GB/T 27644-2011
基本信息
标准号： GB/T 27644-2011
中文名称：禽疱疹病毒2型荧光PCR检测方法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
下载格式：.rar .pdf
下载大小：201KB
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
GB/T 27644-2011 禽疱疹病毒2型荧光PCR检测方法
GB/T27644-2011
标准压缩包解压密码：www.bzxz.net
标准图片预览
标准内容
1CS11.220
中华人民共和国国家标准
GB/T 27644—2011
禽疱疹病毒2型荧光PCR检测方法Protocol of real-tirne PCR for detecting Gallid Hepers Virus 22011-12-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会國
2012-04-01实施
本标准按照GB/T 1.1-2009的规则起草。本标由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。GB/T 27644—2011
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、扬州大学、河荫农业大学本标准要起草人：詹爱军，刘文博、王新卫、卢体康、花群义、陈书堰、秦智锋陈兵高小博。TTKONKAcA
1范围
离疱疹病毒2 型荧光 PCR 检测方法本标准规定了商疱疹病毒2型荧光PCR检测的操作方法。本标准适用于离疱疹病毒2 型的鉴定及其流行病学调查、诊断、检疫和监测。2规范性引用文件
GB/T27644—2011
下刻文件对子本文件的碰用是必不可少的。凡是往日期的引用文件，仅注口期的版准适用丁本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单>适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语
下列缩略语适用于末文件，
Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阅值时所经历的环数。DNA：deoxyribatiucleieacid脱氧核糖核酸dNTP.deoxy-ribonucleoside triphosphate三磷酸脱载核糖核苷。含有 dCTP、dGTP，dATPdTTP四种脱氧核糖核苷，
EDTA;ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸。GHV2,GallidHerersVirus2离疱疹病毒2型(马立克氏病病毒血清1型）。MDMarck's Discasc马立克氏病。PBS:phosphatebelanced solution磷酸盐缓冲生理盐水。PCR：polymcresechainrcaction聚合酵链式反应。Real-time PCR.Real-time polymerase chain reaction实时费光幕合酶链反应。
Taq醇：Thermusaquaticuspolymerasc耐热DNA合酶。4试剂
4.1试剂级别：除另有规定，本方法试验用水应符合 GB/T 6682规定的二级水，所用化学试剂均为分析纯。
4,2含疱疹病毒2型荧光PCR检测试剂盒，一20 ℃保存,组成及使拍注意事项参见附录A。4.3引物和操针序列（产物长度142bp）上游引物：5*CCACCACCTCCCATCTGTAC3”下游引物 5*GACAAGGCTGAGCGTAAACC 3*TaqMan探针 5＇ACACGGCTCGGTAACAGGACACAATG 3，其 5*端和3*端分别标记 FAM和BHQ(或 Tamra Eclipse)。
4, 4:1%肝素钠,配制方法见 B. 1,4 ℃保存。4,5三氧甲烷，带温保存。
TTTKONYKAA
GB/T 27644—2011bzxZ.net
4.6异丙醇，使用前预冷至一20℃。4. 7无水乙醇。
4.875%乙醇,采用无水乙醇和炙菌双水配制+使用前预冷至一20七，4. 9 0. 01 mol/L PBS,pH7. 2,配制方法见 B. 2.5号
器材和设备
5. 1无菌注射器,l nL,5 mL,1U mL,25 mL, 100 mL,5.2一次性无菌塑料较。
