GB/T 27859-2011 化学品 沉积物-水系统中摇蚊毒性试验 加标于沉积物法 GB/T27859-2011 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了加标于沉积物法评估沉积物-水系统中摇蚊毒性的试验方法。 本标准适用于评估化学品长期暴露对于处在沉积物-水中的淡水双翅目摇蚊属(Chironomussp.)幼虫的影响。
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准与经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则218《沉积物-水系统中摇蚊毒性试验 加标于沉积物法》(英文版)技术内容相同。
本标准做了下列结构和编辑性修改:
———为与现有系列国家标准一致,将标准名称改为《化学品 沉积物-水系统中摇蚊毒性试验 加标于沉积物法》;
———将OECD218中的“介绍”作为本标准的“引言”;
———将OECD218中的附件1“术语和定义”作为本标准的第3章“术语和定义”。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准起草单位:江苏出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。
本标准主要起草人:张军祖、陈会明、周秋红、徐炎、丁华、陆卫群。
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T21809 化学品 蚯蚓急性毒性试验

1cs 13.300
中华人民共和国国家标准
GB/T 27859—2011
化学品
沉积物-水系统中摇蚊毒性试验
加标于沉积物法
Chemicals-Sediment-water chironomid toxicity test-Spiked sediment imethod
2011-12-30 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2012-08-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草GB/T27859--2011
本标准与经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则218《沉积物-水系统中摇蚊毒性试验加
标于沉积物法（英文版)技术内容相同。本标准龄了下列结构和编辑性修收：-为与现有系刻国家标准一致，将标推名称改为化学品标于流积物法；
将【ECD218中的“齐绍”作为本标准的“引言”；沉积物-水系统中播蚊毒性试验加将 QECD 218 中的附件1“术语和定义\作为本标准的第 3竞\术语和定义”。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委显会（SAC/TC251)提出并归口。本标准起草单位：江苏出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标谁主起堂人：张军相，陈会明、周秋红，徐炭、丁华、陆卫群TTTKAONTKACA
GB/T27859-2011
本标推用于评估化学品长期暴麟对处在沉积物中的谈永双翅目摇蚊属（ChironomtssP.）动虫的影响它以已有的Chironamusripari和Chironamusentans的毒性试验方法为基础，上述播蚊牵性试验方法已在欧洲-·和北美建立并通过了比对试验。本标准也可使用其他已有充分实证的播蚊种类，如Chironomusyoshimatsziripi。应根据试验的应用目的选择适当的暴露场景。本标准中的暴露场景是在沉积物-水系统中将定量的受试物质添加于沉积物中，即加标于沉积物。该暴露场景用于模沉积物中存在的化学品的蓄积水平。
