SC/T 7016.6-2012 鱼类细胞系 第6部分大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE) SC/T7016.6-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7016.6-2012
鱼类细胞系
第6部分：大鳞大麻哈鱼
胚胎细胞系(CHSE）
Fish cell lines-
Part 6: Chinook salmon embryo cell line(CHSE)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：--第1部分：胖头肌肉细鹃条(FHM)：第2部分：草鱼肾细胞系(CIK)；一一-第3部分：草鱼卵巢缅胞系（(X))：---第4部分：虹鳟性腺细胞系（RT-2）：一第5部分：鲤上皮瘤细胞系(EPC)；第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)；一第7部分：棕鲷细胞系（BB)；一一第8部分：斑点义尾鲫卵巢细胞系(CCO)；一-第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2)；：第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG)；第11部分：虹月细胞系(R1)：
-第12部分：鯉白血球细胞系(CLC)；本部分为SC/T7016的第6部分。
本部分按照GB/T1.1给出的规则起草。SC/T 7016. 6—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分出农业部渔业局提出山。本部分出全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平、高隆英、张利峰、正妹、钱冬、陈艳。1范
鱼类细胞系
SC/T7016.6—2012
第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系（CIISE）本部分描述了大鳞大嘛哈鱼距胎细胞系（chinaok salrnor ermbryo cell line，(IISF)的形态、传化培养条件、生长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应而是必不可少的。凡是注日期的用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方泌3术语和定义
大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系chinaok salmkon embryo cell line,CHSELannan（.N.，WintonJ.R.和FrycrJ.L，1984年从大鳞大麻哈鱼（Oncorhynchuskisuteh）的胚胎细胞经原代培养，衍牛的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞（参见图A.1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约10.71um其中最大量细胞的峰值直径约9.52μn(参见B 2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
站壁生长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性CHISE对流行性造血器官坏死病毒(Epizontic haernatopoicticnccrosisvirus,FIIVV)、传染性胰环死病毒(Infectiruspacrcatic nccrosisviriis,IPVV)等病毒敏感，接种后的CPE形态参见附录A,5主要材料与仪器设备
应符台GB/T 6682中：级水的规。5.2细胞培养液
主要成分见 C.1。
5.3细胞消化液
主要成分及其含鼠见C.2。
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5.4血清
胎牛血清。
5.5收器设备
主要包括：
生化培养箱、超净工作台、真空泵和魔液瓶等培养纫胞所用的设备；-——倒置显微镜；
血球计数板或电子细胞计数仪；、一-细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
细胞置于生化培养箱内，在15℃～22℃下培养.最适牛长温度为20℃。6.2培养液pH
7. 2~-7. 6。
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净工作台内，无菌环境下吸弃长满单层IISE细胞境养瓶中的旧境养，7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分蔽细胞，沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液，一般在50mL细胞培养瓶中加人5mL左右或按细跑培养瓶培养而每平方厘米加入0.1ml~0.2ml.加人量必须完全浸没细胞层。贴壁长满的CIISE消化时间一般为1.5 min ~5 min,细跑π始晕露状之后吸弃细胞消化液：轻轻拍打培养瓶以分撤细胞。
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸弃后：在 50 ml.细胞培养瓶中,加人10 ml.~15ml,细胞培养液(C.1),按每瓶5m.分成2瓶-~3瓶，使细胞终浓度达到1×10″个/mL，分瓶后在20℃下培养，18h内细胞贴壁并生长,24h后能本本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶，培养而每平方厘米加人0.1m.-0.2ml.的细胞培养液。
7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层5后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7.2.1.1温度与天数
传代后的CHSE经20℃24h的培养后，移入生化培养箱15℃或20℃保。在15℃下可保存45d以,20℃下可保存30d以上。
7.2.1.2保藏液pII
7.2~-7.6.
7.2.2液氮冻存
保种也可在液氮中冻存。细胞冻存液中露要加.入10为二甲基亚磁(DMS(》作为保护剂，其胎牛血清浓度应为20%,保种细胞应经程序降温后放人液氮中。2
8传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
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一培养的CIISE，依4.3.2在一年内至少要进行-次病毒敏感谱的检测，其接种后的CPE形态参见附录A；
在移入牛化培养箱的第二天用倒置显微镜观察细胞形态、生长情况，并连续观察7d-~10d；-可按培养液中酚红的颜色判定培养被的pH是否保持在7.2~7.6：-细胞培养液混浊或山现丝状物时，视为细菌或真菌污染，3
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附录A
（资料性附录）
CHSE及其接种病毒产生的CPE形态图A.1长满单层正常的CHSE见图A
A.2CIHISE在
接种工
长满单层正常的CHSE
REBEARO CENTER
图A.2CHSE在接种IPNV后出现的CPEA.3CHSE在接种EHNV后出现的CPE见图A.3。图A.3CIHISE在接种EHNV后出现的CPESC/T7016.62012
SC/T 7016.6--2012
附录B
(资料性附录）
细胞实时分析系统测定的悬浮CHSE特性B.1细胞实时分析系统(CASYTT)测定的悬浮CIISE特性图 B. 1
细胞径(n)
细胞实时分析系统(CASYTT)测定的悬浮CHSE特性图B.1
2悬浮CHSE检测参数
细胞数：15 604个;
平均体积：7476[L；
体积峰值：451.8II；
平均直径：1.0.71am；
直径峰俏:9.52 μm。
C1细胞培养液
附录C
（规范性附录
试剂配制
SC/T 7016. 6—20 12
按Mcdium199培养基说明书要求，在容解中入适量的一级水，并将容器放到磁力揽胖器上，边搅拌边加人199培养基干粉。当充分搅勾和率解后，加人10%经5630min灭活的胎牛血清：用NaHCO,粉末调节培养液的pH至7.2～7.4。尽快过滤除菌，分装后-20C保存。C.2细胞消化液
NazHPO,12H20
1000InL
在 1L水中顺I人以 1:试剂,并加人 NaHCO 0. 4 g~-0, 6 g。因 μH7. 4 时 EITA难溶,必须将pH调至7.4～8.0，充分搅拌至完全溶解后，过滤除菌并分装，一20℃保存。
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