SC/T 7016.8-2012 鱼类细胞系 第8部分斑点叉尾鮰卵巢细胞系(CCO) SC/T7016.8-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7016.8--2012
鱼类细胞系
第8部分：斑点叉尾鱼回卵巢细胞系（CCO）Fish cell lines
Part 8: Channel catfish ovary cell line(CCO)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T7016《鱼炎细胞系》分为下列部分：一第1部分：胖头够肌肉细胞系（FHIM)-一第2部分：草鱼肾细胞系（CIK)；第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO)，第4部分：虹鳟性腺红胞系（RTG-2)第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC)：第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)：-第7部分：棕鲫细胞系（BB)：
第8部分：斑点艾尾師卵巢细胞系(C()；第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系（BF-2）第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG)；一-第11部分：虹鳟肝细胞系(R1);第12部分：鲤白血球细胞系(CLC)；本部分为SC/T7016的第8部分。
本部分接照GB/T 1.1给出的规则起节。SC/T7016.8—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扣识别这些专利的贵任，本部分中农业部渔业局提出。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位全国水产技术推广总站、深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：高隆英、陈爱平、张利峰、王妹、沈锦玉，李乐。1范围
鱼类细胞系
第8部分：斑点叉尾鲍卵巢细胞系（CCO)）SC/T 7016. 82012Www.bzxZ.net
本部分描述了斑点义尾卵巢细胞系(channelcatfishovaryccllinc,CcO)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于斑点义尾细卵巢细胞系的培养使用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件，仅注月期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件，GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
斑点叉尾網卵巢细胞系channelcatrishovarycelllinc,CCoBowscrP.R.和PlumbJ.A.1980年从班点叉尾（Parasilurusa.sotus）的卵巢组织细胞经原代培养、衍牛的连续细胞系。
4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞（参见图A.1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约 16.22 μml;其中最大量细跑的峰值直径约13.24μm（参见B.2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁生长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性CCO主要对斑点义尾病毒(Channelcatfish virus,CV)嫩感，接种后的CPE形态参见图A.2。5主要材料与仪器设备
应符合（B/T6682中一级水的规定。5.2细胞培养液
主要成分见.1。
5.3细胞消化液
主要成分及其含量见（.2。
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5.4 血清
胎牛而清。
5.5仪器设备
主要包括：
一一生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备一-倒置显微镜；
一血球计数板或电子细胞计数仪：细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
细胞置于生化培养箱内在15℃~27%下培养，最适生长温度为25℃6.2培养液pH
7. 2~-7. 6,
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净.作台内，无菌环境下吸奔长满单层（C0)细胞培养瓶[的旧培养液。7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分微细胞。沿细胞培养瓶-侧加人细胞消化液，一般在50mL纫胞培养瓶中加人5ml.左右或按细胞培养瓶培养向每平方厘米加人0.1ml.0.2ml，加人量必须完全没没细胞层，贴壁长满的cco消化间一般为1.5nin~3min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞：
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸弃后，在50mL细炮培养瓶中，加入10mL~15ml.细胞培养液（C1），按每瓶5mL分成2瓶~3瓶使细胞终浓度达到1×10个/ml。分瓶后在25℃培养，8h内细胞贴壁并生长；18h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶，接培养面每平方厘米加人0.1mL~0.2tmL.的细胞培养液。
7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7. 2. 1. 1 温度与天数
传代后的CX>经25℃24h的培养后，移人/化培养箱15℃或20℃保藏。在15%下可保存20d以上，20C下可保存15d～20d.
7.2.1.2保藏液pH
7. 2~7. 6.
7.2.2液氮冻存
保种也可在液氮中冻存。细胞冻存液中需要加入10%一甲基亚研（DMS())作为保护剂，其胎牛血清浓度应为20%，保种细胞应经程序降温店放人液氮中。2
3传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
SC/T7016.8—2012
一培养的CCO,依4.3.2在一年内至少要进行一次病毒嫩感谱的检测，其接种后的CPE形态参见图A.2；
在移入生化培养箱的第二大用倒置显微镜观察细胞形态、生长情况，并连续观察7cl～10山，一可按培养液中酚红的颜色判定培养液的pII是否保持在7.2~~7.6；一细胞培养液混浊或出现丝状物时，视为细菌或真菌污染。3
SC/T7016.8—2012
附录A
（资料性附录）
CCO及其接种病毒产生的CPE形态图A1长满单层正常的CCO见图A.
A.2CCO在接利
图A2CCO在接种CCV后出现的CPE
SSEARCH CENT
附录B
【资料性附录】
细胞实时分析系统(CASYTT)测定的悬浮CCO特性B.1细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 CCO特性觉图B.1。
细驰直径(um）
图 B. 1细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 CCO 特性B.2
悬浮CO检测数
细胞计数：9605个；
平均体积：2652L；
体积峰值：298.6；
平均直径：16.22μm；
直径峰俏：13.24um.
SC/T 7016. 8—2012
SC/T 7016.8—2012
C1细胞培养液
附录心
(规范性附录】
试剂配制
按DMEM培养基说明书要求.在容器中加人适量的一级水，并将容器放到磁力搅拌器上，边搅押边加入DMEM培养基干粉。当充分搅匀和溶解后，加人10%经56℃30min灭活的胎牛血清；用NaIIC()粉木调节培养液的pH至7.27.4。尽快过滤除菌分装后一20保存。2细胞消化液
NazHFO4 12H,0
KIIPO,
在1L水中顺序加人以上试剂,并加人NaHCO,U.4g~0.6。内pH<_7.4时ELY1A难溶，必须将pH调至7.1～8.0。充分搅拌至完全溶解后，过滤除菌并分装，一20℃保存。6
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