SC/T 7016.2-2012 鱼类细胞系 第2部分草鱼肾细胞系(CIK) SC/T7016.2-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7016.2-2012
鱼类细胞系
第2部分：草鱼肾细胞系（CIK）Fish cell lines-
Part 2:Grass carp kidney cell line (CiK)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：一第1部分：胖头够肌肉细胞系（FHM)；一：第2部分：节鱼肾细胞系（CIK)：：第3部分：草鱼卵巢细胞系(C())；：一第4部分：虹鳝性腺细胞系（RTG·2)；一-第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC)；第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系（CHSE)：第7部分：棕酗细胞系(BB)；
第8部分:斑点叉尾阐卵巢细胞系(CCO);——-第9部分：监鳃太阳鱼细胞系（BF-2)：一第10部分：狗鱼性腺细胞系（PG)；-第1I部分：虹鳟肝细胞系（RI)第12部分：鲤白血球细胞系(CLC)）本部分为 SC/T 7016 的第 2部分，本部分按照GB/T1.1给出的规则起草。SC/T 7016. 2—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提山。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/\TC：156)归口。本部分起草单位：全国水产技术摊总站、深圳用入境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平兰文升、高隆英、张利峰、徐立蒲、钱冬、刘琪。1范围
鱼类细胞系
第2部分：草鱼肾细胞系（CIK）SC/ T 70 16. 2—2012
本部分描述了草鱼细胞系（grasscarpkidneycell Iine，CIK>的形态.传代培养条件、生长特性，对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适H于草鱼肾细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适丁本文件，GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
草鱼肾细胞系grass carp kidney cell line,CLK左文功、钱华鑫1984年从草鱼（Ctenopharyngodonzdelta）肾组织细胞经原代培养、衍生的连续细胞。
4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为成纤维样细胞（参见图A.1)。4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞态浮后的平均直径约11.15um，其中最人最细胞的峰值直径约9. 63 μm (参见R. 2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁生长。
4.3.2对部分水生动物病病原的敏感性CIK主要对水生呼肠孤病毒即草鱼山血病病毒（Grasscarprcovirus，GCRV：或者称Grasscarphcmarrhagicvirus,GCIIV）,呼肠孤病毒（Threadfin reovirus，TFV）病毒嫩感，接种后的CFE形态参见图A.2。
5主要材料与仪器设备
应符合GB/T6682中一级水的规定。5.2细胞培养液
主要成分见附录 C. 1.
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5.3细胞消化液
主要成分及其含最见附录C.2。
5.4仪器设备
主要包括：
生化培养箱、超工作台、真空泵和废液瓶等培养细跑所用的设备：倒置品微镜：
血球计数板或电子细胞计数仪：一一细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6. 1 培养温度
细胞置于生化培养箱内，在15℃~28℃下培养，其最适生长温度为25℃。6.2培养液pH
7. 2-~7. 6。
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
在超工作台内，无菌坏境下吸弃长满单层CIK细胞培养瓶中的旧培养液。7. 1.2 消化细胞
用细胞消化液消化分故细胞。沿细胞培养瓶一侧加人细胞消化液，一般在50mL培养瓶中加人5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1Inl~0.2ml,加人量必须完全浸没细胞层。贴壁长满的CIK消化时问一般为上.5min~3imin,细胞升始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打细胞培养瓶以分散细胞，
7.1.3更换细胞生长液与稀释
将消化液吸弃后,在is0mL纽胞培养瓶中加人 10miL-15mL细胞培养液（见 ℃1),按每瓶 5ml分成2瓶～3瓶：使细跑浓度保持在1×10个/ml。分瓶后在25℃下磨养8h内细胞贴壁并牛长；18h后能长满单层细胞；不同规格的细胞培养瓶按培养面每平方匣米加入0.1mL.0.2mL的细胞培养液。7.1.4细胞的传代周期
缅胞长满单层5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保戴条件
7.2.1.1温度与天数
传代后的CIK经25培养24h后，移人生化培养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30d以J:,20℃下可保存20d～30d.
7.2. 1.2保藏液pH
7.2~-7. 6。
7.2.2液氮冻存
保种时也可在液氮中冻存，细胞冻存液4需要加人10%的二甲基亚旗（DMS))作为保护剂.其胎牛血清浓度应为20%，保种细胞经程序降温店放人液氮中。8传代细胞的质量检查
传代细跑的质录检包括：Www.bzxZ.net
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一一培养的CIK,依4.3.2在一年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的 CPE形态参见附录A
一一在移人生化培养箱的第二天用倒置显微镜观察细胞形态、生长情况，并连续观察7d～10d;-一可根据培养液中酚红的额色判定培养液的pH是否保持在7.2～7.6；一-细胞培养液漏浊或出现丝状物时，视为细菌或真菌污染SC/T7016.2—2012
附录A
（资料性附录）
CIK及其接种病毒产生的CPE以及空斑形态图A1长满单层正常的CIK见图A.1
ARDPUBLISN
A.2CIK在接科
RESEARCR ENTER
图A.2CIK在接种CCRVGV873)后出现的CPEA3CIK在接种GCRV后形成的空斑形态见图A.3。图A.3CIK在接种GCRV后形成的空斑形态SC/T7016.2—2012
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附录R
(资料性附录)
细胞实时分析系统测定悬浮 CTK特性B. 1 细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 CIK 特性见图B.1。
B.2悬浮 CIK检测参数
细胞计数：18 282个：
乎均体积：895.5f；
体积值：467.5fl.；
平均直径：11.15um；
直径峰值：9.63μm，
细胞直径()
细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 CIK 特性45
C1细胞培养液
附录C
[规范性附录]
试剂配制
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椒据Mcdiun199培养基（含Farlcs平衡盐溶液说明要求，在容器中加人适量的水，并将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌边加人199培养基（含Earle平衡盐溶液）干粉。当充分揽勾和溶解后，加人10%经56℃ 30min灭活的胎牛血清。用粉状NaHCO,调节培养液的pH至7.2~～7.4。尽快过滤除菌，分装后一20%保存。
C.2细胞消化液
NaHPO,12H20
在1L水中依次加人以上试剂，并加入N2HCO,0.4g～0.6%。因pH7.4时FDTA摊溶，必须将pII调至7.4～8.0，充分搅拌至完全溶解后，过滤除菌并分装后一20℃保存。
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