GB/T 27821-2011 化学品 细菌DNA损伤或修复试验方法 GB/T27821-2011 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了化学品细菌DNA 损伤或修复试验的试验原理、试验方法、试验步骤和试验数据及报告。 本标准适用于化学品细菌DNA 损伤或修复试验。
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准与美国环境保护局(UnitedStatesEnvironmentalProtectionAgency,USEPA)预防、农药及有毒物质办公室(theOfficeofPrevention,PesticidesandToxicSubstances,OPPTS)的OPPTS 870.5500:1998细菌DNA(脱氧核糖核酸)损伤或修复试验(Healtheffecttestguidelines—Bacterial
DNAdamageorrepairtests)(英文版)技术性内容一致。
本标准做了下列结构和编辑性修改:
———介绍部分改为引言;
———增加了范围一章(见第1章)。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准起草单位:中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所。
本标准主要起草人:刘清君、李朝林、林铮、史晓祎、吴维皑。

ICS13.300;11.100
中华人民共和国国家标准
GB/T27821—2011
化学品
细菌DNA损伤或修复试验方法
Chemicals-Bacterial DNA damage or repair test2011-12-30 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2012-08-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。GB/T 27821—2011
本标准与美国环境保护局（UnitedStatesEnvironmentalProtectianAgcncy，USEPA）预防、农药及有毒物质办公室(thc Officc of Prevention，Pesticides and Toxic Substances,OPPTS)的 OPPTS870.5500：1998细菌DNA（脱氧核糖核酸》损伤或修复试验（Healtheffecttestguidelines-BacterialDNAdamegeor repairtcsts)(英文版>技术性内容一致，本标推做了下列结构和编辑性修改：一介绍部分改为引言
增加了范围一章见第1章)。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标准起草单位，中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所。本标准主要草人：刘清君、李朝林、林铮、虫晓祎、奚维I
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GB/T 27821—2011
本标准参考了USEPAOPFTS870.5500199B细菌DNA（脱氧核糖核酸）损或修复试验（（英文版）。该指南是美国环境保护局（UnitedStatesEnvironmentalProtectionAgeney，USEPA）预防、农药及有毒物质办公室（theOficeofPrevention，PesticidesandToxicSubstances,OPPTS）制定，用来评价农药和其他有毒物质安全性的系列测试指南之一。是OPPTS整合了二个相关部门的测试指南和要求而最终形成，这三个相关部门的测试指导分别是依据美国联邦法规（CodeofFedcralRegulations，Title4o），第一章的R部分的污染预防和有毒物质办公室（theOfficeofPollutionPreventionand Taxics，OPPT）制定的测试指南和要求，美国国家情报社出版的（theNationalTcchnicalInfarmationScrvice，NTIS)农药规划办公室(theOfficeofPesticideProgtams，OPP)的谢试指南和要求，以及世界经济合作与发展组织(theOrganizationforEconomicCoaperationandDevelopment，OECD)出版的测试指南。依据有毒物质控制法规(theToxic Substances ControlAct,15U.S.C.2601)和联邦杀虫剂、杀真菌剂和杀啮齿类动物剂法规(theFedcralInsecticide，FungicideandRodenticideAcr（7U.S.C.136，etSeq.），为满足对测试数据的要求，USEPA把多套指南整合而形成一套最终的OPPTS测试指南，以降低不同测试程序引起的差异。