要用沉积物中的生物测试的受试物质通常可在这个系统中存在很长时间。沉积物中的生物可通过多种途径暴露受试物质。每种暴露途径的相对重要性，以及每种暴露的时间对总体毒性效应的贡献，取决于相关化学品的理化特性。对于吸附物质(如1g>的物质），或与沉积物共价结合的物质,让受试生物摄取加了受试物的食物可能是一条重要的暴露途径。为了不低估高亲脂性物质的衰性,可考虑在使用受试物之前向沉积物中加人饲料。为了将所有潜在的暴露途径纳人考虑之中,本标准将重点关注长期暴露，C.riparius和C.yoshimatsui的试验持续时间为20d28d,C.tentans为28d65d。如果因特殊目的，需要短期数据，例如研究不稳定化学品的毒性效应，可用附加的平行试样进行试验，并在10 d后放弃。
试验的最终结果为羽化的成虫总数和羽化时间。如果需要额外的短期数据，建议只能适当增加额外的平行试验,在试验进行 10 d后,进行幼虫的存活和生长的测量。本标准建议使用人工配制沉积物。与天然沉积物相比，配制沉积物有几个优点：一因为配制流积物为可再生的“标准化基体”，减少了实验的不确定性，并且没必要去寻我未被污染的清洁沉积物来源，
试验可在任何时候开始，而不必面对试验沉积物的季节性变化，也不必对沉积物进行预处理，以去除本土动物群。使用配制沉积物也减少了去野外收集足盘的用于常规试验的沉积物的相关费用：
使用配制沉积物，使囊性数据可以相互比对、从而进行物质的毒性分类，TTKANYKAcA
1范围
化学品
沉积物-水系统中摇蚊毒性试验
加标手沉积物法
本标准规定了加标于沉积物法评估沉积物-水系统中播蚊毒性的试验方法。GB/T 27859-—2011
本标推适用于评枯化学品长期暴露对于处在流积物-水中的綫水双翘目播蚊属（Cironm记sP.）幼虫的影响，
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T21809化学品蛎娜急性毒性试验3术语和定义
下述术语和定义适用于本文件。3. 1
formuated sediaent
配制筑积物
用莱模拟天然流物物理成分的混合物，地可称为再生沉积物、人工沉积物或合成沉积物。3.2
上覆水overlying water
试验容器中处于沉积物之上的水。3.3
间荫水interstitialwater orporewater沉积物和土壤颗粒之间的水。
spiked sediment
加标沉积物
已经添加了受试物的试验用沉积物。4原理
将一龄播蚊缺虫暴露于一系列含有不同浓度的受试物的沉积物-水系统中进行试验。先将受试物加人沉积物中，待烧杯中的沉积物和水陈化后，将一摇蚊幼虫引人烧杯。在试验结束时，测量摇蚊羽化数和发育速率。如果需要，也可在10后测整存活幼虫数和质量（使用适当的附加平行试样）。所测实验数据可用回归模型分析，以估计导致羽化率或幼虫存活率或生长率下降<%的浓度（如15%有效淤度EC15,半数有效浓度EC等),或者用统计假设检验来测定无可观察效应浓度(NOEC)或者最低可观察效应被度（LOEC)。后者需要用统计检验方法，以将效应值与对照值进行比较。1
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5受试物信息
应了解受试物的溶解度,蒸汽压、经测盘或计算而得的在沉积物中的分配量、以改在水和沉积物中的稳定性等。还需要有一种可靠的分析方法，用于上覆水，间隙水和沉积物中受试物的定量测定,并具有已知的和报道过的推确度和检出限。有用的信息还包括受试物的结构式，纯度、化学归宿（如衰减、生物与非生物降解等）。如果受试物质的理化性质导致其很难进行本试验，则可参考相关文献-，6我考物质
定期进行参考物质的试验，以验证试验方案和试验条件的可靠性。已成功应用于比对试验和有效性研究的参考毒物有林丹、氟乐灵、五氟苯酚、氯化锯和氯化钾[1-2.5-,a7。7质量保证与质量控制
为使试验有效，应满足下列条件：a）试验结束时，对照组的羽化率不应低于70%[1.的；b） 对照容器巾的 C. riparius 和 C, yashimatsui 应在引人后的 12 d～23 d 内羽化为成虫;C. tentans 则带要 20 d~65 d;c）试验结束时,应测虽每个试验容器中的 pH值和溶解氧浓度。溶解氧浓度应不低于该温度下空气饱和值（ASV)的60%，所有试验容器中上覆水的PH值应在6.0～9.0之间；d）水温变化不超过土1.D女。可用恒温室来控制水温，并按适当的时间间隔进行记录。B试验方法描述
