌葬产孢后呈黄色至粉红色。分生孢子梗常浓麟生（但有时单生或轮生），呈瓶状，形成“之”字状弯曲产孢轴。分生孢子球形，透明，薄壁。大小为(2μm~3um）×<2 um~2.5μm)。菌种保条件：温度5℃：避光；封装。有效成分主要存在形式：分生孢子。生物活性：主要用于防治鳞翅目害虫。适宜生长条件：麦芽浸粉或PDA培养基、适宜温度25℃~pH6，最适忙存温度：5℃。
1范围
球孢白儒菌粉剂
本标准规定了球孢白僵菌粉测的要求，检验方法及标签、包装、贮运等规则。本标准适用于球孢白僵菌经生物发酵与加工而获得的分生抛子粉剂。本标准不适用于布氏白僵菌或其他种类白僵菌生产的杀虫剂。2规范性引用文件
GB/T25864—2010
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括谢误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1605-2001商品农药采样方法GB3796—2006农药包装通则
GB/T16150—1995农药粉剂，可湿性粉剂细度测定方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
球孢白嗑茜粉剂Beauveriapowderprodct由球孢白僵菌纯菌种经生物发酵生产与加工而获得的分生孢子粉剂。是防治多种害虫的真菌杀虫剂。
球孢白量菌Beauveria bassiana(Bals.Yull一种半知菌类的虫生真菌，分类上属于真菌门（Eumycota），半知菌亚门（Deuteromycntina），丝孢纲（Hyphomycetes），丛梗抱目（Moniliales），必梗孢科（Moniliaceae），白僵菌属（Beawveria）。3.3
分生孢子conidia
一种无性紊殖细胞。着生于分生孢子梗上的瓶状产胞细胞项端，对昆虫具有致病力。球孢白個菌的分生孢子大部分呈球形，
含跑量conidiacontent
每克白慢菌粉剂中所含的分生孢子数。3.5
germinationrateof conidia
独子萌发率
白僵荫粉剂中所荫发的白僵菌孢子数占孢子总数的百分比，3.6
毒力测定bioassay
用杀虫剂感染目标害虫或指示昆虫使其感病死亡，是检验杀虫剂霉力的过程。1
GB/T25864—2010
毒力wlrulence
对目标害虫的致死能力，以通过活体生物测定得到的致死中时L工表示。3.8
干燥减量 loss in weight
样品在规定条件下，经加热干燥后质量减少的百分数，即样品中水分及少量低挥发物的量。3.9
杂茵率microbial contarninant真菌农药中除有效成分真菌外，其他影响有效成分真菌生长的菌占总菌的百分比。4要求
4.1外观
白色或浅灰白色粉末，不可以有团块。4.2控制项目指标
球孢白菌粉剂应符合表1的要求。表 1球孢白僵菌粉剂控制项目指标项
含抱量
孢子萌发率
毒力LTss
杂菌率
干燥减量
忙存稳定性
检验方法
5.1抽样
高孢粉≥1000亿独于/g
低孢粉100（±10)亿孢子/g
高孢粉≥90%
低孢粉2%
高孢粉 LTs≤5 d
低孢粉 LT≤6 d
高孢粉≤5%
低孢粉≤10%
高孢粉≤10%
低孢粉≤10%
高孢粉全部通过160目筛
低孢粉全部通过35耳筛
在5℃条件下贮存180d，孢子荫发率大于标明值的80%按照 GB/T 1605一2001 中 5.1.3°商品农药采样方法\进行,用随机数表法确定抽样的包装件,最终抽样量不少于100g
5,2鉴别试验
5.2.1葡种鉴别
根据所提供的菌种形态学、生物化学、DNA分子特征或国际公认机构的鉴定特征，用显微镜观察法从生物形态上进行鉴定或采用其他(如生物化学、DNA片段序列)方法进行监定。5.2.2菌种仲裁鉴定
当对鉴别结果有怀疑或争议时，应到有菌种认证资质的单位，与菌种保藏中心保藏的生产菌株进行2
对照，由2名以上的专家确定后，出具菌种鉴定报告，作为仲裁依据。5. 3 含孢量的测定
5.3.1方法捷要
GB/T 25864—-2010