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1范围
化学品细菌DNA损伤或修复试验方法GB/T27821—2011
本标推规定了化学品细菌DNA损伤或修复试验的试验原理，试验方法.试验步骤和试验数据及报告。
本标雅适用于化学品细菌DNA摄伤或修复试验，2试验原理
细菌DNA损快或修复试验可用来测试DNA损伤，在一套修复功能健全的菌和修复功能缺陷菌株试验中，修复缺陷菌株的细胞死亡和生长抑制表现不同。该试验本身并不是用来重突变事件，而是通过检测受试物与遗传物质的相互作用检测其遗传毒性。通过检测修复功能健全的菌和修复功能缺陷菌株表现出的不同的生长抑制作用，测试化学品对修复功能健全的野生型菌株和修复功能缺陷的突变型菌株不同的致细胞死亡作用。修复功能缺陷的突变型菌抹通常是一种或多种调控DNA损恢够复酶缺陷的菌株。
本测试方法可用来检测化学品是否能够与细胞DNA反应导致细胞生长抑制或致死亡作用。化学品与DNA的相互作用可以通过特异的细胞惨复系统识别。本方法选择特异DNA髂复基因完好和缺陷的一对菌，由于DNA修复缺陷菌株不能修复某化学品引起的DNA摄伤，其表现为细脑趋向于生长抑制或趋向于死亡。
本方法的参考物质包括但不限于氧摄素(chloramphenicol)和甲基磺酸甲酯(rnethyl ethancsul-lonate)
3试验方法
3. 1方法的选择
可选用不同的方法进行试，本方法宜选用以下两种方法：在固相基质上进行的测试（扩散试验）；b）在液相基质上进行的测试(悬浮试验)。3.2万株选择
3.2. 1 常用菌株
宜选择大肠杆菌（Escherichia coti potA，W3110/p3478)和枯草杆菌（Bacillus subtilis rec,H17)M45。也可选择其他菌抹。
3.2.2葡株的准备和保存
菌株保存液的准备和保存、生长条件、菌株的鉴定以及所需表型的验证等都应采用好的微生物试验方法，面且都应记录在案。
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GB/T 27B21—2011
3.3菡株的培养
应选用良好的微生物方法，使用新鲜的细菌培养物培养细菌。记录细胞所处的生长期和细胞密度满足实验设计的要求。
3.4代谢活化
应设置加与不加代谢活化系统的平行对照组。带用的代谢活化系统是经酶诱导剂（物）处理过的啮齿类动物的肝与浆微粒体酶系。也可选用其他种属、组织或方法。3.5对照组
3.5.1平行对照
每一次试验都应设置阳性对照、阴性对照和济剂对照。3.5.2阴性对照
阴性对照应不表现出明显的生长抑制作用（即对两种菌株的影响是相同的）。常选氯霉素。3,5.3基因型特异对照
可选用甲基磺酸甲酯作为大肠杆菌试验的基因型特异阳性对照，选用丝裂霉案作为枯草杆菌试验的基因型特异阳性对照。
3.5.4阳性对照用来保证代谢活化系统的有效性试验的阻性对照参考物质，包括代谢活化系统成根据试验选用的活化系统类型确定。3.5.5其他阳性对照
可选择共他阳性对照参考物质。3.6受试物
3.6.1溶剂
受试物、阳性对照和阴性对照都应溶解在恰当的溶剂中，试验前用溶剂稀释备用。3.6.2染毒浓度
最初试验应选择较宽的染毒浓度范围，染毒的上限恭度的选摔应根据细胞毒性的结果和受试物的落瞬性来确定。受试物的细胞薄性绪果学代谢活化系统的影。对子摔解性高的无毒化学品，做根现其体情况逐步确定最高剂量。因为扩散试验的结果以获得的生长抑制作用带的直径或范围表示，所以培养血或培养板中加人的受试物的量应完全一致。如有阳性反应，应用更窄滋度范围进行重复确认。4试验步骤
4.1扩散试验
4.1.1培养血扩散试险
培养血扩散试验可采用两种方法：TTTKAONTKACA
GB/T 27821—2011
8）琼脂中加人单一菌株进行铺板或把菌株涂在琼脂表面，受试物加在琼脂表面的滤纸上；b）DNA修复功能健全的菌株和修复功能缺陷菌株划在间一琼脂表面，把含有受试物的培养Ⅲ置于琼脂表面，与细菌接触。
4.1.2培养板扩散试验
在培养板扩散试验中，既可把细菌加在琼脂中辅板也可把细菌涂在琼脂表面，把受试物溶液加在含琼脂的培养板中。
4.2邀浮试验
4.2.1用受试物对细菌悬获进行染毒，根据细菌存活量（克隆形成数）判断受试物的作用是依赖于时间还是依赖于浓度。