8.1试验容器
试验在直径为8cm的600mL玻璃烧杯中进行。也可使用其他容器，但应确保上覆水和沉积物的适宜深度。沉积物表面应足够为每条幼虫提供2cm～3cm的面积。沉积层深度与上再水深度之比应为1.4。试验容器和其他与试验系统直接接触的器具应全部用玻璃或其他化学情性材料（如案叫剩乙烯>制成。
，B.2受试物种选择
试验所选用的适宜物种为C.irius。也可选用C.tentn，但试验操作更困难，试验周期更长。也可选用Cyoshimatsui。附录A提供了C.riparius的详细培育方法。其他种类的培育条件也可获取，如C,tentans和C.yoshimatsuicn)，试验前应确认受试物种类，但如果使用室内培育的生物，可不必在每次试验前做如此确认。
8.3沉积物
8.3、1优先选用配制沉积物。如果使用天然沉积物，应做性质表征（至少应测PH值、有机碳含量：也建议测定其他参数，如碳氮比和粒度等），并且该天然沉积物未受污染，不存在与播蚊竞争或捕食播蚊的其他生物。在用于摇蚊毒性试验以前，建议先将天然沉积物在与后续试验相的条件下陈化数天。下列配制沉积赖是以GB/T21809中使用的人造土衰为基础的，推荐在本试验中使用t.412
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—4%～5%(干重)泥炭:PH值尽可能在 5. 5～6. 0之间;重要的是应来用粉末状泥炭,研磨成粉末(粒度≤I mm),只能空气于燥。—20%（千重)高龄粘土（高岭石含量最好大于30%）。—75%~76%（重）石英砂（以细砂为主，50%以上的石英砂颗粒应在50μm～200μm）。—加人去离子水，使最终混合物中的水分含量为30%～50%。—加入化学纯磁酸(CaCO,)将最终混合物的 pH值调节至 7. D士0,5。一最整混合物中的有机碳含量应为2.0%士0.5%，可分别用适显的上速泥炭和石英砂调节。8.3.2泥炭、高龄粘土和石英砂的来源应清楚。沉积物组分应经检查无化学污染（如重金属，有机氣化合物，有机磷化合物等）。附录B描述了配制沉积物的制备情况。如果能证实在加人上覆水后，不会发生沉积物组分的分离（如泥炭颗粒的漂起），并耳泥炭或沉积物已充分陈化，也可用干燥组分直接混合进行制备。
附录和附录C列出了可使用的释水的化学指标，任何符合这些措标的水均可作试验用水，在整个培育和试验过程中，如果摇蚊能够存活于其中而未显不适，则任何适宜的水，包括自然水（地表水），配制水（参见附录A）以及除氯的自来水等，都可用作培育用水和试验用水。试验开始时，试验用水的PH值应在6.0~-9.0之间,总硬度不大于400 mg/L(以CaCO：计)。但是,如果环疑硬度离子与试验物质之间有反应，则应使用硬度低一些的水（因此，在此情况下不能使用EledtMt介质，蒸见附录B)。在整个试验过程中应自始至终使用同-类型的水。附录C中所列的水质特性指标每年至少应测定两次，当怀凝这些指标可能发生显著变化时，也应进行检测。8.5储备准-加标沉积物
通常将受试物溶液直接加人沉积物中，以制备成选定浓度的加标沉积物。将受试物溶解于去离子水中制得储备液，再用振荡器.搅拌器或人工混合的方法将储备液与配制沉积物混合。如果受试物难溶于水，可将其溶于尽可能少的适宣有机溶剂中（如正已烷、丙酶或氯仿）；将此溶液与10g石英细砂混合，每10多石英砂适合一个试验容器的量，有机溶剂被挥发直完全从右英砂中去除再将该份石英础与--个烧杯中的适量沉积物合。只有易挥发性试剂才可以用来助溶，分散或乳化受试物。在配制沉积物时，应考虑由受试数与石英砂组成的混合物带人的英秒的量（即在配制沉积物时相压减少右英砂的用量）。注意应确保加入沉积物的受试物完全均匀地分布于沉积物中，必要时可分析副样以測定其均勾性。
9试验的设计
9.1总则
试验设计涉及选择试验装度的组数以及浓度的间距（组距），每个浓度的试验容器数和每个试验容中的幼虫数。应对 EC点的估算,NOEC的估算,以及限度试验的设计进行描述。9.2回归分析的设计
