GB/T 17814-2011 饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹和没食子酸丙酯的测定 GB/T17814-2011 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T 17814--2011
代替GB/T178141999
饲料中丁基羟基蒿香醚、二丁基羟基甲苯乙氧喹和没食子酸丙酯的测定
Determination of butyl hydroxy anisole,dibutyl hydroxy toluene,ethoxyquin andpropyl gallate in feeds
2011-12-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
数码防伪
2012-06-01实施
GB/T17814—2011
本标雅按照G15/T1.1—-2009给出的规则起草。本标准代替GB/T178141999%例料中丁基经基苗香醛，：基羟盐H苯和Z氧座的测定》。本标准与GB/T17814-1999相比主要变化如下：一标准名称更改为“饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基中米、乙氧喹和没食子酸闪酯的测定”，一增加了用高效液相色谱法测定饲料中丁基羟基齿香醚（BHA)，二丁基羟基甲苯（BHT)、乙氧喹（EQ）和没食子酸丙酯（PG)含量作为第-法（件裁法），原标准中气相色谱法测定饲料中广基羟基苗香醚(BHA）、二丁基羟基甲苯(BHT)和Z氧噻(EQ)含量作为第二法本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC:6)归口。本标准起芦单位：上海市兽药饲料检测所、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所国家饲料质量监督检验中心（北京)）。本标准工要起草人：商军、黄士新、王蓓、华饶辉、潘娟、蔡金华、刘雅妮、曹荣、李兰。本标准所代督标准的历次版本发布情况为：--GB/T[7814—1999.
1范围
饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹和没食子酸丙酯的测定
GB/T17814—2011
本标准规定了饲料中丁基羟基画香醛（BHIA）、二J游泾基甲苯（BHT）、乙氧喹（EQ)和没食产酸丙酯(PG)的高效液相色谱测定方法和饲料中丁基羟基商香醚（BHA)、-丁基羟基甲苯（BHT)乙氧唑（EQ）的气相色谱测定方法，
本标准高效液相色谱测定方法适用于配合饲料、复合预混合饲料、浓缩何料、鱼粉和骨粉中丁基羟基苗香醚（(RHA）、二丁基羟基中米(BHT)、乙氧唑（EQ)和没食下酸丙酯（PG)含量的测定气相色谱测定方法适用于配合饲料、作粉中丁基羟基茜香醛（HHA）、二丁基羟基甲苯（BHT)和乙氧座（EQ）含量的测定。
高效液相色谱测定片法的检出限为：」基羟基香醚（I3IIA)1.mg/k、一丁基羟基甲苯（BIIT)1.6g/kg，乙氧喹（EQ)1.8tg/kg、没食子酸丙酯（PG）1.mg/kg：定量限为：丁基羟苯苟香醚(BIIA)5.6mg/kg=丁蒸羟基中苯（BIIT)8.0mg/kg、乙氧唑（EQ)8.8mg/kg、没食子酸丙醋（PG）6. 5 mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件，仪注期的版木适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验空用水规格和试验方法GB/T14699.1何料采样
GB/\T20195动物饲料试的制备
3原理
高效液相色谱法：用Z.荫超声提取试样中BHA、RHT、EQ和PG，提取液经有机相针式滤器过滤，液经0.22m有机滤膜过滤，滤液经反相柱的高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，外标法定量。气相色谱法：试样中BHA.BHT和EQ用正已烷提瑕，离心分离后（如逆干扰待测组分的样品，则需取上清液，用柱层析净化处理），取上清液用气相色谱、FII)检测器检测，外标法定量，4实验方法