5. 31. 5 mL 无 DNA 酶和 RNA 酶的 Fppenidorf 管。5.40.2mL无DNA麟和RNA酶的PCR薄壁管、八联管或96孔板。5.5荧光PCR检溯仪：
5.6高速台式冷冻离心机，可控温至4℃、离心速度可达12000g以上。5.7扳薄器。
5.8研。
5.9普通冰箱和超低温冰箱，规格2℃8℃，20℃，—80℃。5. 10 微量移获器,0 μL~2 xL,1 μL~10 μL,10 μI,~100 μI.,20 μL~200 μL,100 μL~1 000 μL,并配与移液器匹配的无DNA酶和RNA酶的吸头。6样品的采集和处理
6.1样品的采集
6. 1. 1 全血
用预先加入1%肝素钠的无菌注射器直接吸取全血至无菌Eppendori管中，盖.上管盖并编号。6.1.2羽毛和组织脏器
取待检羽毛（从根部挤出少盘羽髓）、肝脏、肾脏和脾脏样品装人-次性塑料袋或其他火菌容器，编号，送实验室。
6.2样品贮运
样品采集后，放人密闭的塑料袋内（一个来样点的样品，放一个塑料袋），于保温箱中加冰、密封，送实验案。
6. 3 样品处理
6. 3. 1 金血
3000g离心30min，取棕黄色层转人无菌的1.5mlEppcndort管中，加人500μLPBS洗涤3 000g离心15 min,弃上清,编号备用。6.3.2羽毛或组织脏器
取待检拌品2.0各加I人2mLPH7.2的0.01mol/LPBS于洁净、灭菌并烘干的研体中充分研磨：分装编号备用。
TTIKANYKACA
6.4样本存放
CB/T 27644—2011
制备的样本在2℃8℃条件下保存应不超过24h若需长期保存应置一70C以下，但应避免反复冻融《冻避不超过3饮),淋巴细胞样品在2 ℃-8℃条件下保存。7核酸提取及荧光PCR检测
7.1注意事项
实验室注意事项见附录C
7.2核酸提取
7. 2. 1 取 n 个灭菌的 1. 5 mL Eppcndarf 管(n 为被检样品之和),编号。7.2.2每管加入250 rL DNA提取液(参免附录 A).然后分别加入被检样本各 250 μL,一份样本换用-个吸头，再加入10μL蛋白酶K(1mg/mL）,混匀器上振荡混勾,56℃消化2h,加人等体积的三氧甲烧，混勾，15000g离心15rmin。7.2.3取与7.2.1相同数量灭菌的1.5mLEppendorf管，吸取7.2.2各管中的上清液转移垒相应的管中，不能吸出中间层，然后再分别加人等体积的一20℃预冷的异丙醇，颠衡混匀。7.2.415000g离心15min，小心倒去上清，倒置于吸水纸上，沾于腋体；加入800叫L75为乙醇，颠倒洗涤。
7.2.515000g离心10min，小心倒去上清，倒置于吸水纸上，尽量沾于液体。7.2.65000离心108.小心例去上清，将管壁上的余获体甩到管部，用微量如样器将其吸干，室温干燥 5 min~l0 min。
7.2.7加入10μL灭菌双蒸水，溶解管壁上的DNA，6000g离心5s，1℃保存备用。若需长期保存须置一80 ℃ 冰箱
7.3扩增检测
7. 3. 1 扩增试剂准备
在反应混合物配制区进行。
取出MIDVPCR反施液（参见附录A)，在室温下融化后，1000g离心5s，每个PCR反应按表1配制PCR反应混合液（需配制反应液数量一样本个数十阴性对照十阳性对照）：表1
MDVPCR反虚液
21. 75 μL
Taq酶
0. 25 μL
将以上PCR反应试剂按使用量吸取到一个离心管中，充分混句，然后在每个PCR管中分装22μL，转移至样本处理区。
7. 3. 2加样
在已分装有PCR反底混合液的PCR管中分别人已提取好的核酸3μL，盖上管益，将PCR管放人荧光PCR检测仪内：记录样本放置顺序。3
TTIKANYKACA
GB/T 27644--2011
7.3.3PCR扩增检测
在扩增检测区进行。
7.3.4反应条件设定
第—步50℃2min，95℃5ming
第步：95℃58+6045.40个循环
60℃时设置采集荧光。
7.3.5荧光素设定
ReportDye设定为FAM,QuenchDye设定为BHQ(或Tarnra或Eclipsc)：Referencedye设定为白带校正荧光尺X，如使用其他品牌仪器应设为空白或自带校正。8条件设定及结果判定
8.1条件设定
禽疱疹病毒2型阳性对照和阴性对照质控标准：阳性对照有S型PCR扩增曲线，而且Ct值≤35；阴性对照无S型PCR扩增曲线，而且 Ct值显示为无。否则此次实验结果无效，8.2结果判定及描述
8.2.1Ct值35的样本为阳性，表明离疱疹病毒2型核酸阳性，Ct值显示为尤的样本为阴性样本，表明臀疱疹病毒2型核酸阴性。
