GBZ/T 248-2014 放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞染色体畸变检测与评价 GBZ/T248-2014 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS13.100
中华人民共和国国家职业卫生标准GBZ/T248—2014
放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞染色体畸变检测与评价Test and asscssment of chromosomal aberrations on occupatioral healthexaminations for radiation workcrs2014-05-14发布
华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2014-10-01实施
根据“中华人民共和国职业病防治法》制定本标准。本标谁按照（B/个1.—2009给出的规则起草GBZ/T248-—2014
本标准起草单位：河南省职业病防治研究院、军事医学科学院放射与辐射医学研究所，中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所、中国医学科学院放射医学研究所。本标准起草人：吕玉民、傅宝华、韩林、赵风玲、陈英、刘青杰、刘建香、刘强、工喜爱、m
1范围
放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞染色体畸变检测与评价GBZ/T 248—2014
本标准规定了放射工作人员职业健康检查中，外周血淋巴细胞染色体畸变检测的微量全血培养、标本制备、染色体畸变分析、结果评价，记录报告方法和质量控制。本标准适用丁放射工作人员职业健康检查，2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GBZ235一2011放射工作人员职业健康监护技术规范3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
放射工作人员radialionworker
在放射工作单位从事放射职业活动中受到电离辐射照射的人员。[GBZ235—2011.3.1]
职业健康监护occupational health surveillance为保证放射工作人员参加工作时及参加工作后都能适任其拟承担或所承担的工作任务而进行的医学检查和评价。
FGBZ235—2011,3.2J
染色体chromosome
遗传物质的主要载体，主要由DNA和蛋白质组成。在细胞分裂的中期用碱性染料染色呈丝状或棒状的小体。符个中期细胞中的染色体均有两条染色单体。3.4
染色体核型
karyotype
用显微描绘的方法把中期分裂细胞的染色体，按照从大到小和着丝粒的位置等形态特征进行排序，称为染色体核型。
chromosomal aberration
染色体畸变
正常染色体在受到物理（如电离辐射）、化学或生物因索作用下发生的数日和结构上的异常。染色体畸变是电离辐射作用的敏感指标之一。GBZ/T 248—2014
染色单体型畸变chromatidtypcahcrration当细胞处于S期或C，期妥到诱变剂作用时1于大部分已通过复制成为两条染色单体，内此断裂可以发生在一条单体上，也可以在两条单体」，从而诱发的畸变。常见的有单体裂（chroumatidgap，ctg），单体断裂（chromatidbreak，ctb），单体缺失（chromatideletian，cte）单体万快（chrumatidexchange，cte），如三射体（triradial，tri）和四射休（quadriradiatus(gr)
染色体型畸变chromosometypeaherralicn当细胞处于C，或G，期受到诱变剂作用时，染色体尚末复制，是单条染色体被击中而断裂、经S期复制后，在分裂中期（M）见到的是2条染色单体在同一部位显小有结构变化。按崎变在体内的转归，可分为非稳定性染色体畸变（unstablechromosomalaberration，Cu）和稳定性柒色体畸变（stablechromusomalaherratiun.Cs）。前者主要包括双着丝粒体（diccnrri:.dic）、着丝粒坏（centricring，r）、无着丝粒环（acentricring，ar）、无着丝粒断片（fragment.[）和微小体（minut，min），其中ar.f和min统称为光着约粒休（acentricsare）等：后者十要包括相丑易位（reciprocaltranslocation，t），倒位（inveraion，inv）利缺失rdeleticmh，del）等，
