SC/T 7016.1-2012 鱼类细胞系 第1部分胖头鱥肌肉细胞系(FHM) SC/T7016.1-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

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中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7016.1—2012
鱼类细胞系，
第1部分：胖头肌肉细胞系（FHM）Fish cell lincs-
Part 1 : Fathead monnow cell line (FHM)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：－第I部分：胖头够肌肉细胞系（FFIM)；第2部分：草鱼肾细胞系（CIK)；一一第3部分：草色卵巢细胞系（CO)：一一第4部分：虹鳟性腺细胞系（RTG-2)；---第5部分：鲤I-皮瘤细胞系（EPC)；一一第6部分：大鳞大麻哈鱼肝胎细胞系(CHSE）；—-第7部分：棕酗细胞系（BB)；一第8部分：斑点义尾鲍卵巢细胞系((XX))第9部分：蓝鳃太附鱼细胞系（BF2)；第10部分：狗鱼性腺细胞系（F)：第11部分：虹鳟卧细胞系（R1)；一-第12部分：鲤白血球细胞系（CI.C)：本部分为SC/T7016的第1部分。
本部分按照（GB/T1.1给山的规则起草。SC/T7016.1--2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的贵任。本部分山农业部渔业局提山。
本部分山全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。本部分起草单位：全国水产技术推！总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：孙喜模、张利峰、高降英、徐立蒲、钱冬、刘琪。T
1范围
鱼类细胞系
第1部分：胖头肌肉细胞系(FHM)SC/T7016.1—2012
本部分描述了胖头够肌肉细胞系（fatheadmonncwcellline，FHM)的形态、传代培养条件、生长特性，针对部分负类病毒的缴感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于对胖头够肌肉细胞系的培养、使用和保骤，2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单》适用于木文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
胖头肌肉细胞系fathead mounow cell ine,FHMGravell,M.&R.G.Malshergcn1965年从胖头岁（Pirrephalesprometes）的肌肉组织细胞经原代培养、衍生的连续细胞。
4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞（参见附录A）。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约为10.67um，其中，最大量细跑的峰值卢径约9. 36 μm （参见附录 B)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴璧生长。
4.3.2对部分水生动物病病原的敏感性FHM对鲤春病毒血症病毒（Springviracmiaofcatpvirus，SVCV)、传染性造血器官坏死病毒（Infectious haematopoictic nccrosisvirus,IIINV)、病毒性治血性败血症病毒（Viral haeoprhagicsepticaemia：VIISV）、流行性造血器官坏死病毒（Epizootichacmatopoieticnecrosisvirus.EHNV）等病毒敏感接种后的CFF形态参见附录 A。5主要材料与仪器设备
应符合GB/T6682中一级水的规定。5.2细胞培养液
SC/T 7016.1—2012
主要成分见℃1.
5.3细胞消化液
主要成分及其含量见C.2。
5.4仪器设备
主要包括：
生化培养箱、超净工.作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备；一-倒置显微镜；
一血球计数板或电子细胞计数仪：一细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6. 1 培养温度
细胞置于生化培养箱内，在15℃～28%下培养，其最适生长温度为25%℃。6.2培养液plI
7. 2 ~~7. 6 .
7细胞传代和保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
在超净工作台内、无菌环境下吸弃长满单层FHM的细胞培养瓶中的F培养液。7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分散细胞，沿细胞培养瓶侧加人细胞消化溉，一般在50ml.培养瓶中加人5ml.或接细跑培养瓶培养而每平方厘米加人0.1nl~-U.2mL，加入量必须究全浸没细胞层。贴壁长满的 FIIM 消化时间一--般为1 min-~3 min,细胞开始呈雾状之后吸充细胞消化液,轻轻拍打细胞培养瓶以分散细胞。
7.1.3更换细胞生长液与稀释
将消化液吸弃后,在 50 ml.细胞培养瓶中加人 10 ml,--15 ml.细胞培养液(见 C. J),按每瓶 5 ml分成2瓶～3瓶,使细胞浓度达到1×105个/rml分瓶底8h内.细跑贴壁并生长；18h后能长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶按培养面每平方厘米加人0.1 ml.～0.2 ml.的细胞培养液。7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7.2.1.1温度与关数
传代后的FHM细胞经25℃:下24h的培养后，移人生化培养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存45d,20℃F可保有30d~~45d。
7.2.1.2保藏液pH
7. 2-~7. 6。
7.2.2液氨冻存
保利时可在液氮中冻存：细胞冻存液十需要加入10%的二甲基亚砜（DMSO）作为保护剂，其胎牛血清浓度应为20%。保种细胞经程序降湿后放人液氮中。2
8传代细胞的质量控制
传代细胞的质量检查包括：
SC/T7016.1—2012
--培养的FHM,依4.3.2的要求在一年内至少要进行次病毒嫩撼谱的检测，其接种后的CPE形态参见附录A；
—在移入生化培养箱的第二天而倒置显微镜观察细胞形态、生长情况.并连续观察7d~10d；：一可根据培养液中酚红的颜色判定培养液的pH是否保持在7.2~7.6：：一细胞培养液混浊或出现丝状物时，视为细菌或真菌污染SC/T 7016.1—2012
附录A
[资料性附录】
FHM 及其接种病毒产生的 CPE形态图A.1长满单层正常的 FHM见图 A. 1。图 A,1长满单层正常的 FHM(左:相差;右:普通光场)A.2FHM在接种SVCV后出现的CPE见图A.2A.3 FHM 在接种 FIINV 后形成的空斑形态见图 A. 3。8
图A.2FIIM在接种 SVCV后出现的CIEA. 4FHM 在接种 IHVV 后出现的 CPE 见图 A. 4。A.5 FIIM在接种 VHSV 店出现的 CPE见图 A. 5。图 A.3FHM在接种 FHNV后形成的空斑形态图 A 4 FHM 在接种 [HNV 后出现的 CIESC/T7016.1—2012
图 A. 5FHM 在接种 VHSV 后出现的 CPF5
SC/T 7016. 1--2012
附录B
(资料性附录)
细胞实时分析系统测定的悬浮FHM特性细胞实时分析系统（CASYTT)测定的悬浮FHM特性B.1
见图B.1。
细胞径（μm）
细胞实时分析系统（CASYIT)测定的悬浮FHM特性图B.1
B.2悬浮FHM检测参数
细胞计数：16524个：
平均体积：806.0fL;
体积蜂值：429.0fT.；
平均直径：10.67μm
直径峰值：9.36μm。
C.1细胞培养液
附录C
(规范性附录)
试剂配制
SC/T 7016.1—2012
根据Mcdium199培养基（含Earle's平衡盐溶液）说明书要求，在容器中加人适量的水，许将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌边加入199培养基（含Earle's平衡盐溶波）干粉。当充分搅句勾和溶解后，加人10%经56℃30min灭活的胎牛证清：用粉状NaHCX调节培养被的pH至7.2~7.4尽快过滤除菌，分装后一20%保存。
细胞消化液
Na.IP0,1212O
1000 ml
在1L水中依次人以上试剂,并加人NaIICO.0.4-0.6g。因 pH7.4附EDTA难溶,必须将pH调至7.4~～8.0。充分搅拌至完全溶解后过滤除菌，分装后-20℃保存。t
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