8.2.2对于35TTTKAONYKACA
A. 1试剂盒组成
附录A
【资料性附录）
试剂食的组成疫使用说明
每个试剂盒可做48个检测，包括以下成分：GHV2PCR反应液
Taq酶
阴性对照
阳性对照
双蒸水
DNA提取被
A.2说明
1.1mL×1 管
12. 5 μLX1管
1, 0 mILX1 算
1.0mLX1管
1mL×1管
12.5 mlX1管
GB/T 27644—2011
A.2. 1 GHV 2 PCR 反应液(1X):含 50 mmol/L KCl,10 mmol/L Tris-HCl(pH8. 3),2. 5 mmol/LMgCl,,0, 2 mmal/L dNTP mix,上,下游引物各 20 nma1/mL,探针 10 nmal/mL,1U Taq ,5%#油。A2.2DNA提取液主要成分：20mmol/LTris-HCl(pH7.4),200mmol/LEDTA,1%SDS.A3使用时的注意事项
A.3.1在检测过程中，严防不同样品间的交受污染，A.3.2反应液分装时应避免产生气泡，上机前检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。5
CB/T 27644—2011
B.11%肝素钠
附录B
（规范性附录）
试剂的配制
称取肝素钠1.0g+溶于三蒸水中，定容至100mL,0.22μm过滤除菌，4℃保存。B,2磷酸盐缓冲液(0.01mo1/LPBS.pH7.2)先配制A液.B液：
A液(0.2mol/I.NaH.PO,溶液)：
称取一水合磷酸二氢钠(NaH,PO·H.0O)27.6g，或一水合磷酸二氢钠（NaH,PO、·2H.0）31.2g，溶于蒸馅水中，定容至1000mLB液(0.2mol/LNaHPO.溶液）：
称取十水合磷酸氢二钠(NaHPO·12H.O)71.6g，或二水合磷酸氢二钠(Na:HPO.·2H20)35.6g,溶于蒸馏水中.定容至1000mL称取8.5g氯化钠，用适盘热缩水溶解，量取14mLA液和B液36mL，调节pH值至7.2,用蒸馏水定容至 1 L
C.1实验室设置要求
附录C
（规范性附录）
离疱疹病毒 2 型荧光 PCR检测方法的实验室规范CB/T27644—2011
C.1.1实验室分为三个相对独立的T作区域：样本制案区、PCR反应混合物配制区和检谢区.并且明确标识。
C.1.2每一区域须有专用的仪器设备，并且明确标识。C.1.3进人各个工作区域严格遵循单一方向顺序，即只能从样本制备区、PCR反成混合物配制区至检测区。
C.1.4在不同的工作区最应使用不同题色或有明显区别标志的工作服，工作眼不能穿离各特定区域。C.1.5实验室清洁时应按PCR反应混合物配制区、样本制备区至检测区的顺序进行。C,1.6不同的实验区域旋有其各的清洁用其以防止交叉污架。C.2工作区域仪器设备配置
C. 2. 1 样本制备区器设备配盟2 ℃～8亡冰箱；—20 ℃冰箱，一80 ℃超低温冰箱冰冻台式离心机(≥12 0001/min)混勾器;微量加样器(0.5 μL~10 μL,5 μL~20 μL+20 μL200 μL,200 μL1 000 μL);可移动紫外灯。C.2.2PCR反应溅合物配制区仪器设备配置2~8冰箱20℃冰箱；台式离心机30001/min）混勾器：微量加样器（0.5μL~10μ5~20，20~200μ，200μ1000μ)；可移动紫外灯。C,2.3检测区仪器设备配置
荧光PCR仪，可移动紫外灯；打印机，C.3各工作区域功能及注意事项
C. 3. 1样本制备区
C.3.1.1标本的保存，核酸提取、贮存及其加人至扩增反应管在样本制备区进行。C.3.1.2可在本区内设立正压条件以避免邻近区的气溶胶进人本区造成污染。C.3.1.3用过的加样器吸头应放入专门的消毒（例如含次氧酸钠溶液）容器内。实验室桌椅表面每饮工作后都要清洁，实验材料（原始样本、提取过程中样本与试剂的混合液等）如出现外溅，应作清活处理并作出记录。
C.3.1.4对实验台适当的紫外照射(254nm波长，与工作台面近距离）可以帮助灭活病毒和消除核酸的污染。工作后通过移动紫外线灯管来确保对实验台面的充分照射。C. 3. 2 PCR 反应混合物配制区C.3. 2. 1试剂的分装和反应混合液的制备在本区进行。GB/T27644--2011
C.3.2.2在整个本区的实验操作过程中，操作者应戴乎套。工作结束后应立即对T作区进行清洁，本工作区的实验台表面应可耐受诸如次氯酸钠等的化学物质的消毒清洁作用。C.3.3检测区
