SC/T 7016.9-2012 鱼类细胞系 第9部分蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2) SC/T7016.9-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7016.9--2012
鱼类细胞系
第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2）Fish cell lines
Part 9: Bluegill fry cell line (BF-2)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：一-第I部分：胖头够肌肉细胞系（FHM)；一第2部分：草鱼肾细胞系（CIK)；第3部分：草鱼卵巢细胞系(C())；第1部分：虹鳞性腺细胞系（RTG-2)：一一第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC）；-第6部分：人鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)：-第7部分：棕鲫细胞系（BB)：
第8部分：斑点叉尾鲍卵巢细胞系(CCO))；一-第9部分：滥鳃太阳色细胞系（BF-2)；-第10部分：狗色性腺细胞系（PG)；第11部分：虹鳟肝细胞系（R1)；一第12部分：輝口血球细胞系（CLC)木部分为SC/T 7016的第9部分。本部分按照GB/T1.1给出的规则起草。SC/T 7016. 9-—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分出农业部渔业局提出。
本部分出全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起卓单位：仑国水产技术推广总站、深圳出境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平，高隆英、张利峰、王静波、钱冬、陈艳，T
1范围
鱼类细胞系
第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系（BF-2)SC/T 7016. 92012
本部分描述了蓝鳃太阳鱼细胞系（bluegill frycell linc，BF-2)的形态、传代培养条件、生长特性、对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质最控制。本部分适用于蓝鳃太阳鱼细胞的培养、使仍和保藏。2规范性引用文件Www.bzxZ.net
下列文件对丁本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡,是不注且期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验片法3术语和定义
蓝鳃太阳鱼细胞系hbluegili fry cell line,BF-2WolrK，和QuitmbyM.C.1966年从蓝鳃太附仕(Lepcrntsmacruchzirus）色苗尾柄部分的组织经原代培养、衍生的连续细胞系。
4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞（参见图 A,1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约12.08um，其中最大量细胞的峰值直径约10.07μm(参见B.2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁生长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性BF-2对传染性造血器官坏死病毒（Infectioushaematopoieticnecrusisvirus，IHNV）、流行性造i器官坏死病毒（Epizoorichactmatopoicienecrosisvirus，EHNV）、病毒性出血性败血症病毒（Viralhaemorrhagiesepticaemiavirus，VIIsV)、传染性胰脏坏死病毒（Infectiouspacreatienecrosisvirus，IPNV）等病毒敏感，接种后的CPE形态参见附录A。5主要材料与仪器设备
应符合GB/T6682中级水的规症。5.2细胞培养液
主要成分见C.1
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5.3细胞消化液
主要成分及其含量见C.2。
5.4血清
胎牛血清。
5.5仪器设备
主要包括：
-生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备；倒置显微镜；
一-血球计数板或电-了细胞计数仪；一细胞培养瓶、移液器或洗.耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
细跑置于生化培养箱内，在15℃～~-27℃下培养，坡适生长温度为25%，6.2培养液pH
7.2~-7.6.
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净工作台内，尤菌环境下吸弃长满单层BF-2细胞培养瓶中的旧培养液，7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分散细胞，浒细炮培养瓶一谢加人细胞消化液，一般在50m细培养瓶中加入5mL在:右或接细胞境养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL～0.2ml..人量必领完全浸没细胞层贴壁长满的BF2消化时间-般为1.5min～3min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻打培差瓶以分散细胞。
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸后.在50mL细胞培养瓶中，加入10mL~15mL细胞培养液（C1)，按每瓶5mL分2瓶~3瓶,使绷胞终液度达到1×105个/mL。分瓶后在25培养,8h内细跑贴壁并牛长；18h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶，按培养而每平方厘米加入0.1L～0.2rnL的细胞培养液，
7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层5d后传代较好。
7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7.2.1.1温度与天数
传代后的BF-2经25℃24h的培养后，移人生化培养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30d以上，20℃下可保存20d~30d.
7.2.1.2保藏液p
7. 2 -~7. 6。
7.2.2液氮冻存
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保种也可在液氮中冻存。细胞冻存液中需要加人10%二IF基业碱（LMS())作为保护剂，其胎牛而清浓度应为20%,保种细胞应经程序降温后放入液氮中。8传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
-培养的BF-2,依4.3.2在一年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的CPE形态参见附录A：
-在移人生化培养箱的第二天用倒置显微镜观察细胞形态、生长情况：持续观察7d10d，——可按培养液中酚红的颜色判定培养液的pH是否保持在7.2~-7.6;一细胞培养混浊或山现丝状物时，视为细菌或真菌污染。3
图A.3BF-2在接种IHNV后出现的CPESC/T7016.9—2012
SC/T7016.9—2012
附录A
（资料性附录）
BF-2及其接种病毒产生的CPE形态图A.1长满单层正常的BF-2见图A1
URAL STANDA
A.2BF-2在接种买I
SV后出现的CPE
SRINGRESEARG
ACENTER
图A.2BF-2在接种VHSV后出现的CPEA3BF-2在接种IHNV后出现的CPE见图A.3。SC/T 7016. 9—2012
附录B
(资料性附录)
细胞实时分析系统测定的悬浮F-2特性B.1细胞实时分析系统(CASYTT)测定的悬浮BF-2特性见图.1。
细直径
图 B. 1 细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 BF- 2 特性2悬浮BF-2检测参数
细胞计数：9853个；
平均体积：1317fI：
体积峰值：534.20；
平均直径：12.08μm;
直径峰值：10.07μm
CT细胞培养液
附录C
(规范性附录)
试剂配制
SC/T 7016. 9—2012
按MEM培养基说明要求，在容器中加入适量的级水，并将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌边加人MFM培养基下粉。当充分搅匀和溶解后，加人10%经56℃30min灭活的胎牛血清，用NaHC)粉末调节培养液的pH至7.2～7.4。尽快过滤除菌，分装后一20℃保存。c.2细胞消化液
NazHPO,12H20
1 000 ml.
在 1L水中顺序加人以上试剂,并加人 NaHICO0. 4g～0. 6 g。因 pH7. 4时 EIYrA难溶，必须将PH谢至7.4-~8.0。充分搅排至完全溶解后，过滤除术并分装，一20℃保存
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