本标准所用试剂和水，未注明其要求时，均指分析纯和符合GB/T6682中规定的三级水。色谱分析中所用水均为符合GB/T6682t规定的一级用水。4.1第一法高效液相色谱法(仲裁法）4.1.1试剂和溶液
4.1.1.1乙崩：色谱纯。
GB/T17814—2011
4. 1. 1. 2
乙酸。
乙酸溶液（2%）：量取20.0mL乙酸（4.1.1.2），用水稀释至1000ml，摇勾，即得。4. 1. 1. 3
4.1.1.4丁基羟基苗香醚标准品（BHIA)：含量≥96.0%。4.1.1.5二丁基羟基甲苯标准品(BHT)：含量≥96.0%。4.1.1.6乙氧喹标准品(EQ)：含最≥96.0%。4.1.1.7没食子酸丙酯标准品（PG)：含量≥96.0%。4.1.1.8混合标准储备液：分别称取BHA（4.1.1.4）、BIIT（4.1.1.5）、EQ（4.1.1.6)0.250g（精确至0.0001g，视其含量，换算成100%再称样）和PG(4.1.1.7)0.125g（精确至0.0001g，视其含量，换算成100%再称样），置250mL棕色容量瓶中，用乙腊（4.1.1.1）溶解，定容至刻度，摇匀；精密量取该液20.00mL，置200mL棕色容量瓶中，用乙腊（4.1.1.1)定容至刻度，摇匀。使PG浓度为0.05mg/mL，BHA,BHIT，EQ浓度为0.1mg/mL，见存于4℃冰箱中，有效期为2周。4.1.1.9混合标准工作液，分别精密量取混合标准储备液（41.1.80.50ml.,2.00mL,4.00mL8.00mL16.00ml，2000mL.25.00mL置50mL棕色容量瓶中，用乙晴定容至刻度，播勾，配制成PG为0. 50 μg/mL,2.00 μg/mL,1. 00 μg/mL,8. 00 μg/mL,16. 0 μg/ml,20. 0 pg/mL和 25. 0 μg/ml标准工作液,BIABHTEQ为1. 00μg/mL,4. 00μg/mL,8. 00 μg/mL,100 μB/mL,32. 0μg/mL,40.0μg/mL和
和50.0/mL标准工作液。临用现配。4.1.2仪器和设备
4. 1.2. 1
4. 1. 2.3
4. 1.2. 4
验室带用仪器设备
分析天平：感量为0.000
角瓶：250ml
超声波清洗器
次性注射器
有机相针式滤器，直径25mm孔径0.45mm4. 1. 2. 7
4. 1. 2. 8
微孔滤膜：有机相，孔径0.22μm。高效液相色谱仪：配有紫外检测器或级管性列检测器
试样制备
按GB/T14699.1采样，接GB/T20195制备试样，磨碎，通过0.45mm孔筛，混勾，装入密闭容器中，避光低温保存备用。
4.1.4分析步骤
4.1.4.1试样溶液制备
称取试样2g~5g（精确至0.0001g），置250mL具塞三角瓶（4.1.2.3）中，精密加人乙睛（4.1.1.1)50.00mL，摇勾，置超声波清洗器（4.1.2.4)中提取40min，在提取过程中振播2次~3次。冷却至室温，摇勾，静置。用一次性注射器(4.1.2.5)吸取上述提取液10mL，用有机相针式滤器（4.1.2.6）过滤，滤液经0.22μm微孔滤膜（4.1.2.7)滤过，滤液作为试样溶液，供液相色谱测定。4.1.4.2测定
4.1.4.2.1液相色谱参考条件
色谱柱：Cla柱，长150mm，内径3.9mm，粒径5μm，或性能相当者：柱温：空温：
流动相：乙腈（4.1.1.1)1乙酸溶液（4.1.1.3)=68十32(体积比)，流速:0. 5 ml./mnin;
检测被长：280nmz
进样量：20mL；
色谱阁:参见附录A。
4. 1. 4.2.2标准曲线绘制
GB/T 17814--2011
按液相色谱参考条件(4.1.1.2.1)，间基线平稳的高效液相色谱仪（4.1.2,8)连续注人混含标准工作液（1.1.1.9)，浓度出低到高，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得到标准山线回归方程。4.1.4.2.3定量测定
注人试样落液（4.1.1.1)，其中PG、BIIA,EQ和BHT的峰面积响应值应在标准曲线线性范用内，超过线性范国则应稀释后再进行分析。依峰而积，从标准曲线中得到试详溶液（4，1.4.1)中PG，BHA、EQ 或 BHT 的浓度，
4. 1. 4. 2. 4结果计算
试样中PG、BHA，EQ和BHT的含量X1，以质量分数表示，单位为毫克每于克(mg/kg），按式（1)计算。
式中：
X, =EXVXD