本试验采用显微记数法。将粉剂稀释至适当倍数，在显微镜下用血球记数板计孢子数，然后计算含孢最。
5. 3.2 试剂
吐温80（化学纯）。
5.3.3器及设备
光学显徽镜、精度为干分之一的天平、组织掉碎桃，血球记数板（16×16）、微移液器、玻璃器血等。5. 3.4检验程序
用精度为下分之一的天平准确称取低抱粉1.00或高抱粉0，10，装人组织碎机的盛液杯中，同时加入0. 1mL的吐温80、200 mL清水,以5000 r/min的速度搅拌 2min，加清水定容至500 mL,再以5000 r/min的速度搅拌1min，使之成为均匀的孢子惑浮液。将孢子浓度控制在每中格20~40个，如果不合适可以稀释样品调节成此铱度，取深度为0.1 mm,血球计数板格为 16×16个中格,盖上配套专用盖玻片，用吸管吸取配制好的惑浮滋沿益玻片的边缘滴人，使孢子液恰好充满盖玻片于载玻片之间，以孢子液不入槽为度，多余范子液用滤纸吸去。放在显微镜裁物台上静置1 min-2 min,特浮动的孢子静止后，放大400倍检视计数。5. 3. 5检验结果计算
血球计数板记数格为16个中格，每个中格为16个小格，则计算双线范围内任一斜对角线上的四个中格共64个小格的孢子总数。记数时每中格的四周如有压线的孢子，计上线不计下线，计左线不计右线。按公式(1)计算待测样品的孢子含：S=(5 +$ +s.+S)×4×10 ×T
式中：
S-一含孢最,亿孢子/g
S, ～St——任意 4个中格中孢子的数量tT-稀释倍数
每个样品设3个重复。允许误差率为10%。5.4孢子萌发率的测定
将50mL麦芽没粉培养液（麦芽浸粉2%，用蒸增水配制）注人预先放人20~30个直径5mm玻璃珠的 250 mL三角瓶中,在121 ℃条件下灭菌 20 min后,放人待测低抱粉 0.2 g(或根据含孢量换算成适合镜检的克数，高孢粉亦然），置于120r/min的摇床上，在25℃条件下培养8h～16h视菌种特性而定），取样制片镜检。用血球数板计数，芽管大于孢子半径的孢子计为萌发孢子。按公式（2)计算孢子萌发率：
R=岁×100%
式中：
孢子萌发率，%；
N——萌发子总数
M—检查孢子总数。
每个样品设3个重复。充许误差率为10%。5.5干燥减量的测定
5.5.1仪器及设备Www.bzxZ.net
扁形称盘瓶(50mm）;
GB/T25864—2010
电热恒温于燥箱（土2）。
5.5.2测定步
将扇形称量瓶在 110 ℃于爆箱烘 15 min,取出称量、记录。准确称取 5. 00 它样品放人血内,在（105土2它电热恒温干燥箱中烘1h。取出后将样品和扁形称量瓶一起称重，减去扇形称量瓶的重量。按公式(3)计算干燥减重(含水率)：式中：
W——千干燥减重，%，
W，一烘于后样品重量，g。
W= 5. 00-W
每个样品设3个重复，允许误差率为2%。5.6毒力测定
按附录A、附录B进行。
5.7杂菌率测定(CFU法）
5.7.1采用2%麦芽浸膏,2%营养琼脂配制培养基，121C高压灭菌20 min后凉至45C左右,入增养血制成2mm～4mm的平板。
5.7.2按5.3.4中的操作步骤称样，均敏，稀释（用无菌水）。稀释倍数依具体情况而定，或同时做几个稀释梯度使每个培养血中的菌落保持在10～20个。5.7.3用盈移液器接种1001.菌减到培养基平板上，用曲玻样涂布均勾。做10玖重复。5.7.4在27茶件下培养48h.根据菌萃特征分辩球孢白遥菌或杂菌，分别计数。计算出杂菌占总菌落数的百分比。
5. 8细度的测定
按照GB/T16150一1995中的2.1干筛法（适用于粉剂）执行。高孢粉应全部通过160目筛，低孢粉应全部通过35目筛。
5. 9贮存稳定性的测定
将产品在5℃条件下贮存180d,孢子萌发率应大于标明值的80%。6标志.标签、包装和贮运
6.1标志、标签
球孢白僵菌粉剂的标志及标签应符合GB3796一2006的规定。标签上应注明吡运条件。6.2包装
产品包装要求应符合GB3796一2006的相关规定。6.3运
6. 3.1贮地点
球孢白菌粉剂的贮藏应选择低于20℃、干燥、通风、蔽光的肠所，有条件的应在5七杀件下保存。6.3.2运输
