GBT28940-2012_5b419802e3a5309ce76c0aa606ce76ce GB/T28940-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 11. 020
中华人民民和国国家标准
GB/T28940—2012
病媒生物感染病原体采样规程
Sampling procedure of vcctor infected by pathogensRodent2012-11-20发布
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中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2013-05-01实施
本标准按照GI3/T 1.12009 给岛的规则起本标准中华人民共和国卫生部提出并归口GB/T28940—2012
本标准主要起草单位北京出人境检验检疫局，中国人民解放举卒事医学科学院微生坳流行病研究所、中国疾疾预防控制中心传染疾颈防控治所。A标准主要起草人：享郭天宇刘艳华、任彤、童言德、鲁亮、夏连续。1
1范围
病媒生物感染病原体采样规程
GB/T 28940—2012
本标准规定了鼠及鼠血样和器妆样方法样本的保存方法以及整个过程安全防护，本标准适月于感染或可能感染病源体的鼠类现场采详和保存，2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注后期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文件。凡悬不注日期的引用文件，其最新版木（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求WS233微生物和生物医学实验室生物安全用准则3试剂及材料
3. 1消毒剂
2%膜75%酒精。
3.2抗凝剂
乙二胺匹乙酸（F巧丁A），草酸垫合荆肝素，枸檬酸钠、氟化钢，草酸钾。制备及用量参见附录A。3.3组织、脏器保存液
20%中性甘油盐水,50为廿油磷酸盐缓冲液、组织保存液、RVAlatcr保存液。制备及月量参则隔录B。
3.4麻醉剂
乙碰、氮仿。
3.5其他
液氮、十冰。
4＇实验用品
4. 1实验用仪器设备
生物安全柜、一33℃低温冰箱、高压灭菌器、液氮罐、离心机移液器、带益泌瓷盘、3号～5号一次性针头注射器、直头科镊、服科剪刀，大号镊丁、吸臂、7血、冻存管、针线、鼠袋、鼠固定板、鼠定盒、焚尸炉。
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4.2个人防护用具
白（)色防护服（连体服）、自色长筒袜，长筒雨靴、无粉于套、口罩，眼罩、条虫气雾剂5鼠样本采集
5.1采集要求
捐狱鼠单休装鼠。登记谁获方法、时间、地点、状态（活体、死亡、是否腐败等），鼠样本基本信息（重最、性别、体长、尾长、石后是长，耳高等）。采而和班器组织样△前，用麻醉剂戚碎鼠和鼠体寄生虫，梳检寄生虫后，再进行血液和脏器组织的不渠。5.2鼠样本来集方法
5. 2、1鼠笼法
将鼠笼放置在鼠洞口或鼠道等有鼠活动的地方采集鼠类，诱饵为生花生米独条，成子、红薯块等。5.2.2鼠夹法
将鼠央放量在尿洞口或鼠道等有鼠活动的越力来集鼠类·质饵为生花生来5.2.3粘鼠板法
学粘鼠机破置连鼠润口晚良道进有鼠活动直而水淋茶到的地方采5.2.1寿饵毒杀流
择有鼠清动的场所采用毒饵灭鼠，菜集5.2.5需蒸法
选择有飘活动的密闭场所采压熏蒸灭鼠药灭鼠，采集毒毙鼠。5. 2. 6 其他方法
选择有鼠活动的场所采用翻草堆或插灌等人工捕捉方法采掌鼠类。5. 3鼠血样采集方法
5.3.1左前肢腋窝下采血
，无带诱
将鼠仰卧固定于鼠固定板上，消毒后将左胸皮肤剪开，并将皮肤与肌肉剥离，向左前肢展开循成一袋状,以消毒剪刀将左前肢腋下静脉剪开,用吸管或注射器吸取流出的血液。5. 3,2尾静豚采血