染色体畸变率frequencynfchrnmosomal aberralion在所观察分析的中期细胞中染色体崎变所占的比率，以每百细胞中的染色体畸变数表示，见式（1）：染色体畸变率=染色体畸变×100%分析细胞数
染色体畸变细胞率Trequencyuf cell withchromosomalaberration-...................I
在所观察分析的中期细胞中含有染色体畸变的细胞比率，以征己细胞中含染色体畸变细跑数表示。见式（2）
染色休临变细胞率二染色体蓝变细胞数×1C0%分析细胞数
4微量全血培养
4.1外周静脉血采集
4.1.1体检时静脉血的采集应在所有放射性检查（如拍胸片、乳腺钥靶检查等）前进行，4,1.2采集受检者静脉血约2 ml.、需肝素抗凝，4.2微量全血培养步骤
将采集的静脉而.3mL(7号针头药2C滴）加人到配制好的5ml.RPM-1640培养液中.轻轻摇勺，在培养瓶上编号并注明培养开始时间和日期。每人次平行培养2瓶。37℃二0.5℃恒温培养箱内培养24h后，每瓶培养液中加人10μg/ml.的秋水仙碱20μL~25μL（终浓度0.04μg/ml0.05μg/nl.)，继续培养24h～28h后收获细胞。或培养开始时加人终浓度为0.015g/ml~0,03/mL的秘水仙碱，培养至48h52h后收获细胞。5染色体标本制备
5.1低渗
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终止培养后用吸管轻轻抽去培养瓶中的上清液，每瓶加人8ml.经37C预温的0.075mol/LKC1，将细胞团块充分吹打均勾后移室10m[.的尖底玻璃离心管中，放入37℃恒温水浴锅（箱）中低渗20 min~30 min
5.2预固定
取出低渗完毕的离心管，每管加人5滴～10滴新配制的固定液（甲醇：冰醋酸体积比=3：1），用吸管吹打混勾，水平离心机中1000r/min~15001/min（约200g~250g）离心8min10min。5.3第一次固定
取出离心管，用吸管吸去清液，沿管整每离心管中加人8mI.固定液，用吸管快速吹打细胞团块并充分吹打混匀，常温下固定20min~30min，在水平离心机中1000/min1500/min（约200g250g）离心8min~10min。
5.4第二次固定
取出离心管，重复第-次固定的操作。5.5制片
取出离心管，吸去上清液，根据细胞团块的大小每离心管中加入3滴～6滴固定液以调节细跑浓度。然后以一定高度（10cm～30cm）将细胞悬液滴在经37℃水预热或在4℃冰箱预冷的洁净载玻片上，室温空气自然干燥。每张玻片滴2滴～3滴。5.6编号
对每一张染色体标本片进行编号，并按照编号做好记录。5.7染色
将用pII6.8的磷酸缓冲液配制的10%吉姆萨（Giemsa）染液均勾涂丁染色体标本片1:，室温下染色8min~1min，以一定倾角（约45°）用自米水轻轻冲洗，洗掉染液后置于玻片架上空温下月然晾干。6染色体畸变分析
6.1染色体畸变阅片方法
6.1.1自法阅片，免费标准bzxz.net
6.1.2按显微镜载物台刻度坐标.在低倍镜下（物镜10倍）从右至左逐列或逐行对每张染色休标本片扫拥式寻找可供分析的中期分裂细胞，找到目标后在油镜（物镜100倍）下计数和分析。每位受检者至少分析100个中期分裂细胞，但作为慢性放射病诊断参考指标时至少分析200个中期分裂细胞。6.1.3中期细胞的选摔：染色体数日为46士1，染色体分散良好，长短适中，各条染色体可清楚辨认。6.1.4出现以下情况的中期细胞不宜作计数分析：a）染色体数日少于45条；
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b）在同一细胞内染色体过于分散，不能在一个油镜视野内观察到；c）染色体形态过度细长或过度短相，d）染色体呈州曲状或紧缩成团：e）染色体分散不良，重叠太多，f）染色太深不能鉴别染色单体交叉重叠：g）同一条染色体的两条染色单体间距离过大。6.2染色体核型分析