9.2.1效应浓度（如EC15,ECs)和所关注的受试物质的效应浓度范围应包含在试验所用的液度范围内。一般说来，当效应浓度处于试验浓度的范围内时，评估效应浓度(E心)的准确性、特别是有效性可得到提高。应避免出现大大低于最低阳性滋度和大大高于最高浓度的情况。探导液度范围的预试验有助于选择拟采用的浓度范围。
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9.2.2如需估计EC，，应至少设置5组试验浓度，每个浓度3份平行试伴。为使评估模型更为准确，试验的浓度应足够多。浓度间随比例因子应不大于2（除非剂量响应曲线的斜率很小）。当不同响应的试验淤度的组数增加时，可以减少每个淤度的平行试样的组数。增加平行试样组数或减小试验浓度的间隔可减小试验结果的置信区间。如果需要评估幼虫10的存活和生长情况，则需增额外的平行试样。
9.3评估NOEC/LOEC的设计
如需评估NOEC/LOEC，应设置5组试验浓度，每个浓度至少4个平行试样，浓度间隔比例因子应不大于2。为了保证足够的统计效能，以便在5%的显著水平上（力=0.05>检测出与对照组20为的差异，平行试样的组数应足够多。如评估生长率,可用方差分析法(ANOVA)，如Dunnett 检验和 Wil-lieans 检验等=-1p。在进行羽化率评估时，可用 Cochra-Armitagc 检验、Fishcr 精确检验（经Bonferroni修正）或者Mantel-Hacntzal检验。9.4限度试验
如果在探寻浓度范围的预试验中没有观测到任何效应，则可进行限度试验（一个试验浓度和一个对照浓度)。限度试验的目的就是在一个足够高的浓度下进行试验，排除该赖质可能产生的毒性效应。限度值设定在一个预期在任何情况下都不会出现毒性浓度，推荐浓度为1000ng/kg（干重）。试验和对照各需至少6个平行试样。应证明试验有足够的统计效能，能够在5%的显著水平上(产一0.05)检测出与对照组20%的差异。对于度量的效应结果(生长率和质量），如果数据满足1检验的要求（正态，齐性差），则检验是一种合适的统计方法。如果数据不能满足这些要求，可以应用方差不齐检验，或者非参数检验，如Wilcoxon-Mann-Whithcy检验，对于羽化率，则可用Fishcr精确检验。10
试验步驿
10. 1 暴露条件
10.1.1加标沉积物-水系统的制备10.1.1.1受试物的加人推荐参照GB/T21809中描述的加标步骤。将加标沉积物放人试验容器，再加人上覆水,形成一个体积比为 1 ：4 的沉积物-水系统(见 8. 1 和 8. 4)。沉积层厚度应为 1. 5 cm~3c丑。在向水住体中品人试验溶液时，为了避免沉积物分层和再饮徽起薇小颗粒悬浮在水中，可在沉积物上盖一个圆形塑料片，把落凝倒在塑料片上，然后立即将塑料片移开。矩可以用其他合适的器其。10.1.1. 2应在试验容器上加一个玻璃血之类的盖子。必要时,试验过程中可加使水达到初始的体积以补偿水分的挥发。只能加人蒸馏水或去离子水以避免盐他增加。10.1.2陈化
标沉积物-水系统制备完成后：应让受试物在水相和沉积物中进行重新分配--4..13]。陈化应在与试验相同的温度和通风条件下进行。适宜的平衡时间取决于流积物和化学品的特性，可能是数小时到数天，在罕见情说下可达几个星期（4周5周）。由于长时间将导致许多化学品的降解，所以不必等待平衡出现，而建议将平衡时间定为48，平衡期的后期，应检测受试物在上疆水，间隙水和沉积物中的浓度，至少要检测受试物在最高试验浓度和--个较低浓度的试验系统中的分布情况，这些对受试物质的分析谢定结果可用于计算质量平衡，表述与实测浓度有关的检验结果。10.1.3加入受试生物
10. 1. 3. 1 在向试验容器中加人受试生物的 4 d~5 d前,应将卵块从培释器中取出,移至加了培择介质4
