SC/T 2016-2012 拟穴青蟹 亲蟹和苗种 SC/T2016-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T2016—2012
拟穴青蟹
亲蟹和苗种
Mud crah-Broodstock and seedling2012-03-01发布
2012-06-01实施
中华人民共和国农业部
本标推按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，SC/T2016—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。木标准的发布机构不承扭识别这些专利的贡任。本标推出农业部渔业局提出。
本标准出全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会（SAC/TC156/SC2)归口。本标准起草单位：中国水产科学研究院东海水产研究所、浙江省温岭市水产技术推广站。本标准主要起草人：乔振国、马凌波、丁理、T建钢、将科技、丁忠利、陈凯、元磊。1范围
拟穴青蟹亲蟹和苗种
SC/T 2016—2012
本标准规定了拟穴青蟹（Scyllaparamamuasain，Eslanpador1949）繁育用雌性亲蟹及人T培育蟹苗的质量要求、检验方法、判定规则，蟹苗计数方法以及包装与运输，本标适用于拟穴青蟹亲蟹和人下培育出种的质量评定。2规范性引用文件
下列文件对丁本文件的应用是必不可少的。凡足注口期的引文件，仪注期的版本适用丁本文件。凡是不注日期的用文件，儿最新版木(包括所有的修改单)适用」本文件。GB11607渔业水质标准
GB/\T15101.1—2008中国对虾亲虾GB/T20361水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的測定高效液相色谱荧光检测法SC/13018水产品中氯霉紊留量的测定气相色谱法农业部783·号公告12006水产品1硝基喃类代谢物残留量的测定液相色谱串联质谱法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
亲蟹broodstock crab
以作为苗种繁殖亲体为[的已交配的雌性成蟹（含抱卵蟹和未抱卵蟹）。3.2
全甲宽width uf crab shell
拟穴青蟹成体头胸中两侧棘尖端问的直线距离。3.3
抱卵蟹berried crab
附肢抱有待孵化卵块的雌性亲蟹。3.4
仔蟹 crab instar
简写为C，C～C，衣示「期～V期仔蟹。形态与成体相似，胶部弯贴于头胸甲腹面，以爬行为主。3.5
软壳率softshell crabrate
蜕壳片中壳尚未硬化的蟹占苗种总数的百分比。3.6
伤残及伤残率woundanddeformity，woundanddeformityrate附肢缺损数超过2个，或游泳足不齐企，或两个大螯均缺火的蟹苗均视为伤残；伤残苗种数占苗种总数的百分比为伤残率。
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4亲蟹
4.1亲蟹来源
已交配的野牛生蟹或人工养殖蟹4.2亲蟹外观
活力强，对外界刺激反应灵敏，静伏时步足支撑有力；附肢齐全，无外伤，体表无附若物。抱卵蟹卵块轮廓完整，紧实而不松散，未抱卵堡性腺成熟度鉴别参见附录A。4.3亲蟹可量指标
头胸甲宽11 cm以1.,体重250g以,1。4.4亲蟹检疫
无血卵涡鞭虫（Hematridinium5p.）、白斑综合征病毒检出。5苗种
5.1苗种外观
甲壳硬，个体大小均勾；反应灵敏，活力强；无外伤，无附若物。5.2苗种可量指标
各种规格拟穴咨蟹节种的平均体重指标不低于表1所列数值。蟹苗出售应在变态后的第二天。表1拟穴青蟹苗种规格指标要求
发育阶段
5.3苗种可数指标
规格合格率，软壳、伤残率应符合表2的要求a
表2可数指标要求
规格分类
规格合格率，%
较壳.伤线率，
5.4苗种检疫要求
