SC/T 7016.7-2012
基本信息
标准号： SC/T 7016.7-2012
中文名称：鱼类细胞系 第7部分棕鮰细胞系(BB)
标准类别：水产行业标准(SC)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
相关单位信息
标准简介
SC/T 7016.7-2012 鱼类细胞系 第7部分棕鮰细胞系(BB)
SC/T7016.7-2012
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标准内容
ICS 65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7016.7-2012
鱼类细胞系
第7部分：棕鲷细胞系（BB）
Fish cell lines-
Part 7: Brown bullhead cell line (RB)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：第1部分：胖头够肌肉细胞系（FHM)；第2部分：草鱼肾细胞系（CIK)；第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO)；-第4部分：虹尊性腺细胞系（RTG-2)：第5部分：鲤上皮瘤细胞系（FPC)；第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)；！
第7部分：棕酬纽胞系(BI3)；
第8部分：斑点叉尾卵巢细胞系(CCO)；第9部分：蓝鳃太阳色细胞系(BF-2)；第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG)：第11部分：虹鳟肝细胞系（R1)
第12部分：鲤白血球细胞系（CLC)；.......
本部分为SC/T7016的第7部分，
本部分按照（B/T1.1给出的规则起草。SC/T 7016. 7—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本部分由农业部渔业局提出。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：高隆英、陈爱平、张利峰、王姝、沈锦天、李乐。1
1范围
鱼类细胞系
第7部分：棕鲫细胞系(BB）
SC/T7016.7—2012
本部分描述了棕细细胞系（brownbullheadcellline，BB)的形态、传代培养条件、牛长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。木部分适用于棕细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对下本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注口期的版本适用丁本文件。凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方泌3术语和定义
棕鲫细胞系browubulIheadcell line，BBCerini C.P.和MalsbergerR.G.1962年从棕（Ictaturts nebutosus）的结缔组织和肌L肉细胞经原代培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞（参见图A1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约16.10Hm，其中最大量细胞的峰值直径药14.27μrn(参见R.2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁生长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性BB主要对斑点叉尾病毒(Chalitel catfish virus，CCV）敏感，接种后的CIPE形态参见图A.2。5主要材料与仪器设备
应符合CB/T 6682中一级水的规定。5.2细胞培养液
主要成分见C.1。
5.3细胞消化液
主要成分及其含量见C.2。
SC/T 7016.72012
5.4血清
胎牛血清。
5.5仪器设备
主要包括：
生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备：倒置京微镜：
血球计数板或电子细胞计数仪；细胞培养瓶，移液器或洗耳球以及穆液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
缅胞置于生化培养箱内.在15℃～27℃下培养，最适生长温度为25℃。6. 2 培养液 pII
7. 2~-7. 6。
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净T作台内、无菌环境下吸弃长满单层BB细胞培养瓶中的旧培养液，7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶·侧加入细胞消化液，一般在50ml.细胞培养瓶中加入5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL~0).2ml.,加人量必须完全没细胞层。贴壁长满的BB消化时间一般为2min~1Iin，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分蔽细孢。
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸弃后,在心ml细胞培养瓶中,加入10rL~15ml.细胞培养液(C.1).按每瓶5ml.分成2瓶～3瓶，使细炮终浓度达到1×105个/ml。分瓶后在25℃培养8h内细胞贴壁并生长；18h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶，按培养而每平方埋米加人0.1mL~-0.2mL 的胞培养液。
7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层并在5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7. 2. 1 保藏条件
7.2.1.1温度与天数
传代后的3B经25℃24h的培养后，移人生化培养籍15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30d以F,20℃下可保存20d左右，
7.2.1.2保藏液pH
7. 2~-7. 6。
7.2.2液氮冻存
保种也可在羧氮中冻存。细胞冻存液中需要加入10%二中基亚(DMS()作为保护剂，其胎牛血清浓度应为20%，保种细胞应经程序降温后放人液氮中。2
8传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
SC/T 7016.7—2012
-培养的BB,依4.3.2在：-年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的CPE形态参见图A.23
-在移人生化培养箱的第二天用衛置显微镜观察细胞形态，牛长情况，并连续观察7d～[0d;可按培养液中酚红的颜色判定塔养液的pH是否保持在7.2-~7.6；-细胞培养液混浊或出现丝状物时，视为细菌或真菌污染。3
SC/T7016.7-—2012
附录A
（资料性附录）
BB及其接种病毒产生的CPE形态图A.1长满单层正常的BB见图A.1
ADARD PUBL
ISHING
RESEARCH CENTER
A.2BB在接利
长满单层正常的BB
BB在接种CCV后出现的CPE
附录B
(资料性附录)
细胞实时分析系统测定的悬浮BB特性B.1细胞实时分析系统【CASYTT)测定的悬浮BB特性见图B.1
细胞直径（μ.m）
细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 BB 特性图 B. 1
2悬浮BB检测参数
细胞计数：9646个；www.bzxz.net
平均休积：26527
体积峰值：152.6fL；
平均直径：16.10um；
直径峰值：14.27um。
SC/T7016.7—2012
SC/r7016.7—2012
C细胞培养液
(规范性附录）
试剂配制
级水，并将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌按DMEM培养基说明I要求，在容器中加人适量的边加入IMEM培养基下粉。当充分搅勾和解后，加人10%经56℃30min灭活的胎牛血清；用NaHCO,粉末调节培养液的pH至7.2~～7.4。尽快过滤除菌，分装后一20℃保存。C.2细胞消化液
NaHPO12H,O
在1L水中顺序加人以1:试剂，并加人NaHC(0.4g~0,6g。因pH<7.4时EIYTA难溶，必须将PII调至7.4～-8.0。充分搅拌至完余溶解后，过滤除菌并分装，一20℃保存。6
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中华人民共和国水产行业标准
SC/T7016.7-2012
鱼类细胞系
第7部分：棕鲷细胞系（BB）
Fish cell lines-
Part 7: Brown bullhead cell line (RB)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：第1部分：胖头够肌肉细胞系（FHM)；第2部分：草鱼肾细胞系（CIK)；第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO)；-第4部分：虹尊性腺细胞系（RTG-2)：第5部分：鲤上皮瘤细胞系（FPC)；第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)；！
第7部分：棕酬纽胞系(BI3)；
第8部分：斑点叉尾卵巢细胞系(CCO)；第9部分：蓝鳃太阳色细胞系(BF-2)；第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG)：第11部分：虹鳟肝细胞系（R1)
第12部分：鲤白血球细胞系（CLC)；.......