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的小容器中。可使用培养器中现成的已陈化介质，也可用新配制的介质。如果用后者，应向培养介质中加人绿，和/或几小滴将切片鱼食磨细后的悬浮液的滤出液（参见附录A）。只能使用刚刚产出的卵块。正常情况下，卵出生2d3d后幼虫就开始孵化(C.riparius，温度20下2d~3d;C.tentans，温度23 下1d～4di.osmatui,温度25下1d~4d),幼虫至成虫共生长四龄,每龄4d~d。用于试验的是一龄效（孵出后23或14）。效虫处于一龄可通过满量其买充觉度来确定10. 1.3.2用一根钝头吸管将20 只一龄幼虫随机放人每一个已含有加标沉积物和水的试验容器中,向试验容器加人幼虫时，只能停止通风，加入后再保持24 h。每种浓度所加人的幼虫数量根据所使用的不同试验设计而定，用EC点估算法时每种浓度至少60只，而用NOEC测定法则至少为80只，10.1.4试验浓资
10. 1.4. 1为了选定正式试验的浓度范围,可进行浓度范围的预试验:为此,需要使用一系列间隔较大的受试物质浓度。在与正式试验相同的据蚊表面密度条件下，将操蚊暴避于每一种受试物质浓度中一段时间，这样即可估算出适当的试验浓度。淤度范围的预试验不需要平行试样。10. 1. 4.2正式试验用的试验被度是根据探寻浓度范围的预试验的结果来决定，至少要选用 5 种度。浓度的选定应与9.2和9,3的要求相符。10.1.5对照
试验时要准备好对照容器，这些容器中不加人受试物质，但要如入沉积物。对照容器也要备好适当数量的平行试样（见9.2和9.3）。如果在8.5使用了某种溶剂，则要增加沉积物溶剂对照。10. 1, 6 试验系统
应使用静态系统，在某些特殊的情况下，比如水质指标变得不再适合受试生物或者影响化学平衡时《例如：水中溶彝的氧气含壁过低，排泄物含量过高，或者从沉积物中析出的矿物质影响永的PH值或硬度时），也可使用半静态或流动系统，间断性或持续性地更新上部水体。尽管如此，通常情说下最好使用其他的改费上都水体质量的方法，比如通风：而避免使用半静态或流动系统。10.1.7饲料
应及时给幼虫投食,最好每天一次或者每周至少三次。对于最初 10 d内的小幼虫，每条幼虫0. 25 mg/d--0, 5 mg/d(C. yoshimatti 应为 0, 35 mg~0. 5 mg)的鱼饲料(一种水悬浮液或者磨碎的精细饲料,例如 Tetra-Min或 Tetra-Phyll,详见附录 A)应足够了。对于大一些的幼虫,饲料应稍多些:在余下的试验中,每条幼虫 0. 5 mg/d-~1. 0 tg/d 应足够了。 如果发现真菌生长或者对照中观察到死亡率，则所有试样和对照中的饲料供给量应减少。如果不能停止真菌的生长，则试验应重做。当试验强吸附物质（例如1gK。>5的物质）或者与沉淀物共价结合的物质时，应在陈化期前向配制沉积物中加人足量的何料以确保幼虫的生存和自然生长。对此，应使用植物性饲料替代鱼饲料。例如,加人 0.5%（千重）的磨细的植物叶子，叶子来源于刺薄麻（Uitzicadioeca）、桑树（Morusalba）.白三叶草（Trifoliumrepens）.薇菜（Spinaciaoleracea），或者其他植物原料（Cerophyl或者透期纤维素）。10. 1. 8孵化条件
10.1.8.1加人幼虫24h后要给试验容器中的上疆水柔和通风并且保持到试验结束(应注意裕解氧的度不得低于ASV的60%）。通风是通过固定在沉积层之上2cm～3cm处的一根玻璃巴斯德吸管进行的（即每秒1个或数个泡沫）。当试验挥发性化学物时，则不能给沉积物-水系统通风。10.1.8.2试验应在20 ℃土2 ℃的恒温条件下进行，对于C,tentans 和 C.yashimatui,推荐的温度分别是23±2℃和25±2℃。通常使用16h的光照周期，光照度应为500lux～1000lux。5
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10.1,9暴时间
最露从幼虫加人加标容器和对照容器时就开始。C.riparius和C.yoshimatui的最长暴露时间是28d,C.tentans是65d。如果蚊羽化较早，试验可在对照容器中最后一只成虫羽化之后的至少5d后结束。
10.2观赛
10.2.1羽花