4.2.2对于避清的细菌悬滋，可用一系列的受试物稀释获染毒，得出每-菌株最低的抑制浓度，并可通过观察培养后是香出现可见的生长现象来验证。4.2.3可使用单一剂量的受试物处理成对的细菌悬获（通常最初是辉独的），通过比较轻泽独度增加速率的改变判断不同的抑制作用，得出阳性结果。4.3培养的数量
如选用培养血扩散试验，每一稀释度至少应在两个单独的培养血进行试验。对于获体悬浮试验，至少应使用两个独立的释本确定存细胞的教量4.4：培养条件
试验的所有培养血都应采用相同的培养条件，通常为37它，1h-24h。5试验数据和报告
5.1结果处理
5. 1. 1 扩散试验
应以生长抑制带的直径(以mm 计)或生长抑制带的范围(以 Ⅱm计)表示结果,如果有剂量-反应数据，应使用相同的单位。
5.1.2液体悬浮试验
5.1.2.1以剂量-反应形式给出菌株的存活数据，宜给出每一菌株存活百分数或存括比例，或者给山两种菌株的相对存活比例。
5.1.2.2结果也可表示为一定存活率的浓度（如Dsn表示37%存活的浓度）。该数据来源于存活曲线。淤度应以单位体积的量表示,即率尔浓度。5.1.2.3结果还可表示为最小抑制浓度或最小致死浓度。根据液体培养基中是否出现可的生长得出最小抑制浓度：根据半周体培养基上的受试物稀释被度得出最小致死浓度。5.1.3原始数据
所有的试验中，度应以或验处理时的最繁浓度表示，括提供原始效据，包括实际翘试数，如净值对于扩散试验·应说明培养血或培养板的直径，测量结果应说明是否减去了培养血或培养板的直径。此外，还应说明变试物是否出现快速，弥散及双向的生长抑制带。如果出现了双向生长抑制带，应说明对3
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内带和外带是否都进行了测量。5.1.4活性计数
以某一稀释度下培养血真正的计数和涂板的体积或原始滴度（细胞数每毫升)表示。不应仅提供最终的结果（如比率、差异、存活比)，而不提供原始试验数据。5.2统计评价
应选用恰当的统计方法进行评价。5.3结果的判断
5.3.1阳性结果的判断有多个标准，其一为修复缺陷菌株出现具有统计学意义的剂量相关的抑制趋势或死亡差异。另一标准为至少在一个测试点，出现可重复的、具有统计学意义的阳性反应。5.3.2如果某一受试物在修复缺陷菌株上未见具有统计学意义的剂量相关的抑制趋势或死亡差异，在所有的测试点，也没表现出可重复的、具有统计学意义的阳性反应，即可认为该受试物与所用试验系统中的遗传物质没有相互作用。
5.3.3在评价时应同时考虑生物学上的显著性和统计学上的显著性。5.4测试评价
细菌的DNA损伤或修复试验既不是用来测量DNA损伤本身，也不是用来测景突变。该试验是检测DNA损伤表现出的细胞死亡或生长抑制，如果在某--试验系统中，受试物的DNA担伤试验的结果为阳性，但在另一个试验系统中为阴性，如果没有更好的试验数据，其结果很难判断。5.5测试报告
试验报告应包含以下信息：
\—-所用细荫的种属；
—试验菌株的生长期：
培养基的组分：
所旧制备代谢活化系统和试验所用其他方法的详细资料；一处理方法，包括使用剂量和剂量选择的原理、阳性对照和阴性对照的选择原理：-细胞死亡程度的判定方法，
一剂量-反应关系（如果能够提供）。4
考文献
GB/T 27821-2011
[1] Ames, B. N. et l. Methods for dctecting carcinogens and mutagens with the Salmonellarmammalian-microsome mutagenicity test.Mutation Research.1975,31:347-364[2] Kada, T. et al, In vitro and host-mediated rec-assay proceduren fol screening chenical mutasgens; and phloxinea mutagenic red dye detected. Mutation Research. 1972,16:165-174[3] Leifer,Z. et al, An evaluation ol bacterial DNA repair lests for predicting genotaxicity andcarcinogcnicity,A report of the U, S. EPA's Gene-Tox Program. Mutation Research, 198l,87:2ll-297[4J Slater,E.E, et al, Rapid detectiun of mutagcns and carcinogens. Cancer Rcscarch. 171,3l:970-973
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