将鼠装人刮定盒内，盖[盒盖，露出鼠尾，用手揉擦或用温水（45℃~5C℃)加温鼠尾，也可用二甲苯等化学药物涂擦鼠尾，使鼠尾静脉充分充血后，用剪刀剪去尾尖，尾静脉血即可流山，用手轻轻从尾根部商尾尖部挤儿下，可以采到数滴座。5.3.3心脏采血
将鼠仰卧固定于鼠固定板上·剪去心区部位的被毛，用碘酊,酒精消毒皮肤，在左侧底3肋～肋2
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间，用左手食指摸到心，右手取连有3号5号针头的注射器，选择心搏强处穿刺，当针头止确刺到心脏时，鼠血由于心携自然进入注射器，即可进行取血。5.3.4眼眶动脉和静脉采面
用左手环住鼠，指和食指尽量将鼠头皮肤握紧，使鼠眼球突出，在兰直头眼科镊，在风右侧眼球根部将眼球摘去，并将鼠倒置，头期下，此时眼眶闪很快流血，将血滴人预先加有抗凝剂的平且内，自到无血液流岛为止。
5.3.5后眼眶静脉丛连续穿剥采血取血时，子从背部捉住鼠，拇指和食指握住颈部，利用对领部所加的压力，使头部静脉淤血，在突出约服球旁分势出片眼压静脉，特消毒的吸管用抗馄剂润其内壁，从内侧银角将吸管转向前，并轻压削入Tenor氏能膜，然后中鼻侧眼量平行地对喉头方向推进，深约4.5切就达到后暇静脉从，血液自然进人吸管内。
5. 3. 6 断头采血
实验者有手握住鼠头部左手握住背都屋出颈部，助手用剪刀在鼠锁部将风头见掉。立即将鼠颈可下，对准口准备好的平扭（故凝血剂），鼠血即可从部很快滴人容器内5.3.7颈静脉来血
将鼠伸卧国定于鼠固走板上·将一侧颈部外测的费毛纯去，月消章液消毒皮肤作股外颈静脉分
离手术，颈静脉暴露清楚后用往射器竹头落静腺平行方向刺人，抽取所需血量，5.3.8
股静脉或股动脉采血
大鼠可进行股静脉或股动脉采血。将鼠醉后剪开腹股消处皮肤，即可看到股箭脉，把此静脉剪断或用注射器采血即可，股动脉较深需利离出，再来血。5.4鼠脏器及脑组织采集步骤
5.4.1所用解剖用具应煮或高压消毒灭菌，将应用器械以部解顺序分次排在灭菌有盖的塘瓷盘内。整个过程在生物安全柜中进行。5.4.2鼠户固定丁解剖盘上腹部向上用消幸液消腹部皮肤。5.4.3以镊了提起耻骨缝前面的皮肤用剪刀剪开。并沿正中绒直剪到下颌部。然后用钝头剪刀或刀柄剥离皮法，再把皮肤向四肢剪打，翻转皮法，剪前先用碘配或酒精消毒5.4.4用无菌剪刀沿正中线白阴部室隔肌为止剪开声行模须升，并切驳肝、脾、肾等脏器放人弥存管中，保存在低温冰箱惑而保存获保存，5.4.5劣换灭菌剪刀，开肌，剪断胸骨两侧软肋骨（呈倒V型），翻起胸骨，恶划敢心脏和肺脏放人冻存管，保存在低温述箱中或加保存液保存。5.4.6取脐组织时，固定头部，用碘酐消，剪开头皮露出头骨。再以碘酊消毒,更换一套无菌剪、镊，沿脑部边缘剪开头骨用剪使脑与骨剥离，敢出整个鼠摘放人炼存管，保存在低温冰箱中或加保在液保存。
5.4.7剖解完毕，高压后按实验室垃圾处现，或将鼠「投人焚F炉荧化，或在75%酒精中消毒后深埋。用75%酒精处理生物要全柜台面，繁外消摄30m1i，所用的器概都要高压消毒。3
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6样本保存
6.1鼠样本的保存
6. 1.1 活鼠
将捕获的活鼠连同鼠笼(夹)装人鼠袋，扎紧袭口，严防跳凿逃遂。6.1.2死鼠
将捕获的死鼠从鼠文上段下单只装人鼠袭,扎紧袋口，严防跳蚤逃逸，6.2月于病原体检测鼠脏器样本的保存6.2.1冷冻保存
月于纽菌，病毒分离和检测的样本可直接冷冻保存（8℃芒冰箱），也町用化学制冷剂（如干冰)或在液氮罐中存，
6.2.2保存液保存
含鼠疫耶尔森菌的组织或脏器的举本可而20为中性油盐水保存。压于病毒诊测的组织样本可效在5C%日油磷酸盐缓冲液中,在5C条件下保存数周;也可用组织保存液保存;或保存于尺VAlatc:保存液（用于核酸检测的评本方可压这种方法，无法再进行原分离检测），样品倦存液巾保衣的新鲜样品 37℃下稳定保存 1 d,18 ℃～~25 ℃保存7l,2 ℃-~8 C稳定 4虑，一20 ℃永久保存。6.3血液样本保存