球范白僵菌粉剂在运输中应密封防潮、防晒、防高温、防丽琳。避免与皮肤、眼睛接触,防止由口鼻吸人。
6.4产品特殊要求
产品应来用塑料袋密封包装，以保证干燥碱量在10%以下。6.5保证期
在规定的贮运条件下球孢白菌粉剂的保证期为 6个月。从生产日期算起,至少6个月内孢子剪发率不低于标明值的80%。
A. 1 供试虫种
附录A
（魏范性雕录）
以检毛虫为目标昆虫的毒力测定马尾松毛虫DendrolimuspunetatsWalkerA. 2 试剂和材料
麦芽浸粉(生化试剂）
葡萄糖（医用）；
吐温80（化学纯）；
新洁尔灭（医剧）。
A.3仅器设备
电子秤(于分之·…-精度);
如器（超声波低温加湿器）；
GB/T 25864—2010
养虫笼（由30cm×30cm×50crm的木制框架构成，.F下两面用木板，四个面用窗纱，有-个可以开关的侧门）；
三角瓶(250 mL);
不锈钢子（医用）。
A,4供试幼虫的饲
A,4.1 辅的采集
在林间用带有橡皮头的假子轻轻取下成熟的马尾松毛虫蛹，放人养虫笼内。每笼30只。保持温度在25℃、相对湿度在80%以上（必要时用加湿器），A,4. 2成虫的词养和产即
待辅羽化后，同时放入1只250mL三角瓶水培的新鲜马尾松技，作为成虫产卵的场所。一般戒虫羽化后，当天或次晚交配,历时 7h 以上可以完成受精并产卵,7d～10 d为产卵高峰期。卵约7d开始孵化。
A.4.3幼虫的间辨
在孵化高峰期，每天清除虫粪，用新活尔灭消毒用过的器具，并换上新鲜松枝何养幼虫。幼虫生长7 d~10 d 以 2 龄幼虫为主,10 d~15 d 以 3 龄幼虫为主。应选择虫龄一致,生理状态良好的健康幼虫作为毒力测定的供试幼虫。室内伺养一般不超过4代A.5接种感染
准确称取2.00g低孢粉或0.20g高拖粉，加入0.1mL吐温80，置于高速搅拌器的盛液杯中，加入1%的麦芽浸粉液200 mL。以5 000 r/min速度搅择2min,配制成1亿孢子/ml.的待测样品悬浮液。每个养虫笼放人 1 只 250 mL三角瓶，装人水,插人新鲜松枝。挑选健康马尾松毛虫 3龄幼虫30头，浸人待测样品悬浮液中2 s,用滤纸吸掉余液放人已在三角瓶中插好鲜松技的养虫笼中。每个样品3次重复。以含有同样浓度吐温80的麦芽浸粉液做对照,3次重复。置于温度在25℃、相对湿度在品%均上（必要时用加湿器）的环境中培养观蔡。每天换一软新鲜裕接。5
GB/T 25864—2010
处理的浓度剂量应不少于5个。每个处理30头试虫，至少重复3次。A. 6观察记录
接种 48 h 后开始检查死亡率,每 24 h 记录一次。用镶子轻触虫体,无反应者计为死亡数。对照要故在另外的房间中，并用单独的缓子。对照的死亡率应小于10%，如果大于10%应重新测定。A,7测定结果
据对照与处理的数据.采用Abbott表或按式（A，1)计算校正死亡率Y（%）：Y--) × 100%
式中：
校正死亡率，%；
Y药剂处理样本的死亡率，%
Y—对照样本的死亡率，%。
-+( A. I )
然后，将处理浓度换算成对数值，校正死亡率转换成死亡儿率值，用最小二乘法求出样品致死中时LTso：
A. 8允许误垫
每次平行测定结果之差，应不大于20%。样品各剂引起的死亡率应在10%～90%之间。测LTs时，在50%死亡率上下应至少设置2个时间。B. 1
供试昆虫
附录B
（规范性附录）
以玉米螺为目标昆虫的毒力两定亚洲玉米螺 Ostrinia furnztalis (Guenee)2试剂和材料
吡温80《化学纯）；
酵母粉（化学纯）：
维生素C(化学纯>;
玉米粉(饲料用玉米,80 ℃ 烘干,过8 目筛);大豆粉(食用大豆,80 \℃洪干,过80 目筛)3葡萄糖（食用），
氢氧化钾（分析纯）；
氯化钠（分析纯）：
磷酸氢二钾（分析纯），
磷酸二氢钾（分析纯)，
琼脂条（凝胶强度大于300 g/cm，食品用)红舜素(医疗注射粉剂)：
山梨酸（分析纯）
山梨酸钾（分析纯）：
10%甲醛溶液(分析纯，甲醛溶于蒸馏水)：95%乙醇溶液（分析纯）；
GB/T25864—2010