小规橘苗种
（壳宽0.5tm~1.0mm）
不得检旧门斑综合征病每（WSSV）。5.5苗种安全要求
中规格苗种
(甲完究 1. C mm~2. 0 mm)
不得检出氯毒素，硝基峡响类代谢物和孔雀石绿等国家禁用药物残留。6检验方法
6.1亲蟹检验
6.1.1亲蟹外观
以肉眼按4.2要求检查所有亲蟹。6.1.2亲蟹可量指标
6.1.2.1亲蟹全甲宽
用卡尺测最(精度为 0.1 mm)。
6.1.2.2亲蟹体重
大规格苗种
(甲毫宽2. 0 mm以上)
将体表清理卡净，月毛巾等吸十水分后，进行称重(精度为0.1乌）。6.1.2.3亲蟹检疫wwW.bzxz.Net
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血卵涡鞭虫（Hernatodinium sp.）的检疫方法见附录 B,白斑综台征病毒的检疫方法见（GB/115101.1。
6.2苗种检验
6.2.1苗种规格等级检验
根据蟹苗的甲壳宽按5.3的规定划分规格等级：6.2.2苗种外观，软壳、伤残率检验将蟹萌放于洁净平底容器中，在白然光明亮处，目测形态、壳色、附肢利活力等，统计软壳、伤残率。要求检测总数不少于100只。
6.2.3苗种禁用药物检验
6.2.3.1氯霉素
按SC/T 3018的规定执行。
6.2.3.2硝基呋喃类代谢物
按农业部783号公告—1—2006的规定执行。6.2.3.3孔雀石绿
按GB/T20361的规定执行
6.2.4白斑综合征病毒的检疫
按GB/T15101.1·2008中附录B的规定执行。7检验规则
7.1亲蟹检验规则
7.1.1.组批
次采捕的亲蟹为个组批。
7.1.2抽样规则
亲蟹样数为同批进场亲蟹数的5%，最低不得少于3只。7.1.3判定规则
按第章规定的各项指标判定亲蟹是否合格。如有一项指标要求不合格，则判定该批亲蟹为不合格。芥对检验结果有异议，可出第：方按本标准规定的方法重新取样复检，并以复检结果为准7.2苗种检验规则
7.2.1组批
苗种以个育苗池为·个检验批,销售前接批检验。7.2.2抽样方法
唯种抽样数视苗种规格而定，一般一个检验批不少于100只。7.2.3判定规则
按第5竞的规定判定苗种足否合格。如有一项指标要求不合格，则判定该批苗种为不合格。若对检验结果有异议，可由第三方按本标准规定的方法重新取样复检-次，并以复检结果为准。8蟹苗计数方法
8.1无水容量法
适用丁小规格蟹茂的计数。取样器其为測形不锈钢丝网杯，用此网杯捞取集节容器内的蟹苗，逐只3
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进行计数，重复2次。计算每杯蟹苗数虽的算术平均值并按杯数计算山蟹苗总数。8.2重量计数法
适中规格和无规格蟹苗的计数，将得售蟹苗充分洗净后毛巾吸十水分，随机取样，精度0. 01 g的电子天平精确称取5g～10 蟹苗,逐只数,董复2次。取算术平均值计算每克重量的蟹苗只数，并按克数计算出蟹苗总数。9包装与运输
9.1亲蟹包装与运输
抱卵蟹运输需将其鳌足用橡皮筋等绑扎固定后，再放人已装入1/3海水的运输专川塑料袋（容量20L)中充氧水运，每袋一只；未抱卵亲蟹运输月逊布或湿草绳捆绑后装筐，洒水-运，并需在航空专用箱四周开茄干直径」cm小孔，以利于透气。9.2苗种包装与运输
9.2.1苗种水运法
9.2.1.1适用于I期仔蟹的运输。运输用水应符合GB11607的要求。根据运输时间长短，分为短途运输和长途运输。
9.2.1.2运输时间10h以内。以范沫保温箱作为包装容器，箱两边上「I处各开二个长约8cm、高约3m的透气孔，插人伺样大小的铁丝网片，箱底铺设薄形海绵。将蟹苗放人盛有洁净海水的水勺内，稍作搅动分做店缓慢倒人箱内：待蟹苗花海缔表而均匀分布后，倾倒山多余的海水。每个包装箱内的蟹荫数量控制在4000只以下，运输温度不宜超过25℃。9.2.1.3运输时间10h以上。苗袋（适立规格为45cm×o30cm)中放人约1/3沙滤游水，放人经清洗消毒处埋的丝网网片或小快薄形满绵。每袋放人3000只～4000只蟹苗，扎紧袭I1，充人纯氧后装人泡沫茧箱内。运输温度不高于25℃，高温节运输时，箱内可放宵降温设施川于保温。出运输时间以陵晨为宜