模据不同检测月的选取冷藏保存或加应的抗凝剂保存,详见资料性附录A。7安全防护要求
7.1现场采集的防护要求
7.1.1工作人质应穿自（线）色防护服（连体服）防蚤抹。放（收）来时口线于套，2人1组，可以柜互检查身是否有蚤惑蜱，发现后及时清除。身体暴露部位也可使用驱避剂防护。7.1.2牧夹时,不要用手直接接触鼠。装鼠袋时,动作要快,随即扎紧袋口。对死(自毙)鼠或捕麸口鼻出血的鼠，用大号镊子，装人鼠袋后，外套1个塑料袋。鼠笼捕获的鼠，需连同鼠笼一起装人大号鼠袭。
7.2实验室安全防护要求
7. 2. 1在鼠传疾病疫区采集鼠类样本时。工作人员应经过严格生物安全防护培训,合格后方可进行工作：
7.2.2鼠类样本来集，解剖时工作人员应做好个人防扩，防止被病原体感染或鼠体外寄生虫叮咬，采血及解剖过应按相应病原体生物安全级别在相应的实验率中进行，做好柜应防护。7.2.3开展病原体检测的实验室属专用实验室，其结松厂、防护水平，工作制腰、工作人员着装（个人随护），实验操作规程以及污物处埋和意外事故的处埋都符合相应的规定，详细参照GB1489，wS233。7.3预防接种
工作人员应提前接种相关疫肯。A.1乙二胺四乙酸(EDTA)
附录A
（资料性附录）
常用抗凝剂的制备及用量
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EITA的钠盐或铆盐营在实验中作为抗凝剂，每毫升血样加1.5mg~2.？n多。加EA抗凝剂的新鲜泌冻血浆在一20℃以下可保存1a，A.2免费标准下载网bzxz
草酸盐合剂
草酸铵1.多、草酸钾0.8g、福尔马林1.mL、蒸溜水加至[09tmI.。每毫升血样加0.nmLA.3肝素
20U肥案可抗凝：mL血液，1%肝素落液C.1mL于试管内，旋转试管，使溶液均勾浸湿就管内整，放入80℃~100℃烘箱净干，每管能使5mL0mL血液不。急性血压实验时可在充满生理益水的动脉套管内位入开素2cm~25mg，体内抗整：5coC/kg~10c0C/kgA.4枸酸
配成3%-~5%水溶液，每毫升血样灿0.1nl.：也可直接加粉剂，每毫升血样加3ng~5mg。A.5氟化钠
每毫升血样加 6 rmig 氟花钠。A.6草酸钾
每毫升血样加1 mg-~2 mg草酸钾。或配置成 1c%水溶,低毫升血样加 0.01 mL~0.02 mL。在试管内加饱和草酸卸漆液2漓（或10%溶液0.2㎡L），轻轻敲击试管，使溶被分散到管壁四月：置80 “以下的烘箱中烤干（烘烤温度过高可使草酸钾分解为碳酸钾而失效）,每管能使3nI.～tr:I血液不凝。供钾、钙含最测定的血样不能用草酸钾护凝。5
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B.120%中性甘油盐水
附录B
（资料性附录）
常用组织、脏器保存液的制备及用量中性甘油（化学纯)20:nL、氯化钠0.85g、蒸馅水80 mL混勾后分装，高压火菌。B.250%甘油磷酸盐缓冲液
取等体积的油与等体积的 0, 2 n./L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)混合,调节 2F 即可，00 rL C.2 mul/L磷酸垫缓冲(pH 7.4)具体配方为:0.2 tr:o./L NazHPO,81 mL 和 0.3 mo/LNaHPO.19mL混合：
B.3组织保存液
0.5为水解率蛋口、2%小牛比清、青霉素500LI/mL、铠霉素5CU/mL、制需菌素50L/n.L组成的矮。
B.4RNAlater 保存液
10L/irig组织，灭举后立即将新鲜样品浸人此试剂,RMAlarer可以迅速渗透到经织中，保护RNA完整不技降解，确保下游分析得双的数据真实反应样品的表这信息
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