6.2.1在油镜下依据染色休的形态进行分组，通过分组确定是否有染色体结构异常。见附录A。6.2.2主要分析计数ace,dic和r等非稳定性染色体畸变（Cu),以及明显的非对称性的t和del等稳定性染色体畸变（Cs）。观察到的架色单体型畸变，如ctb、cte等也应记录，但不作为主要观察指标计数。观察到的崎变需山两名以上分析者复核确认。见附录A。6.2.3伴随dic或r的ae，不再单独数.记录为dic(1)或r(1），如多于dic或的acc数则另计为ace：如光ace伴随的dic或r记录为dic(0）或r(0），以区别细胞在受照后已进人第二次以后的分裂，造acc去失。
6.2.4染色体断裂（chromusomalbreak，csb）指二条染色单体同时断开的距离大于染色单体的横径，应计数为awe。
6.2.5将选择分析的每一个中期细胞记录在染色体畸变分析记录表内。见表B.16.2.6记录畸变的文宁和标记应按国际染色体命名法书写，并记下每一畸变在显微镜的坐标位置。7检测结果评价
7.1无着丝粒休响变率（ace)正常参老值范围0%～3%大于3%为异常。7.2双着丝粒体（dic)、者丝粒环(1)和稳定性染色体畸变（1)率大丁或等于1%为异常。7.3对检测结果异常的受检者，可在3~6个月内复查。8检测报告和归档
8.1对每位受检者应出具外周血淋巴细胞染色体畸变检测报告单。见第B.2章。8.2检测的染色体标本片应保存至下次体检后，受检者登记表、染色体畸变记录表等原始资料应建档长期保存，并建立电子档案。
9质量控制
9.1实验室应通过计量认证或国家实验室认可，并定期参加国家组织的实验室问比对。9.2实验室应有2名以上专业技术人员，经严格训练，能掌握电离辐射生物效应的基础知识，熟练识别各种类型的染色体畸变。
9.3对影响染色体畸变检测质量的实验室条件、仪器设备条件、试剂配制和实验前准备等要求，见附录C。
A：1染色体核型分组
附录A
（资料性附录）
常见的染色体畸变类型及鉴别分析GBZ/T248—2014
正常人体细胞染色体数目为46条，其中44条为常染色体（auto5ome），势2条为性染色体（sr:xchrornosome），正常男性为46，XY；正常女性为46，XX，根据丹佛体系的分组原则，即在常规染色条件下，依据染色体从大到小和着丝粒的位置等形态学特征，将46条分为22对常染色体分为7组）和1对性染色体。具体分组如下A组1-3号3对中或业中养丝粒染色体，B组，4-~5号2对亚中着丝粒染色体：C组6~12号7对业巾着丝粒染色体，D组，13~15号3对端着丝粒染色体：F组，1618号3对亚中着丝粒染色体，F组，19~~20号2对中省丝粒染色体：C红，21~~22号2对端着丝粒染色体，巾于X利Y染色体在常规染色条件下分别与C组租G组染色体在形态上没有明品区别，通常将X染色体列人C红计数，Y染色体列人G组计数。A.2染色体结构畸变的主要类型
A.2.1非稳定性染色体畸变
包括ace包括t.inv、clel等。t和inv虽然引起染色体片段发生位置改变，但遗传物质没有变化，仍保留基内的总数。在细胞分裂过程中，没有力学上的障碍，在子细胞中能保持相对恒定而维续保留下来，A.3常见的染色体型畸变的主要类型A.3.1尤着丝粒断片（[ragment,f）：染色体末端缺失部分形成的一对平行的无者丝粒染色单体，留下带有着丝粒的片段形成末端缺失的染色体（deletion，del)。A.3.2等点染色单体断裂或染色体断（ispchromatidbreakorchromnsomalbreak，tsb）：2条染色单体在相同的位置发生断裂，断裂的远端部分发生了位置移动，且断裂的宽度超过染色单体的横径，形成染色体末端缺失利染色休断片。A3.3微小体（uniute，min）：典型的微小体为一对圆形的染色质球，比光着丝粒断片小。是染色体臀内发生两次断裂，形成个片段，两个断裂之问的片段离开原位形成微小体，余留的两个断端在断面直接连接形成中间缺失染色体。
A.3.4无着丝粒环（acentricring，ir）：对环形无着丝粒的染色单休。它和微小体其实是一种畸变类型，两者的区别断裂点之间的距肉不同。无着丝粒环断裂点间的距离较大，所以形成一对空心圆或央露回降。
A.3.5着丝粒环（cerlricring，r)：一对带有着丝粒的环形染色单体。在染色体长、短臂各发生一次断S