由标准曲线而得的试样液中PG、RHA、FQ或BIIT的浓度，单位为微克每毫升(Jg/mL）：试样定容体积,单位旁升(mI)：
试样稀释倍数！
—试样质最单位为克（g）
4.1.4.2.5结果表述
测定结果用平行测定的算术平均值表示保留到小数点后一位。4.1.5重复性
在重复性条件下，同一分析者对同-·试格同时两次半行测定所得结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
4.2第二法气相色谱法
注：检谢全过程，尽可能避光（或不在强光下)操作，以满少损失。4.2.1试剂和溶液
4.2.1.1 正已烷。
4.2. 1.2酮。
一氯中烷。
4. 2. 1. 3
4.2.1.4二氛甲烷-丙酮混合液：91，体积比。4.2.1.5无水硫酸钠：500℃烘411。4.2.1.6氮岁里硅土：孔径177um~145μm80目~100日）,550℃烘4h.存于千燥器中。3
GB/T 17814—2011
4.2.1.7助滤剂：Celite545,20μm~45μm。4.2.1.8医用脱脂棉。
4.2.1.9混合标准溶液：分别称取BHA(4.1.1.4),BHT(4.1.1.5)、EQ(4.1.1.6)0.5g（精确至0.0001g，视其含量，换算成100%再称样），置于50mL棕色容量瓶中，以正已烷（4.2.1.1）溶解并定容。此液为10mg/mL。然后稀释成系列标准液：1.00mg/ml，0.50mg/mL，0.10mg/ml,0.05mg/mL，0.0l mg/mLs
4.2.2仪器和设备
4.2.2.1气相色谱仪：配置氢火焰离子化检测器（FID)。氮气钢瓶：氮气纯度为99.99%
4. 2. 2.7
氢气发生器：氢气纯度为99.99%。空气钢瓶：一般压缩空气。
离心机：4000/min
粉碎机：粉摔粒度送380μm(40日）。超声波处理机
感量0.0001g：
4.2.2.9分析
塞刻度玻璃试管：10ml.
铝制试管架
具活蒸层析桂
旋转蒸发器：带抽真室
装置（或真空泵）。
浓缩烧瓶：150ml带
nL刻度尾接管。
试样制备
按GB/T146991来样，按GB/T20195制备试样膳碎，通过0.45mm孔筛，混匀装人密闭容器中，避光低温保存备用。
分析步骤
试样溶液制备
4.2.4.1.1提取
称取试样2g（精确至0.0001g）于10mL其寒刻度试停中，加人少许无水硫酸钠（4.2.1.5），再加5.0mL正已烷（1.2.1.1），加塞。在微型混合器（4.2.2.8）上混合0.5min，将试管放到试管架上，连同试管架一起放人超声波（4.2.2.7)处理槽内，槽内水位以刚好与试管中试样液位取齐或稍过，超声提取15min。取出，将试管外水液擦去，放人离心机（4.2.2.5），以4000r/min离心2min，取出试管。上清液为待测溶液。
注1：如遇较难提取的试样，可于前一天称样，加正已烷浸泡过夜，第二天再提取测定。注2：也适合于维生索预混料、单组分抗氧化剂BIIA、BHT.EQ的测定，而且可免除程序升温，节省时间。4.2.4.1.2净化
4.2.4.1.2.1如遇干扰待测组分的样品，须作如下柱层析净化处理：首先按4.2.4.1.1提取样品，只是提取液由5.0mL正已烷（4.2.1.1)改为10.0mL正已烷（4.2.1.1)。注：本方法是以程序升温去除色谱图后面可能出现的杂质峰（避免干扰后续上机样品的测定）。如色谱图中，前面4
GB/T17814--2011
各待测组分不受杂峰于扰，则尽可不必采用净化处理，避繁求简，但要常注意清洗进样器。4.2.4.1.2.2装柱：层析柱（4.2.2.12)底先放少许脱脂棉（4.2.1.8），再加少许（约2g）无水硫酸钠（4.2.1.5),用正已烷（4.2.1.1)调制氟罗里硅七（4.2.1.6)适量（约1g，以装满柱为准），湿法填充于层析柱（4.2.2.12)中，上端先加约5g助滤剂（4.2.1.7)再加约5g无水硫酸钠（4.2.1.5），铺平。注：如用柱层析净化时，一定要注意复罗里硅士的活性。550℃烘4h能保持3d,3d后，用前需在130℃烘4h（特别是夏天湿度大时，更需注意）；活性太强，EQ过柱洗脱不下来时，可加分析用水脱活（加氟罗里硅土质量的2%的水，摇匀，过夜平衡）。