C.3. 3. 1在本区进行荧光 PCR检测。PCR扩增产物不能在本实验室开盖，PCR管应抛弃在远离本实验室的垃圾箱中。C. 3. 3.2
实验完成后采用紫外灯对实验室进行充分照射。C. 3. 3. 3
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。
中华人民共和国国家标准
GB/T 27644—2011
禽疱疹病毒2型荧光PCR检测方法Protocol of real-tirne PCR for detecting Gallid Hepers Virus 22011-12-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会國
2012-04-01实施
本标准按照GB/T 1.1-2009的规则起草。本标由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。GB/T 27644—2011
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、扬州大学、河荫农业大学本标准要起草人：詹爱军，刘文博、王新卫、卢体康、花群义、陈书堰、秦智锋陈兵高小博。TTKONKAcA
1范围
离疱疹病毒2 型荧光 PCR 检测方法本标准规定了商疱疹病毒2型荧光PCR检测的操作方法。本标准适用于离疱疹病毒2 型的鉴定及其流行病学调查、诊断、检疫和监测。2规范性引用文件
GB/T27644—2011
下刻文件对子本文件的碰用是必不可少的。凡是往日期的引用文件，仅注口期的版准适用丁本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单>适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语
下列缩略语适用于末文件，
Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阅值时所经历的环数。DNA：deoxyribatiucleieacid脱氧核糖核酸dNTP.deoxy-ribonucleoside triphosphate三磷酸脱载核糖核苷。含有 dCTP、dGTP，dATPdTTP四种脱氧核糖核苷，
EDTA;ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸。GHV2,GallidHerersVirus2离疱疹病毒2型(马立克氏病病毒血清1型）。MDMarck's Discasc马立克氏病。PBS:phosphatebelanced solution磷酸盐缓冲生理盐水。PCR：polymcresechainrcaction聚合酵链式反应。Real-time PCR.Real-time polymerase chain reaction实时费光幕合酶链反应。
Taq醇：Thermusaquaticuspolymerasc耐热DNA合酶。4试剂
4.1试剂级别：除另有规定，本方法试验用水应符合 GB/T 6682规定的二级水，所用化学试剂均为分析纯。
4,2含疱疹病毒2型荧光PCR检测试剂盒，一20 ℃保存,组成及使拍注意事项参见附录A。4.3引物和操针序列（产物长度142bp）上游引物：5*CCACCACCTCCCATCTGTAC3”下游引物 5*GACAAGGCTGAGCGTAAACC 3*TaqMan探针 5＇ACACGGCTCGGTAACAGGACACAATG 3，其 5*端和3*端分别标记 FAM和BHQ(或 Tamra Eclipse)。
4, 4:1%肝素钠,配制方法见 B. 1,4 ℃保存。4,5三氧甲烷，带温保存。
TTTKONYKAA
GB/T 27644—2011bzxZ.net
4.6异丙醇，使用前预冷至一20℃。4. 7无水乙醇。
4.875%乙醇,采用无水乙醇和炙菌双水配制+使用前预冷至一20七，4. 9 0. 01 mol/L PBS,pH7. 2,配制方法见 B. 2.5号
器材和设备
5. 1无菌注射器,l nL,5 mL,1U mL,25 mL, 100 mL,5.2一次性无菌塑料较。
5. 31. 5 mL 无 DNA 酶和 RNA 酶的 Fppenidorf 管。5.40.2mL无DNA麟和RNA酶的PCR薄壁管、八联管或96孔板。5.5荧光PCR检溯仪：
5.6高速台式冷冻离心机，可控温至4℃、离心速度可达12000g以上。5.7扳薄器。
5.8研。