磷酸缓冲液（氧化钠8.5g磷氢二钾6.0g，磷酸二氢钾3.0g+吐激802mL，蒸水1000mL)；微量移液器(200 mL 微量移液器,对应的灭菌微量移液管);糖瓷盘（25cm×40cm）;
组织板(24孔板组织板）。
B.3仪器设备
光学显微镜：
血球计数板
水浴锅；
医用手术力；
磨口三角瓶（250mL，具塞）：
振萄器(100 r/min～600 r/min);养虫管（9cmX2.5cm）
烧杯(50 mL,500 mL,1 000 mL);试管（18mm×180mm），
玻璃珠（直径5m）
移液管(1 mL,10 mL)
GB/T 25864—2010
带塞磨口试管（10mL）
玻璃培养血(9 cm);
不锈钢锻子（医用），
B.4玉米螺的铜养
B, 4, 1饲料的配制
饲料配方：玉米粉60g、酵母粉36g、黄豆粉60g、维生素C4.0g，山梨酸4.0g.10%甲醚1.6mL、琼脂 20 g、蒸馏永 750 tnl. 。将蔗糖、琼脂粉加入600mL的蒸增水中调句，搅拌煮沸，使琼脂完全溶化。玉米粉、黄豆粉，酵母粉用剩余的150mL水润湿浸泡。维生素C、山梨酸钾用少量水溶解。冷却至80C加人黄豆粉、玉米粉等的润湿物，搅勾。稍等再将维生索C和山染酸钾的混合液加人，搅匀。以微粒不下沉为标准，最后加入溶化的红霉素和甲醛溶液搅勾，置65℃水浴中，每个养虫管加人5mL何料。凝固后保存于4℃条件下待用。
B. 4. 2饲帮
取玉米娱的卵放人养虫盒中,保持温度在27℃士1 ℃，保持湿度在 100%,约 3d时间孵化山初孵幼虫。再将初孵幼虫转人已加人伺料的养虫管中，放置在27℃土1C，湿度在75%～100%的环境中培养。
B.4. 3供试昆虫的挑选
培养5d后挑选供试幼虫，选择健康、活跃、个体大小一致的幼虫供试验用。B.5待测样品悬浮液的制备
准确称取2.心0g低孢粉或0.2g商拖粉，加人0.1mL吐温80，置于商速搅拌器的盛藏杯中，加人200mL1%的麦芽漫粉液。以5000r/min速度揽拌2min，配制成1亿孢子/ml的溶液。B, 6 接虫感染
将选好的幼虫10头一组，效人待测样品悬浮薇的中这2吕，迅速敢出+用懿纸吸掉多余水满。效人已放置料的养虫管中，每处理做5管，塞,上棉塞，写好标签。可朝下倾斜故置，27℃土1亡，保持湿度在75%~100%，感染饲养120h。
B.7药效检查
接种24h后开始检查死亡率，每天检查一次。用镊子轻触虫体，无反应者计为死亡数。每天检查一次。记录死亡虫数。应注意先检查对照，并使用单独的镊子。对照的死亡率应小于10%，如果大于10%应重新测定。
B, 8测定结果
根据对照与处理的数据，采用Abbott表或按公式(A.1)计算校正死亡率Y(%）。然后，将处理浓度换算成对数值，校正死亡率转换成死亡几率值，用最小二乘法求出样品致死中时LTso。B, 9 允许误差
每次平行定结果之差，应不大于20%。样品各剂量引起的死亡率应在10%～90%之间。测LTs时，在50%死亡率上下应至少设置2个时间。8
C.1球孢白通茜产品分类
C. 1. 1球独白僵菌高孢粉
附录C
(资料性附录》
白優菌产品分类
GB/T 25864--2010
分生孢子含量为1000亿孢子/以上、细度是全部通过160目筛的白僵菌荫粉，主要用于防治鳞翅目害虫。适用于对喷酒物细度要求较高的空喷酒、静电喷酒等。C. 1.2球微白僵萄低疱粉
孢子含为80亿孢子/、细度是全部通过35目烯的白僵菌菌粉。主要用于防治鲜翅目害虫。适用于一般喷粉器。
C. 1. 3球白僵菌粉炮
通过点燃引捻抛向或发射到空中后点爆扩散的白遥菌粉剂。适用于高山地区和树木较高的林区，C、1.4球戒白僵蓝油悬浮剂
以油类为介质的白菌液体制剂。适用于飞机喷酒。C.1.5球孢白僵菌挂条
以无纺布或不同质地的纺织品为载体制成的杀虫产品。主要用于防治鞘翅目害虫：C.2布氏白僵菌粉剂
以布氏白菌（Beaueriabrongniartii）为生产菌株，经过发醛和加工制成的，分生孢子含量为50～100亿拖子/、细度为全部通过35目筛的粉剂。主要用于防治地下害虫。
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