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裂后，带有着丝粒的片段两端断面重新连接形成环状染色体，两个尤着丝粒片段连接成一个断片。所以计数柒也体畸变时，差丝粒环加断片计为一个染色体畸变。芒丝粒环和尤着丝粒环的区别是，前者带有省丝粒.伴有一个断片
A.3.6双省丝粒体和多着丝粒体（dicentricsandpolycentric，dieanctpit）：具有两个或两个以上着丝粒的染色体称为双若丝粒或多着丝粒染色体，为不对称互换。两条或两条以上染色体各发生一次断裂后·具有着丝拉的部分连接形成双着丝粒体或多着丝粒体，而无着丝粒断片连接形成断片。计数染色体畸变时，双着丝粒体也伴随一个断片，计为一个畸变：如果为多养丝粒体（如有个着丝粒），则应换算成1一1个双着丝粒体，并伴有1一1个断片。A.3.7相互易位（reciprucaltranslocatian，t)：两条染色体各发生一次断裂，并相互交换其无着丝粒片段，形成两个结构重排的染色体。如果交换长度是对称性的，也称为对称互换。如果互换的片段大小相差悬殊，则结构重排的两个染色体的形态会发生明显变化，其中一个明显变长，另一个变短，称为非对称五换，可在常规染色条件下识别到。A.3.8到位（invcrsion,inv）：一条染色体发生两次断裂，形成：中、小一个片，中段上下颠倒后与上下两段连接，形成倒位染色体。如果断製处发生在着丝粒两侧，则为臂间倒位（periccntricinversion)；两个断裂如发生在着丝粒一侧（长臂或短臂），形成的倒位为臂内倒位（paracentricinversion）。前者如果两个断裂点与着丝粒之间的距离不等，凶着丝粒的位置发牛改变.可在非显带标本上识别到。A.3.9由于电离辐射可以诱发上述儿种染色体型畸变，所以这些畸变足评价电离辐射所致染色体结构异常的主要观察指标。
A.4常见的染色单体型畸变的主要类型A.4.1染色单体断裂（chiromaitidbreak，ctb）：一条染色单体发生断裂，且远端部分离开了原求的位置，形成染色单体缺失和染色单体断片。A.4.2染色单体互换（cnroelidexchange.cte)，两条或两条以上的染色单体断裂后，染色单体的断裂互换重接后形成的染色体，如三射体（tr）利四射体（qr）等，万换可以发生在不同染色体的染色单体间、称为问互换；也可以发生在一·条染色体的染色单体间或染色体内，为内互换。A.4.3裂隙（gap：g）：一条染色单体上的非染色区（非染色质裂隙）的染色单体出现轻微的错排，光镜下示为很小的裂缝其宽度不超过染色单体横径。裂隙义分为染色单体裂（chronaricdgap，ctg）和等点染色单体裂隙或染色体裂隙（chromosomegapcsg）。A，4.4山于物理，化学和生物因索均能诱发染色单体型畸变，而1L人体受到电离辐射照射后从外周血淋巴细胞观察到的染色单体型畸变与受照剂量无直接关系，所以染色单体型畸变一般不作为评价电离辐射损伤的观察指标
A.5常见的数目异常（内复制，endoreduplication）两次细胞分裂之间染色体不是复制一次而是两次，形成的包含4条姐妹染色单体的异常染色体，称为内复制。
A.6染色体畸变的鉴别分析方法
A.6.1染色体断裂（csb)与染色体裂隙(g)的区别g是染色单体上未染色的部分，藕断丝连仍有染色体的形态特征，且裂缝的宽度不超过染色单体的横径。
A.6.2染色体早分离
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着丝粒位置不明显的染色体，长度符合某条缺少的染色体，尤其是在观繁到形似较大的断片时，要分析是从哪一号染色休上断下的，不能确定求源时，则可能是染色体早分高，不能计为尤着丝粒断片。A.6.3杂质
形态不规则，大小不成对，染色过深或过浅，则可能是杂质，不能计为微小体或无着丝粒断片。A.6.4染色单体交叉
交又部分比着丝粒染色深，其长度正好符台某条缺少的染色体长度，且木观察到伴随的无着丝粒断片，则应排除为双着丝粒体。
A.6.5染色单体末端接触或随体相吸长度正好符合某条缺少的染色体，近端或端部着丝粒染色体（如D组、G组和Y染色体）的数月正常，不具备形成双着丝粒在染色体数量上的条件，则排除双着丝粒体。A.6.6两条染色体的末端相接触
通过调节显微镜的微调旋钮，经什细辩认后可能有接触点·但相接触的两条染色体形态正好符合缺少的染色体没有伴随断片，应考患排除双着丝粒体。A.6.7次缴痕