5.9普通冰箱和超低温冰箱，规格2℃8℃，20℃，—80℃。5. 10 微量移获器,0 μL~2 xL,1 μL~10 μL,10 μI,~100 μI.,20 μL~200 μL,100 μL~1 000 μL,并配与移液器匹配的无DNA酶和RNA酶的吸头。6样品的采集和处理
6.1样品的采集
6. 1. 1 全血
用预先加入1%肝素钠的无菌注射器直接吸取全血至无菌Eppendori管中，盖.上管盖并编号。6.1.2羽毛和组织脏器
取待检羽毛（从根部挤出少盘羽髓）、肝脏、肾脏和脾脏样品装人-次性塑料袋或其他火菌容器，编号，送实验室。
6.2样品贮运
样品采集后，放人密闭的塑料袋内（一个来样点的样品，放一个塑料袋），于保温箱中加冰、密封，送实验案。
6. 3 样品处理
6. 3. 1 金血
3000g离心30min，取棕黄色层转人无菌的1.5mlEppcndort管中，加人500μLPBS洗涤3 000g离心15 min,弃上清,编号备用。6.3.2羽毛或组织脏器
取待检拌品2.0各加I人2mLPH7.2的0.01mol/LPBS于洁净、灭菌并烘干的研体中充分研磨：分装编号备用。
TTIKANYKACA
6.4样本存放
CB/T 27644—2011
制备的样本在2℃8℃条件下保存应不超过24h若需长期保存应置一70C以下，但应避免反复冻融《冻避不超过3饮),淋巴细胞样品在2 ℃-8℃条件下保存。7核酸提取及荧光PCR检测
7.1注意事项
实验室注意事项见附录C
7.2核酸提取
7. 2. 1 取 n 个灭菌的 1. 5 mL Eppcndarf 管(n 为被检样品之和),编号。7.2.2每管加入250 rL DNA提取液(参免附录 A).然后分别加入被检样本各 250 μL,一份样本换用-个吸头，再加入10μL蛋白酶K(1mg/mL）,混匀器上振荡混勾,56℃消化2h,加人等体积的三氧甲烧，混勾，15000g离心15rmin。7.2.3取与7.2.1相同数量灭菌的1.5mLEppendorf管，吸取7.2.2各管中的上清液转移垒相应的管中，不能吸出中间层，然后再分别加人等体积的一20℃预冷的异丙醇，颠衡混匀。7.2.415000g离心15min，小心倒去上清，倒置于吸水纸上，沾于腋体；加入800叫L75为乙醇，颠倒洗涤。
7.2.515000g离心10min，小心倒去上清，倒置于吸水纸上，尽量沾于液体。7.2.65000离心108.小心例去上清，将管壁上的余获体甩到管部，用微量如样器将其吸干，室温干燥 5 min~l0 min。
7.2.7加入10μL灭菌双蒸水，溶解管壁上的DNA，6000g离心5s，1℃保存备用。若需长期保存须置一80 ℃ 冰箱
7.3扩增检测
7. 3. 1 扩增试剂准备
在反应混合物配制区进行。
取出MIDVPCR反施液（参见附录A)，在室温下融化后，1000g离心5s，每个PCR反应按表1配制PCR反应混合液（需配制反应液数量一样本个数十阴性对照十阳性对照）：表1
MDVPCR反虚液
21. 75 μL
Taq酶
0. 25 μL
将以上PCR反应试剂按使用量吸取到一个离心管中，充分混句，然后在每个PCR管中分装22μL，转移至样本处理区。
7. 3. 2加样
在已分装有PCR反底混合液的PCR管中分别人已提取好的核酸3μL，盖上管益，将PCR管放人荧光PCR检测仪内：记录样本放置顺序。3
TTIKANYKACA
GB/T 27644--2011
7.3.3PCR扩增检测
在扩增检测区进行。
7.3.4反应条件设定
第—步50℃2min，95℃5ming
第步：95℃58+6045.40个循环
60℃时设置采集荧光。
7.3.5荧光素设定
ReportDye设定为FAM,QuenchDye设定为BHQ(或Tarnra或Eclipsc)：Referencedye设定为白带校正荧光尺X，如使用其他品牌仪器应设为空白或自带校正。8条件设定及结果判定
8.1条件设定
禽疱疹病毒2型阳性对照和阴性对照质控标准：阳性对照有S型PCR扩增曲线，而且Ct值≤35；阴性对照无S型PCR扩增曲线，而且 Ct值显示为无。否则此次实验结果无效，8.2结果判定及描述
8.2.1Ct值35的样本为阳性，表明离疱疹病毒2型核酸阳性，Ct值显示为尤的样本为阴性样本，表明臀疱疹病毒2型核酸阴性。
8.2.2对于35
A. 1试剂盒组成
附录A
【资料性附录）
试剂食的组成疫使用说明
每个试剂盒可做48个检测，包括以下成分：GHV2PCR反应液
Taq酶
阴性对照
阳性对照
双蒸水
DNA提取被
A.2说明
1.1mL×1 管
12. 5 μLX1管