10.2.1.1测定发育时问间和完全羽化的雕雌蚊总数，从其羽状融角可轻易识别雄蚊。10.2.1.2每周至少进行三改观紊，与对照容器中的幼虫相比较，目估加标容器中的幼虫的任何反常行为（例如离开沉淀物、非正常游动）。在预期的羽化期间，成每天对羽化蚊计数，每天记录完全羽化蚊的性别和数量。经过鉴别之后，成把蚊从容器中移出。应记录试验终止前的所有产出的卵块，然后移出，以防止幼虫再次引人沉积物。应记录能观赛到的未能羽化的蛹数量。羽化的测量方法见附录D。10.2.2发育和存活
如果需要幼虫10d的存活和发育资料，应在试验开始时，额外准备试验容器，以便在随后的试验中使用。使用250的滤网过滤从这些额外的试验容器中敢出的沉旋物，满出幼虫。对死亡的界定是死去，或者对机械刺激没有反应。未能再找到的幼虫也要统计为死亡（那些在试验初期就死去的幼虫可能已经被微生物分解）。测定个试验容器中存活幼虫的干重（应无杂质），计算每个试验容器中的平均单个幼虫干重。确定存活的幼虫处于哪个虫龄是很有用的，为此应测量每个幼虫的头壳寇度。10.3分析试验
10.3.1受试物的浓度
10.3.1.1试验开始（即加人幼虫）前，针对每种试验浓度条件，应至少从其中的一个试验容器中取出流积物，检测其中的受试物浓度。建设在试验的开始和结束时，至少对最商浓度组和一个较低浓度组中的上覆水、间原水和沉淀物样本进行定。受试物浓度的检测结巢可以显示受试物在水-流积物中的行为或分布情况。
10.3.1.2当要敏期间测量(例如第7d),以及需要分析大其的样本时,样本的取出势必影响整个试验系统，此时应采用额外的试验容器；这些额外的试验容器在与正式试验容器相同的条件下进行处理（包括引入受试生物），但不用来作生物学观察，仅用于从中进行取样分析。10.3.1.3推荐用离心法分离间源水，条件为：10000g(g为自由落体加速度值）、4℃、30min。但是，如果能够证实受试物不被吸附在过滤器上，也可以用过滤法。在一些情说下，因为试样量太少，几乎不可能分析间隙永的浓度。
1.3.2理化餐数
用适当方法测基试验容器中的PH和温度（见第7章）。在试验开始和结束时，应测暨最高装度的个试验容器以及对照容器中的硬度和氮度。11数据和报告
11.1结果处理
11. 1. 1本试验的目的是测定受试物对摇蚊发育速率和完全羽化的雌雄蚊总数的影响,或者在为期6
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10 的试验中测定受试物对存活幼虫的数量和质量的影响。如果没有迹象显示播蚊性别对统计灵度存在差异时，则雌雄的结果可以合并统计，灵敏度差异存在与否可用统计方法判定，例如X\-r×2表检验。在为期10d的试验中，应测定幼虫存活数和每个容器中的平均个体干重。11.1,2根据试验开始时测得的沉积物中受试物浓度来计算效应浓度，效应浓度应以干态质虽为基础。11.1,3为了计算ECsc或其他EC，值，每个试验容器的统计数据值可当作真实的平行试验值。计算在何EC，的置信区间时，应考虑这些数值之间的偏差，或者要证明偏差小到可以忽略不计。当适用最小平方模式时，每个试验容器的统计数据值需通过转换来改普偏差的同质性。但计算EC，值时，应将响应数据转换回原值。
11.1.4为了测定NOEC/LOEC当用假设检验法进行统计分析时,应考患到每个试验容器的统计数据值的偏差，此时可用套的ANOVA法：或者，当不符合通常的ANOVA法设定时，则需要进行更多更充分的试验-2]。
11.2羽化率
11.2.1羽化率是离散数据，当剂量-效应关系预期为单向，并且这些数据也符合这一预期时，可用递减的方法进行Cochren-Armitage检验。否则，应使用Fisher精确检验或者Bonfeeroni-Holm修正力值的Mantel-Haentzal检验。当相同浓度的平行试验的偏差比二项式分布更大《通常被称为“外二项式偏差），则应用稳键的Cochran-Armitage检验或者Fisher精确检验。11.2.2每个试验容器中蚊的羽化总数n，除以加入的幼虫的数量na，即得羽化率，见式（1)：ER=n
式中：
ER—·-羽化率；
n。一每个容器中羽化蚊的数量；，每个容器中加人的幼虫数。
