SC/T 7016.5-2012 鱼类细胞系 第5部分鲤上皮瘤细胞系(EPC) SC/T7016.5-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7016.5—2012
鱼类细胞系，
第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC）Fish cell lines-
Part 5 : Epithelioma papulosun cyprini cell line (EPC)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7016《鱼类细胞系分为下列部分：第1部分：胖头鳃肌肉细胞系(FHM)；第2部分：草鱼肾细胞系(CIK）；一第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO)；—第1部分;虹鳟性腺细胞系（RTG-2)；一第5部分;鲤上皮瘤细胞系（EPC)：第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSF)：—第7部分：棕缅细胞系（BB)；—第8部分;斑点义尾卵巢细胞系(CCO);第9部分：蓝鳃太鱼细胞系(BF-2);第10部分：狗鱼性腺细胞系（FG)；第1I部分：虹鳟肝细胞系(RI);
第12部分:鲤白血球细胞系(CLC)；ttt
本部分为SC/T7016的第5部分
本部分按照GB/TI.I给出的规则起草。SC/T7016.5—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承扣识别这些专利的责任本部分由农业部渔业局提山。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：个国水产技术摧广总站，深圳出人境检验检疫局，本部分王要起草人：陈爱平、土姝、兰文升、张利肇、高隆英、沈锦上、李乐。1
1范围
鱼类细胞系
第5部分：鲤上皮瘤细胞系(EPC
SC/T7016.5—2012
本标准描述了链上皮瘤细胞系（Epitheliomapapulosumcyprinicelllinc，EPC）的形态、传代培养条件、生长特性，针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本标准适用于鲤上皮瘤细胞系的培养、使用和保藏2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用十本文件。GB/T6682分析实验案用水规格和试验方法3术语和定义
鲤上皮瘤细胞系epitheliomapapalosumcyprinicellline，EPCFijanN等人1983年从鲤(Cyprinuscarpio）的上皮瘤细胞经原代培养、牛的连续细删系。4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞(参见图A.1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约11.19um,其中最大量细胞的峰值直径约9.55(参见 B, 2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁生长
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性EPC对鲤睿病毒血症病毒（Springviracmiaofcarpvirus,SVCV）.传染性造血器官坏死病毒（Infectious hacmatopoictic nccrasis virus,IINV),流行性造血器它坏死病毒(Epizootie haealupoieticnccrosis virus,EIINV)、病毒性出血性败血症病毒（Viral haemorrhagic septicaemia virus，VHSV)等病毒敏感,接种后的 CPE形念参见附录 A。5主要材料与仪器设备
应符合GB/T 6682中级水的规定。5.2细胞培养液
主要成分见附录（1
SC/T 7016. 5—2012
5.3细胞消化液
十要成分及其最见,C.2。
5. 4 血清
胎牛而清。
5.5仪器设备
主要包括：
牛化培养箱、超净工作台、真空和废液瓶等培养细胞所用的设备；一一倒置显微镜；
一血球计数板或子细胞计数仪；一一细胞培养瓶、移渡器或洗耳球以及移被管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
细胞置于生化培养箱内，在15℃-～27℃下培养，最适生长温度为25℃。6.2培养液pH
7. 2~-7. 6。
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净作台内，无菌环境下啵弃长满单层心组胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加人细胞消化液，般在50，细胞培养瓶巾加入5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加入0.1tmL~-0.2IniL，加入量必须光全浸没细胞层。贴壁长满的EPC消化时问一般为］min～3min,细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液.轻轻拍打培养瓶以分散细胞，
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸弃后，在50nL.细胞培养瓶中加入10mlL~15mL纽胞培养滋（C.1),按每瓶5ml.分成2瓶~3瓶，使细胞终浓度达到×10'个/ml，分瓶后在25℃下培养，8h内细胞贴壁并生长；18h店能基本长满单层纲胞。不同规格的细跑培养瓶，按培养两每平方厘米加人0,1ml-~0.2m的细胞培养液。
7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层5后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7. 2. 1. 1 温度与天数
传代后的EP经25℃！24l的培养后，移人牛化培养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30l以上，20%下保存20d~30d。
7.2.1.2保藏液pH
7.2~-7. 6.
7.2.2液氮冻存
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保种也可在液氮中冻存。细胞冻存液中需要加人10%的二甲基亚砜（DMS(》作为保护剂，其胎牛血清浓度应为20%.保种细胞应经程序降温后放入液氮中传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
培养的EPC,依4.3.2在一年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的（PE形态参见附录A，
在移人生化培养箱的第二天用倒置显微镜观察细胞形态，牛长情况，并连续观察7d-～10d-可按培养液中酚红的颜色判定培养液的pH足否保特在7.2~~7.6；-细胞培养液混浊或出现丝状物时，视为细菌或其菌污染。3
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附录A
【资料性附录”
EPC及其接种病毒产生的CPE形态图A.1长满单层正带的FPC见图A.1.图 A. 1长满单层正常的 EPC
A.2EIC在接种 SVCV后出现的CPE见图 A 2A.3EIC在接种VHSV出现的CPE见图A.3。图A.2EIC在接种SVCV后出现的CPE图A.3EPC在接种VHSY后出现的CPEA.4EPC在接种 IHVV后出现的 CPE见图A.4.图 A 4 病变初期 EPC 在接种 IHNV 后出现的CPE
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图A5病变后期EIC在接种IHNV后出现的CPE
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附录B
【资料性附录】
细胞实时分析系统测定的悬浮EPC特性B. 1 细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 EPC 特性图 B、1。
细胞数
（个/mL）
细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 EPC特性图B.1
忌浮EPC检测参数
细跑计数：17790个；
平均体积：9067fL；
体积峰值：456.6 fL
平均点径：11.19m；
直径峰值：9.55 μmz
细胞直径（）
C.1细胞培养液
附录C
(规范性附录）
试剂配制
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按Mediurnl99培养基说明·[要求，在容器中加入适量的一级水，并将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌边加入199培养基干粉。当充分揽勾和溶解后，入10%经56℃30min灭活的胎牛血清：用NaHCO粉末调节培养液的pH至7.27.1。尽快过滤除菌，分装后-20℃保存。C 2免费标准下载网bzxz
细胞消化液
Na HPO,12H20
在1L水中顺序加人以上试剂，并加人NaHC)0.4g-~0.6g。因pII<7.4时EDTA难溶，必须将pH谢节至7.4-~8.0。充分搅拌全完全溶解后，过滤除菌并分装一20%℃保存、7
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