在放射工作人员体检的一些个体中，有些染色体的臂上可能有一种次继痕区，如1号染色体长臂、2号染色休长臂远心端1/3处、3号染色体长臂接近着丝粒处、9号染色体长臂近心处、16号染色休长臂近心处，是这些个体染色体本身的特征性标志或变异，应将这种次继痕与着丝粒区分开来，可考虑排除为双着丝粒体。
A.6.8等点染色单体裂隙
裂隙区无缢娘收缩现象，仔细分析是哪条染色体，通过计数着丝粒数则可排除是否为双着丝粒体。A.6.9染色单体扭曲
扭两区无痕和浅染现象，仔分析是哪号染色体，通过计数染色体者丝粒数，则可排除是否为双着丝粒体。
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附录B
（资料性附录
外周血淋巴细胞染色体畸变分析记录表和报告单B.1外周血淋巴细胞染色体畸变分析记录表见表B.1。
表B.1外周血淋巴细胞染色体畸变分析记录表受检者编号
染色体检查方法：
载玻片编号：
检测单位：
分析人：
检测月期：
填表说明：
分析细胞数量：
显微镜编号：
复核人：
复核日期：
第页共页
1.用图示法或与命名法相结含填写染色体畸变细胞所在的纵横坐标刻度数值、畸变类型和数量。例如：6.6/136，5，1个畸变仅记符号，2个或以上将数日记在符号前面，如：ace或3ace。2、填写N（Normal>表示未见染色体畸变的中期细胞。3．如果在一个视野中有多个中期分裂相，还应画出在低倍镜下的镜像，以便复核。8
外周血淋巴细胞染色体畸变检测报告单见表B.2。
夜B.2外周血淋巴细胞染色体畸变捡测报告单姓名
检测方法！
微量全血培养。
结果，
染色体畸变率（%）：
畸变类型及数量(个)：
结果评价：
检测日期：
分析人。
染色体畸变细胞率（%）)：
报告日期：
复核人：
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C.1染色体畸变检测实验室
附录C
（资料性附录）
染色体畸变检测的实验室条件和试剂配制C.1.1普通实验室：用于实验的前期准备、试剂的配制、染色体制片，面积10m～20m，配置超净工作台、普通水平离心机、恒温培养箱、冰箱、试剂柜、温箱或水浴锅（箱）等。C.1.2洗刷消毒案：用于洗刷实验川品，零有良好的上下水装置，配置电热烤箱、高压灭菌锅、酸缸等。C.1.3染色体畸变分析室：用于染色体畸变分析，配置光学显微镜、细胞遗传工作站等。C.2染色体畸变检测所需的仪器设备和用品C.2、1超净丁作台：首选双人双面、垂送风。C.2.2恒温培养箱：选择适宜于细胞培养的隔水式恒温培养箱，二氧化碳培养箱更佳。C.2.3离心机：可放置10ml.离心管的水平式普通离心机C.2.4光学显微镜：有白带电源和标人，油镜清晰（100倍），配有数码照相机更佳。教学用显微镜更便于实验人员同时观察辨认染色体畸变。C.2.5灭菌设备：干热火菌或湿热灭菌所需的电热箱（有空气强制对流装置）或热压蒸汽灭菌器C.2.6冰箱：一20℃低温冰箱用于些存配好的试剂和血清）和4℃普通冰箱（用于贮存近期所需的实验用试剂）。
C.2.7液体混合器：用于配制培养液利试剂时搅拌。C.2.8水浴锅（箱）用下染色体的低渗及晟后片滴片等C.2.9细胞培养瓶：可多次使用的无菌玻璃培养瓶（可用19mL圆柱状青毒索瓶替代）或一次性塑料培养瓶。
C.2.10其他物品：尖底刻度离心管（1Cml.）、吸管、载玻片、维形瓶（1000mL）、量筒、烧杯、酒精灯和记号管等。
C.3染色体畸变检测相关试剂的配制（化学试剂使用分析纯及其以上级别试剂）C.3.1肝素钠的配制
称取肝素钠0.4名，加人生理水至100mL，刚成为560IU/mL的肝素钠工作液。121kPa，25min高斥灭菌消毒，冷冻保存长期使。C.3.2RPMI-1640细胞培养液的配制C.3.2.1取市场购头的RPMI-1640培养基粉-袋（10.4g）.倒入1000mL烧杯中，缀慢加人二蒸水至950mI.，边加入边搅拌，然后放在磁力搅拌器上搅拌约30min以上（不能加热），使之完全溶解：C.3.2.2加人无水碳酸氢钠(NaHCO)1,3g调整酸碱度，pH7.0～7.2。C.3.2.3加人终浓度为J00IU/mL的庆人需素，或加100U/mL的青孕素和00mg/ml的链需素。或者如有条件优良的尤菌实验宰，并注意无菌操作，可不加抗生紊。13
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