11.2.3当存在外二项式偏确差时，最适合于大样本量的可选方法就是把羽化率当成一个连续的效应值。当剂量-效应关系预期为单向，并且ER值也符合这，-预期时、应用像Williatn检验这样的程序。当剂量-效应关系不保持单向时，则适用Duanett检验。这黑把大样本量定义为：在一个平行试验（一个容器)中，羽化数和未羽化数都超过5。11.2.4使用ANOVA方法时，ER的值应该通过平方根-反正弦转换或Turkcy-Freeman转换以获取一个近似正态分布并使方差齐性。当使用绝对频数时，可以应用Cachran-Artnitagc检验，Fisher精确（Bonferrari)检验或Mantel-Haentzal检验。平方根-反正弦转换是对ER的平方根求反正弦(sine-值
11.2.5使用回归分析计算羽化率EC,（例如可使用probit[\]、logit，Weibull、或合适的商用软件等）。如果不能用回归分析（例如部分效应值少于两个），则使用其他非参数方法比如移动平均或简单插补。11.3发育速率
11.3.1平均发育时间表示由从刚引人动虫(试验第0d)到大群实验性羽化成虫所跨越的平均时间（为了正确计算发育时间，应考虑幼虫引人时的虫龄），发育速率（单位：1/d）是发育时间的倒数，表示每天羽化的幼虫的比率。对于评估沉积物每性研究而宫，发育速率更重要，因为与发育时间相比，它的偏差更低，更均一，更接近正态分布；因而更有效的参数检验程序可以用于计算发育速率而不是发育时间。因为发育速率是一个连续效应值，EC值可以使用回归分析来估算(32-z3]。11.3.2对于下列统计检验，观察第x天所观察到播蚊数量假定为从第工天到第-L天（L=观察间隔的长度，通常为1d）中羽化而成。每个容器的平均发育速率（）根据式（2)计算：GB/T 27859—2011
式中；
每个容器的平均发育速率；
观察间隔指数：
观察间隔最大值：
观察间府中所羽化的播蚊数耳：f
至实验最后阶段所羽化的据蚊总数（=乙f)在观察间隔1中所羽化的摇蚊发育速率。11.3.3#
在观察间隔中所羽化的摇蚊发育速率r：按照式（3)计算：r -1/(d; --
式中：
d：——观察的天数(从加人幼虫起算的日期)，1：—观察间隔的长度（日期,通常为1d）。11.4试验报告
11.4. 1受试物：
（2）
一物理特性,相关的物理-化学特性[溶解度，蒸汽压，土斑(或沉淀物中)的分配系数,水稳定性等」；
化学识别信息（通用名、化学名、结构式以及CAS号等），包括纯度和定量分析方法，11.4.2受试生物：
一试验使用的生物的种类,学名、来源和饲养条件：一处理卵块和幼虫方法的信息：一加人试验容器时受试生物的虫龄。11.4.3检测条件：
使用的沉积物，如：天然或人工配制的沉积物！对于天然沉积物，应记录沉积物取样地区的位置并作描述。如可能，还应包括污染史和天然沉积物的特性:PH值、有机碳含盘、碳氮比率和粒度（如合适);配制流积物的制备：成分和特性（在试验开始前有机碳含盘，H值，水分等）；一试验用水的准备（如使用配制水）及其特性（在试验开始前的氧浓度，PH值，传导率，硬度等）一沉积物和上覆水的厚度；
上覆水和间隙水的体积，沉积物分别含间水和不含间隙水的质量；试验容器(材料和尺寸)；
加标沉积倒的方法：检测浓度，平行试样组数和使用的溶剂（著使用）加标沉积物-水系统的稳定平衡阶段：持续时间和状态：孵化条件：温度，光照周期和强度，通风（频率和强度）：喂养方面的具体信息包括饲料的种类、制备、喂养数量和喂养方案。11.4.4结果，
理论试验浓度，实际测量的试验浓度和快定试验容器中试验物范度的所有分析结果：试验容器中的水质，如：PH值、温度、溶氧量，硬度以及氨度：如果在试验过程中对蒸发了的试验用水进行了补偿，则应记录；每天每个容器内成长为雄蚊和惟蚊的数量；各
一·：每个容器内疫能成长为摇蚊的幼虫的数量GB/T27859—2011
一一每个容器内单个劲虫的平均于态质量;如合适，测量每一龄虫的平均干态质量；每个平行试样和每个检测浓度的羽化百分率(雄蚊和雌蚊合计)；每个试验容器中的完全羽化成蚊的平均发育率和处理率（雄蚊和雌蚊合计）；估计毒性效应值，例如 EC（及其相关的置信区间）,NOEC 和/或LOEC,以及所用的统计方法
结果讨论，包括任何增离本标准会对试验结论产生的影响。9
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