4.2.4.1.2.3淋洗：用移液管准确吸取4.2.4.1.2.1所得上清液5.0mL上柱。先以30mL正已烷(4.2.1.1)淋洗，再以80ml.二氯甲烷-丙酮混合液（4.2.1.4）淋洗，速度以大约每分钟2mL为宜。用旋转蒸发器(4.2.2.13)浓缩至约1mL,用正已烷(4.2.1.1)定容至2.0mL,待测。4.2.4.2测定
4.2.4.2. 1
气相色谱参考条件
4.2.4.2. 1.1
色谱柱
载气：
隔垫吹
毛细管柱法
石英毛细管柱，25m×go.32mtm。t
0mLmn，尾吹气
30ml/min，氢气30ml/min空气：350mlmin。mL/min
扫：6
分流比：201。
检测器温度：240
进样口温度：210
柱温：参见附录B
色谱图：参见附录
填充柱法
色谱柱5%sh-30玻璃填充柱2.5m×3.5mm气体流速氮气：40mL/min；氢气：25mL/min；空气：250mL/min。进样口、检测器温度：230℃。
柱温：参见附录B。
色谱图：参见附录C
4.2.4.2.2定量测定
分别取系列混合标准溶液（4.2.1.9)1μL进样，测得不同浓度BHA、BHT、EQ的峰面积（或峰高），以浓度为横坐标，峰而积（或峰高)为纵坐标，分别绘制工作曲线。同时取试样溶液（4.2.4.1)1μL进样，测得峰面积[或峰高）分别与工作曲线相比较定量，按式(2)或式（3)计算求得。4.2.4.2.3结果计算
试样中BHA、EQ和BHT的含量X，以质量分数表示，单位为毫克每千克（mg/kg），按式（2）计算。
式中：
...(2)
进样样液中BHA、BHT、EQ峰面积或峰高，单位为微伏·秒或毫米（μV·s或mm)；A
GH/T 17814—2011
HHA、BHT、EQ标准品进样的绝对录，单位为纳克（ng）一样品提取定容体积，单位为毫升（mL)；A—--标准液的BHA.BIIT、EQ峰面积或峰高，单位为微伏·秒或毫米（uV·s或mm)：一称样量，单位为克（）：
样液的进样体积，单位为微升（ul）。妇样品用柱层析净化处理，试样中BHA,FQ和BHT的含量X，以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg)，按式(3)计算。
A, Xm XVV.
AXm×V,
式中：
V—样液进样前定容体积，单位为毫升(mI)；V-
样品提取液分取过柱体积，单位为毫升（mI)。4.2.4.2.4结果表述
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留到小数点后-位。4.2.5重复性
++++.+( 32
在重复性条件下，同分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
附录A
（资料性附录）
GB/T 17814-2011
丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹和没食子酸丙酯标准品的高效液相色谱色谱图丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹和没食子酸内酯标准品的高效液相色谱图见图A，1。AU
食子酸丙酷
基羟基画香醚
乙氧喹，
二丁基羟基甲苯。
16.0018.0020.0
图A。1标准溶液的高效液相色谱图2200
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附录B
（资料性附录）
气相色谱法的程序升温图
B.1毛细柱的程序升温图见图B.1。25c/min
B.2填充柱的程序升温图见图13.2。17n ℃
毛细管柱的程序升温图
2s'c/min
填充柱的程序升温图
11 min
1o min
GB/T 17814--2011
（资料性附录）
丁基羟基尚香醛、二丁基羟基甲苯和乙氧喹标准品的气相色谱图C.1丁基羟基苗香醚、一二丁基径基甲米和艺氧唑标准品的毛细管柱气相色谱图见图心.1。9
1——丁基羟基商香醚；
2三基羟基甲苯，
3艺我。
图C.1丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧喹标准品的毛细管柱气相色谱图9
GB/T17814—2011
2丁基羟基香醚、一丁基腔基甲苯、乙氧唑标雅品的填充杜气相色谱图见图C.2。2
1基羟基香醛；
2基羟基巾萃
3艺载医
丁基羟基菌香醚、二丁基羟基甲苯和艺氧喹标准品的填充柱气相色谱图
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