9.2.2苗种干运法
本方法适用丁川期仔蟹以上规格蟹苗的运输。将航空专用双层泡沫海鲜箱（单个泡沫盒规格18cn×48cmX13.5cm,两个池沫盒为一箱)内的泡沫盒四边距盒底6cm以1:开启若干个直径约0.5c透气小孔，将经24h以上海水浸泡、清洗、低温处理后的稠谷壳与蟹苗以3：1比例在小盆内充分混合（须注意稻谷充的温度应挖制在25℃左右），再均勺分撒于泡沫盒中。每个泡沫盒散置蟹140g~150g（约了000只期蟹苗），每箱可敬置蟹苗14000只左右。iiKANiKAca-
术交配蟹
发育期
附录A
（资料性附录）
拟穴青蟹雌蟹性腺成熟度的鉴别甲壳两侧下缘性
腺形状
性腺不明显
有“道凝形耶巢线
卵巢品现长月形
卵巢充满头胸甲，尤透
腹脐上方愈合处
t英国点颜色
有不见的色阅点
乳白色
橙黄色
未交配
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Ⅱ 期末并始交配,养 30 d ~
40d后叫成为高
系瘦蟹饲养 15 d~ 20 d 而或
山花蟹何养15d20d而成
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附录B
【规范性附录】
拟穴青蟹亲蟹中血卵涡鞭虫(ematodinium sp.)两种检测方法的比较B.1相差显微镜检测技术
从同批亲蟹中随机取3只亲蟹，川灭菌剪刀剪断步足，快速将血淋巴挤人10%福尔好林固定液中固定，将固定的血淋巴滴少许于载玻片工于柑差显微镜下观察。正常青蟹血淋巴颜色为青蓝色，并具有凝聚性。如血淋巴颜色为淡黄色或浊白色且不能凝固镜检发现血淋已数量减少，并有左卵圆彤，大小为5μtn~10μum不等的类血卵涡鞭虫（Hematudiniumsp.），可初步判断为而l卵涡鞭虫阳性B.2PCR检测技术
B.2.1DNA的提取
川1㎡l.注射器从被检测蟹游泳基部抽取1ml.面淋巴，放入95%乙醇中固定备用。样本于2000r/min离心5min分离两相，弃上清液，加入Tris样品缓冲液解沉淀，瑕500μLF:述样品处理液,加人 88 μL 10%SIS和 4L～~6l.蛋白酶 K(20 mg/mL)港勺;在 55℃水浴中保温 30 min～120mil，期问不断混句；然后，加人等体积的酚/氯仿提！次，取上清液加入2倍休积的无水乙醇，室温冒5min.然后12000r/min离心5min，收集沉淀，用75%乙醇洗涤1次.DNA颗粒用适量的TF缓冲液溶解，置20℃保存各川。B.2.2引物的设计与合成
对GcnBank1公布的面血卵涡鞭虫的18SrDNA(DQ084245)和IIS(DQ925236)的基因序列进行酶切划分析后,设诈一对针对 ITS1 的特异性引物。Priner I:5° CTGATIACGTCCCTGCCCTT -3’Primcr 2: 5: GCATGTCGCTGCGTTCTTC 3'B.2.3目的基因的克隆、序列测定及分析PCR反应体系(25L)为：2.5μl.10Xbuffet、2ul.rNTP(2.5mmol/1)、Primer1和Primcr2（25umol/I.)各0.25μL、TagDNA聚合酶0.2μL、模板0.5L.用灭菌双蒸水补充反应总体积至25μL,将混合物置 PCR 仪中反J应，PCR 循环参数：94℃预变性 5 min 后开始循环,94℃45 s，55℃45 s,721min,共 35个循坏,最后72℃延仲7tnin。5μL IcR产物纶琼脂糖凝胶电泳后,在紫外观察仪上观察或照和：
B.2.4结果判定
取3μLPCR扩增产物迹行1.5%琼脂糖凝胶电泳，病蟹样品可见到能扩增山300bp左右的条带，健康蟹则无此条带。
iTKANiKAca-
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