1, 0 mILX1 算
1.0mLX1管
1mL×1管
12.5 mlX1管
GB/T 27644—2011
A.2. 1 GHV 2 PCR 反应液(1X):含 50 mmol/L KCl,10 mmol/L Tris-HCl(pH8. 3),2. 5 mmol/LMgCl,,0, 2 mmal/L dNTP mix,上,下游引物各 20 nma1/mL,探针 10 nmal/mL,1U Taq ,5%#油。A2.2DNA提取液主要成分：20mmol/LTris-HCl(pH7.4),200mmol/LEDTA,1%SDS.A3使用时的注意事项
A.3.1在检测过程中，严防不同样品间的交受污染，A.3.2反应液分装时应避免产生气泡，上机前检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。5
CB/T 27644—2011
B.11%肝素钠
附录B
（规范性附录）
试剂的配制
称取肝素钠1.0g+溶于三蒸水中，定容至100mL,0.22μm过滤除菌，4℃保存。B,2磷酸盐缓冲液(0.01mo1/LPBS.pH7.2)先配制A液.B液：
A液(0.2mol/I.NaH.PO,溶液)：
称取一水合磷酸二氢钠(NaH,PO·H.0O)27.6g，或一水合磷酸二氢钠（NaH,PO、·2H.0）31.2g，溶于蒸馅水中，定容至1000mLB液(0.2mol/LNaHPO.溶液）：
称取十水合磷酸氢二钠(NaHPO·12H.O)71.6g，或二水合磷酸氢二钠(Na:HPO.·2H20)35.6g,溶于蒸馏水中.定容至1000mL称取8.5g氯化钠，用适盘热缩水溶解，量取14mLA液和B液36mL，调节pH值至7.2,用蒸馏水定容至 1 L
C.1实验室设置要求
附录C
（规范性附录）
离疱疹病毒 2 型荧光 PCR检测方法的实验室规范CB/T27644—2011
C.1.1实验室分为三个相对独立的T作区域：样本制案区、PCR反应混合物配制区和检谢区.并且明确标识。
C.1.2每一区域须有专用的仪器设备，并且明确标识。C.1.3进人各个工作区域严格遵循单一方向顺序，即只能从样本制备区、PCR反成混合物配制区至检测区。
C.1.4在不同的工作区最应使用不同题色或有明显区别标志的工作服，工作眼不能穿离各特定区域。C.1.5实验室清洁时应按PCR反应混合物配制区、样本制备区至检测区的顺序进行。C,1.6不同的实验区域旋有其各的清洁用其以防止交叉污架。C.2工作区域仪器设备配置
C. 2. 1 样本制备区器设备配盟2 ℃～8亡冰箱；—20 ℃冰箱，一80 ℃超低温冰箱冰冻台式离心机(≥12 0001/min)混勾器;微量加样器(0.5 μL~10 μL,5 μL~20 μL+20 μL200 μL,200 μL1 000 μL);可移动紫外灯。C.2.2PCR反应溅合物配制区仪器设备配置2~8冰箱20℃冰箱；台式离心机30001/min）混勾器：微量加样器（0.5μL~10μ5~20，20~200μ，200μ1000μ)；可移动紫外灯。C,2.3检测区仪器设备配置
荧光PCR仪，可移动紫外灯；打印机，C.3各工作区域功能及注意事项
C. 3. 1样本制备区
C.3.1.1标本的保存，核酸提取、贮存及其加人至扩增反应管在样本制备区进行。C.3.1.2可在本区内设立正压条件以避免邻近区的气溶胶进人本区造成污染。C.3.1.3用过的加样器吸头应放入专门的消毒（例如含次氧酸钠溶液）容器内。实验室桌椅表面每饮工作后都要清洁，实验材料（原始样本、提取过程中样本与试剂的混合液等）如出现外溅，应作清活处理并作出记录。
C.3.1.4对实验台适当的紫外照射(254nm波长，与工作台面近距离）可以帮助灭活病毒和消除核酸的污染。工作后通过移动紫外线灯管来确保对实验台面的充分照射。C. 3. 2 PCR 反应混合物配制区C.3. 2. 1试剂的分装和反应混合液的制备在本区进行。GB/T27644--2011
C.3.2.2在整个本区的实验操作过程中，操作者应戴乎套。工作结束后应立即对T作区进行清洁，本工作区的实验台表面应可耐受诸如次氯酸钠等的化学物质的消毒清洁作用。C.3.3检测区
C.3. 3. 1在本区进行荧光 PCR检测。PCR扩增产物不能在本实验室开盖，PCR管应抛弃在远离本实验室的垃圾箱中。C. 3. 3.2
实验完成后采用紫外灯对实验室进行充分照射。C. 3. 3. 3
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。