本部分为SC/T7016的第7部分，
本部分按照（B/T1.1给出的规则起草。SC/T 7016. 7—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本部分由农业部渔业局提出。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：高隆英、陈爱平、张利峰、王姝、沈锦天、李乐。1
1范围
鱼类细胞系
第7部分：棕鲫细胞系(BB）
SC/T7016.7—2012
本部分描述了棕细细胞系（brownbullheadcellline，BB)的形态、传代培养条件、牛长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。木部分适用于棕细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对下本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注口期的版本适用丁本文件。凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方泌3术语和定义
棕鲫细胞系browubulIheadcell line，BBCerini C.P.和MalsbergerR.G.1962年从棕（Ictaturts nebutosus）的结缔组织和肌L肉细胞经原代培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞（参见图A1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约16.10Hm，其中最大量细胞的峰值直径药14.27μrn(参见R.2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁生长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性BB主要对斑点叉尾病毒(Chalitel catfish virus，CCV）敏感，接种后的CIPE形态参见图A.2。5主要材料与仪器设备
应符合CB/T 6682中一级水的规定。5.2细胞培养液
主要成分见C.1。
5.3细胞消化液
主要成分及其含量见C.2。
SC/T 7016.72012
5.4血清
胎牛血清。
5.5仪器设备
主要包括：
生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备：倒置京微镜：
血球计数板或电子细胞计数仪；细胞培养瓶，移液器或洗耳球以及穆液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
缅胞置于生化培养箱内.在15℃～27℃下培养，最适生长温度为25℃。6. 2 培养液 pII
7. 2~-7. 6。
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净T作台内、无菌环境下吸弃长满单层BB细胞培养瓶中的旧培养液，7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶·侧加入细胞消化液，一般在50ml.细胞培养瓶中加入5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL~0).2ml.,加人量必须完全没细胞层。贴壁长满的BB消化时间一般为2min~1Iin，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分蔽细孢。
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸弃后,在心ml细胞培养瓶中,加入10rL~15ml.细胞培养液(C.1).按每瓶5ml.分成2瓶～3瓶，使细炮终浓度达到1×105个/ml。分瓶后在25℃培养8h内细胞贴壁并生长；18h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶，按培养而每平方埋米加人0.1mL~-0.2mL 的胞培养液。
7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层并在5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7. 2. 1 保藏条件
7.2.1.1温度与天数
传代后的3B经25℃24h的培养后，移人生化培养籍15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30d以F,20℃下可保存20d左右，
7.2.1.2保藏液pH
7. 2~-7. 6。
7.2.2液氮冻存
保种也可在羧氮中冻存。细胞冻存液中需要加入10%二中基亚(DMS()作为保护剂，其胎牛血清浓度应为20%，保种细胞应经程序降温后放人液氮中。2
8传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
SC/T 7016.7—2012
-培养的BB,依4.3.2在：-年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的CPE形态参见图A.23
-在移人生化培养箱的第二天用衛置显微镜观察细胞形态，牛长情况，并连续观察7d～[0d;可按培养液中酚红的颜色判定塔养液的pH是否保持在7.2-~7.6；-细胞培养液混浊或出现丝状物时，视为细菌或真菌污染。3
SC/T7016.7-—2012
附录A
（资料性附录）
BB及其接种病毒产生的CPE形态图A.1长满单层正常的BB见图A.1
ADARD PUBL
ISHING
RESEARCH CENTER
A.2BB在接利
长满单层正常的BB
BB在接种CCV后出现的CPE
附录B
(资料性附录)
细胞实时分析系统测定的悬浮BB特性B.1细胞实时分析系统【CASYTT)测定的悬浮BB特性见图B.1
细胞直径（μ.m）
细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 BB 特性图 B. 1
2悬浮BB检测参数
细胞计数：9646个；www.bzxz.net
平均休积：26527
体积峰值：152.6fL；
平均直径：16.10um；
直径峰值：14.27um。
SC/T7016.7—2012
SC/r7016.7—2012
C细胞培养液
(规范性附录）
试剂配制
级水，并将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌按DMEM培养基说明I要求，在容器中加人适量的边加入IMEM培养基下粉。当充分搅勾和解后，加人10%经56℃30min灭活的胎牛血清；用NaHCO,粉末调节培养液的pH至7.2~～7.4。尽快过滤除菌，分装后一20℃保存。C.2细胞消化液
NaHPO12H,O
在1L水中顺序加人以1:试剂，并加人NaHC(0.4g~0,6g。因pH<7.4时EIYTA难溶，必须将PII调至7.4～-8.0。充分搅拌至完余溶解后，过滤除菌并分装，一20℃保存。6
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。